Введен в действие постановлением Государственного комитета Российской Федерации по стандартизации и метрологии от 28 апреля 1999 г. N 144
Межгосударственный стандарт ГОСТ 30627.3-98
"ПРОДУКТЫ МОЛОЧНЫЕ ДЛЯ ДЕТСКОГО ПИТАНИЯ. МЕТОД ИЗМЕРЕНИЯ МАССОВОЙ ДОЛИ ВИТАМИНА Е (ТОКОФЕРОЛА)"
Infant milk products. Method for determination of mass part of vitamin E (Tocopheroli)
Дата введения - 1 мая 2000 г.
Введен впервые
Предисловие
1 Разработан МТК 186 и Научно-исследовательским институтом детского питания
Внесен Госстандартом России
2 Принят Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 12 ноября 1998 г. N 14)
За принятие проголосовали:
|
Наименование государства
|
Наименование национального органа по стандартизации
|
|
Азербайджанская Республика
|
Азгосстандарт
|
|
Республика Беларусь
|
Госстандарт Беларуси
|
|
Грузия
|
Грузстандарт
|
|
Киргизская Республика
|
Киргизстандарт
|
|
Республика Молдова
|
Молдовастандарт
|
|
Республика Таджикистан
|
Таджикгосстандарт
|
|
Туркменистан
|
Главная Государственная инспекция Туркменистана
|
|
Республика Узбекистан
|
Узгосстандарт
|
|
Украина
|
Госстандарт Украины
|
3 Постановлением Государственного комитета Российской Федерации по стандартизации и метрологии от 28 апреля 1999 г. N 144 межгосударственный стандарт ГОСТ 30627.3-98 введен в действие непосредственно в качестве государственного стандарта Российской Федерации с 1 мая 2000 г.
4 Введен впервые
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на молочные продукты для детского питания, обогащенные витамином Е (токоферолом), и устанавливает колориметрический метод измерения массовой доли витамина Е.
Метод основан на реакции восстановления токоферолами трехвалентного железа в двухвалентное с образованием окрашенного комплекса двухвалентного железа с ортофенантролином (батофенантролином или α, α -дипиридилом).
2 Нормативные ссылки*
В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 334-73 Бумага масштабно-координатная. Технические условия
ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 3145-84 Часы механические с сигнальным устройством. Общие технические условия
ГОСТ 4147-74 Железо (III) хлорид 6-водный. Технические условия
ГОСТ 4166-76 Натрий сернокислый. Технические условия
ГОСТ 4212-76 Реактивы. Приготовление растворов для колориметрического и нефелометрического анализа
ГОСТ 4919.1-77 Реактивы и особо чистые вещества. Методы приготовления растворов индикаторов
ГОСТ 4919.2-77 Реактивы и особо чистые вещества. Методы приготовления буферных растворов
ГОСТ 5962-67 Спирт этиловый ректификованный. Технические требования
ГОСТ 6552-80 Кислота ортофосфорная. Технические условия
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 8981-78 Эфиры этиловый и нормальный бутиловый уксусной кислоты технические. Технические условия
ГОСТ 9147-80 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия
ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия
ГОСТ 24104-88 Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия
ГОСТ 24363-80 Калия гидроокись. Технические условия
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовки проб к анализу
ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний
ГОСТ 29227-91 Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования
3 Методы отбора проб
Отбор проб и подготовка их к измерению - по ГОСТ 26809.
4 Аппаратура, материалы и реактивы
Баня водяная с обогревом, позволяющая поддерживать температуру от 0 до 100°С с погрешностью ±2°С.
Бумага масштабно-координатная (миллиметровая) по ГОСТ 334.
Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.
Весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104.
Весы лабораторные общего назначения 4-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 500 г по ГОСТ 24104.
Воронки делительные номинальной вместимостью 250 см3 по ГОСТ 25336.
Воронки стеклянные типа В диаметром 56 мм по ГОСТ 25336.
Испаритель ротационный ИР-1М [1]
Колбы мерные исполнения 1 2-го класса точности номинальной вместимостью 50, 100 см3 по ГОСТ 1770.
Колбы типа К исполнения 1 номинальной вместимостью 100 см3 по ГОСТ 25336.
Пипетки исполнений 4, 6, 7 2-го класса точности номинальной вместимостью 1, 2, 5, 10, 25 см3 по ГОСТ 29227.
Пробирки стеклянные типа П4 номинальной вместимостью 10 и 20 см3 по ГОСТ 25336.
Секундомер 2-го класса [2].
Стакан исполнения 3 номинальной вместимостью 1000 см3 по ГОСТ 9147.
Термометр жидкостный (не ртутный) диапазоном измерения 0 - 100°С ценой деления шкалы 1°С по ГОСТ 28498.
Фотометр фотоэлектрический диапазоном измерения 220 - 1100 нм [3] или колориметр фотоэлектрический диапазоном измерения 200 - 2000 нм, диапазоном измерения коэффициента пропускания 100 - 1% [4].
Холодильник обратимый со шлифом и водяным охлаждением по ГОСТ 25336.
Цилиндры исполнения 1 вместимостью 25, 50 см3 по ГОСТ 1770.
Часы 2-го класса по ГОСТ 3145.
Шкаф сушильный лабораторный, обеспечивающий поддержание заданного температурного режима от 50 до 200°С с погрешностью ±2°С.
Эксикатор исполнения 2 по ГОСТ 25336.
Аскорбиновая кислота (витамин С) [5].
Батофенантролин α, α -дипиридил (4, 4-дипиридил) [6].
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Железо треххлорное 6-водное ч. по ГОСТ 4147.
Калия гидроокись х.ч. по ГОСТ 24363.
Натрий сернокислый безводный х.ч. по ГОСТ 4166.
Ортофенантролин [7].
Ортофосфорная кислота ч. по ГОСТ 6552.
Спирт абсолютный [8].
Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962.
Токоферола ацетат (витамин Е ацетат) [9] или масляный раствор массовой концентрации α -токоферола ацетата 300 г/дм3 (с массовой долей α -токоферола ацетата в масле 30%) [10].
Фенолфталеин ч.д.а. [11].
Эфир петролейный [12], перегнанный при температуре (50±10)°С, не содержащий перекисей.
Эфир этиловый по ГОСТ 8981.
Допускается применение других средств измерения с метрологическими характеристиками и оборудования с техническими характеристиками не хуже, а также реактивов и материалов по качеству не ниже вышеуказанных.
Хранение растворов - по ГОСТ 4212.
Хранение реактивов и особо чистых веществ - по ГОСТ 4919.1 и ГОСТ 4919.2.
5 Условия выполнения измерения
Измерение должно проводиться при красном или затемненном свете, в связи с разрушением витамина Е под воздействием ультрафиолетовых лучей.
Работу с эфиром необходимо проводить в вытяжном шкафу и в хорошо вентилируемом помещении.
6 Подготовка к выполнению измерения
6.1 Приготовление спиртового раствора треххлористого железа массовой концентрации 2 мг/см3.
(0, 200±0, 001) г треххлористого железа, взвешенного на весах 2-го класса точности, растворяют в 25 - 50 см3 абсолютного спирта в мерной колбе вместимостью 100 см3, доводят до метки тем же спиртом и перемешивают.
Раствор хранят в склянке из темного стекла при (6±2)°С.
6.2 Приготовление спиртового раствора треххлористого железа массовой концентрации 0, 25 мг/см3
1, 25 см3 раствора треххлористого железа массовой концентрации 2 мг/см3 смешивают с 8, 75 см3 абсолютного спирта и тщательно перемешивают.
Раствор готовят непосредственно перед применением.
6.3 Приготовление раствора молярной концентрации с (H3PO4) = 0, 03 моль/дм3 в абсолютном спирте
(0, 327±0, 001) г ортофосфорной кислоты, взвешенной на весах 2-го класса точности, растворяют в 25 - 50 см3 абсолютного спирта в мерной колбе вместимостью 100 см3, доводят до метки тем же спиртом и перемешивают.
6.4 Приготовление спиртового раствора ортофенантролина или батофенантролина массовой концентрации 1 мг/см3
(0, 100±0, 001) г ортофенантролина, взвешенного на весах 2-го класса точности, растворяют в 25 - 50 см3 абсолютного спирта в мерной колбе вместимостью 100 см3, доводят до метки тем же спиртом и перемешивают.
6.5 Приготовление спиртового раствора α, α -дипиридилa (4, 4-дипиридила) массовой концентрации 5 мг/см3
(0, 500±0, 001) г α, α -дипиридила, взвешенного на весах 2-го класса точности, растворяют в 25 - 50 см3 абсолютного спирта в мерной колбе вместимостью 100 см3, доводят до метки тем же спиртом и перемешивают.
Спиртовые растворы ортофенантролина, батофенантролина и α, α -дипиридила хранят в склянке из темного стекла при (6±2)°С.
6.6 Приготовление спиртового раствора фенолфталеина массовой концентрации 10 мг/см3
(1, 00±0, 04) г фенолфталеина, взвешенного на весах 4-го класса точности, растворяют в 70 см3 этилового спирта в мерной колбе вместимостью 100 см3, добавляют 30 см3 дистилированной воды и перемешивают.
6.7 Приготовление водного раствора гидроокиси калия массовой концентрации 0, 5
(125, 0±0, 1) г гидроокиси калия, взвешенной на весах 4-го класса точности, растворяют в 100 - 150 см3 дистилированной воды в фарфоровом стакане, охлаждают до (20±5)°С, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 250 см3, доводят до метки дистиллированной водой и тщательно перемешивают.
6.8 Обезвоживание сернокислого натрия
Сернокислый натрий высушивают в сушильном шкафу при (150±10)°С 8 - 12 ч. Хранят в эксикаторе.
6.9 Приготовление стандартного раствора α -токоферола
(0, 040 ± 0, 001) г 100%-ного препарата витамина Е, взвешенного на весах 2-го класса точности, растворяют в 50 см3 абсолютного спирта в мерной колбе вместимостью 100 см3 и доводят объем до метки этим же спиртом.
6.9.1 Гидролиз
В круглодонную колбу вместимостью 100 см3 вносят 5 см3 полученного по 6.9 стандартного раствора витамина, добавляют 15 см3 этилового спирта, (0, 10 ± 0, 03) г аскорбиновой кислоты, взвешенной на весах 4-го класса точности, 1 см3 гидроокиси калия массовой концентрации 0, 5 г/см3 и перемешивают. Колбу соединяют с обратным водяным холодильником и выдерживают в кипящей водяной бане (18±2) мин.
6.9.2 Экстракция
По окончании гидролиза содержимое колбы охлаждают до (20 ± 5)°С и количественно переносят в делительную воронку. Колбу ополаскивают 50 см3 дистиллированной воды, воду сливают в ту же воронку.
Признаком полного омыления служит то, что при добавлении воды к смеси муть не образуется. При образовании мути гидролиз повторяют, увеличивая при этом объем щелочи до 2 см3 или время гидролиза до (30 ± 2) мин.
Неомыляемые вещества экстрагируют диэтиловым или петролейным эфиром три раза по 25 см3. После чего нижний (водный) слой отбрасывают.
6.9.3 Промывка
Объединенный эфирный экстракт (верхний слой) переносят в делительную воронку и отмывают от щелочи до нейтральной реакции по фенолфталеину, расходуя при этом 50 - 60 см3 дистиллированной воды.
Промытую эфирную вытяжку фильтруют в сухую круглодонную колбу со шлифом через слой безводного сернокислого натрия (20 - 30 г), не допуская заполнения воронки выше уровня этого слоя. По окончании фильтрования фильтр промывают эфиром объемом не менее 15 см3.
6.9.4 Отгонка растворителя
Колбу с фильтратом подсоединяют к роторному испарителю и отгоняют эфир под вакуумом при температуре водяной бани не более 30°С для диэтилового эфира и не более 50°С - для петролейного эфира.
Неомыляемый остаток растворяют в абсолютном спирте и доводят объем до 100 см3 этим же спиртом.
Если используют препарат витамина Е другой концентрации, то навеску рассчитывают так, чтобы конечная концентрация стандартного раствора (после гидролиза) составляла не менее 20 мкг/см3.
6.9.5 Проверка концентрации стандартного раствора α -токоферола
В полученном растворе определяют массовую концентрацию α -токоферола, измеряя оптическую плотность спиртового раствора при длине волны 292 нм.
Массовую концентрацию α -токоферола ρE, мкг/см3, вычисляют по формуле
ρE=D10000/E,
(1)
где D - оптическая плотность испытуемого раствора при длине волны 292 нм против абсолютного спирта;
10000 - масса α -токоферола в 1 см3 1%-ного раствора, мкг;
Е - удельный показатель поглощения при длине волны 292 нм для 1%-ного раствора α-токоферола в абсолютном спирте, равен 74, 7,
6.9.6 Построение калибровочного графика
В пять пробирок вносят по 0, 25; 0, 5; 0, 75; 1, 0 см3 полученного стандартного раствора и доводят объем в каждой пробирке абсолютным спиртом до 5 см3. В шестую пробирку вносят 5, 0 см3 абсолютного спирта (холостая проба). Затем во все пробирки приливают по 0, 5 см3 раствора ортофенантродина или батофенантролина массовой концентрации 1 мг/см3, или α, α-дипиридила массовой концентрации 5 мг/см3, добавляют 0, 5 см3 раствора треххлористого железа массовой концентрации 0, 25 мг/см3, перемешивают и не более чем через 20 с добавляют 0, 5 см3 раствора ортофосфорной кислоты молярной концентрации с (H3PO4) = 0, 03 моль/дм3 и снова перемешивают. Реакцию проводят с каждой пробиркой отдельно.
Определяют оптическую плотность на колориметре или фотометре при длине волны 490 нм, устанавливая в параллельный световой поток кювету, наполненную абсолютным спиртом.
Для построения калибровочного графика по оси абсцисс откладывают массу α-токоферола от 5 до 20 мкг, а по оси ординат - разность показаний прибора между испытуемым раствором и холостой пробой.
Построение калибровочного графика повторяют при смене прибора или одного из реактивов, необходимых для проведения реакции.
6.10 Щелочной гидролиз продукта
Для жидких и пастообразных продуктов отобранную для анализа пробу прогревают при 37°С 20 - 30 мин и перемешивают для равномерного распределения жира в продукте.
Навеску сухого продукта на гидролиз берут с учетом массовой доли витамина Е в продукте.
|
Массовая доля витамина Е, млн-1
|
Навеска сухого продукта, г
|
|
8, 5 - 15
|
10, 0±0, 4
|
|
15 - 45
|
5, 0±0, 4
|
|
45 - 120
|
2, 0±0, 4
|
Навеска жидкого и пастообразного продукта - (15 ± 0, 01) г.
Навеску помещают в круглодонную колбу роторного испарителя вместимостью 100 см3. К навеске для сухого продукта добавляют (9±1) см3 дистиллированной воды и перемешивают до полного растворения. В круглодонную колбу ротационного испарителя к навеске продукта добавляют 100 - 150 мг аскорбиновой кислоты, взвешенной на весах 4-го класса точности, приливают 40 см3 этилового спирта и, перемешивая, вносят 5 - 7 см3 раствора гидроокиси калия массовой концентрации 0, 5 г/см3.
Колбу соединяют с обратным холодильником и выдерживают при температуре кипения смеси на водяной бане в течение (30±1) мин.
6.11 Экстракция
Экстракцию и последующие операции проводят в соответствии с 6.9.2 - 6.9.4.
Эфирный экстракт помещают в круглодонную колбу вместимостью 250 см3 Эфир выпаривают на ротационном испарителе согласно 6.9.4, а сухой остаток немедленно растворяют в 15 см3 абсолютного спирта.
7 Проведение измерения
Оптическую плотность измеряют на колориметре или фотометре при длине волны 490 нм, устанавливая в параллельный световой поток кювету, наполненную абсолютным спиртом.
1, 0 - 5, 0 см3 полученного раствора (в зависимости от массовой доли витамина Е в продукте) помещают в пробирку, доводят объем раствора до 5 см3 абсолютным спиртом и перемешивают. За тем проводят реакцию согласно 6.9.6. Проводят параллельные измерения в двух пробирках и берут средний результат. В третьей пробирке готовят холостую пробу согласно 6.9.6.
8 Обработка результатов
Массовую долю витамина Е (токоферола) X, млн-1, вычисляют по формуле
,
(2)
где m - масса витамина Е в анализируемом растворе продукта, установленная по калибровочному графику (по разнице показаний оптической плотности между анализируемым раствором и холостой пробой), мкг;
V1 - общий объем анализируемого раствора в абсолютном спирте после экстракции, см3;
V2 - объем спиртового раствора, взятый на проведение цветной реакции, см3;
m1 - масса продукта, взятая на гидролиз, г.
За окончательный результат измерения принимают среднее арифметическое значение результатов двух параллельных измерений. Вычисления проводят до второго десятичного знака и округляют до первого десятичного знака.
Относительная погрешность измерения массовой доли витамина Е - ±20% при доверительной вероятности Р = 0, 95.
Расхождение между результатами двух параллельных измерений не должно превышать 15% среднего арифметического значения результатов измерений.
Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать 20% среднего арифметического значения результатов измерений.
_____________________________
* См. примечание ФГУП "СТАНДАРТИНФОРМ" (с. 9).
Приложение А
(справочное)
Библиография
[I] ТУ 25-11-917-76 Испаритель ротационный ИР-1М
[2] ТУ 25-1819.0021-90 Секундомеры механические "Слава"
[3] ТУ 3-3.2164-89 Фотометр фотоэлектрический КФК-3
[4] ТУ 3-КРАЮ.414216.001-90 Колориметр фотоэлектрический концентрационный КФК-2Ц
[5] ГФ СССР-Х ст. 6 Кислота аскорбиновая
[6] ТУ 6-09-15-139-86 Батофенантролин
[7] ТУ 8П-399-70 Ортофенантролин
[8] ТУ 18-3-2-76 Спирт абсолютный
[9] ГФ СССР-Х ст. 695 Токоферола ацетат (витамина Е ацетат)
[10] ВФС 42-1642 Раствор α-токоферола ацетата 5, 10 или 30% в масле
[11] ТУ 6-09-5360-87 Фенолфталеин
[12] ТУ 6-02-1244-83 Эфир петролейный.
— Все документы — ГОСТы — ГОСТ 30627.3-98 ПРОДУКТЫ МОЛОЧНЫЕ ДЛЯ ДЕТСКОГО ПИТАНИЯ. МЕТОД ИЗМЕРЕНИЯ МАССОВОЙ ДОЛИ ВИТАМИНА Е (ТОКОФЕРОЛА)
Банкир Хотимский объяснил слухи о заморозке вкладов в России идеей застройщиков
Эксперт по ЖКХ Бондарь: За нескошенную траву дачникам грозит штраф до 50 тысяч
Экс-глава ЦБ Дубинин: В России никогда не откажутся от наличных рублей
Комитет ГД поддержал продление на три года эксперимента по исламскому банкингу
Депутат Бессараб: Россияне с зарплатой в конвертах могут остаться без пенсии