Введен в действие постановлением Госстандарта России от 22 декабря 1999 г. N 590-ст
Государственный стандарт РФ ГОСТ Р 51435-99 (ИСО 8128-1-93)
"СОК ЯБЛОЧНЫЙ, СОК ЯБЛОЧНЫЙ КОНЦЕНТРИРОВАННЫЙ И НАПИТКИ, СОДЕРЖАЩИЕ ЯБЛОЧНЫЙ СОК. МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ПАТУЛИНА С ПОМОЩЬЮ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ"
Apple juice, apple juice concentrates and drinks containing apple juice. Method for determination of patulin content using high performance liquid chromatography
Дата введения - 1 января 2001 г.
Введен впервые
1 Область применения
Настоящий стандарт устанавливает метод определения содержания патулина в яблочном соке, концентрированных яблочных соках и напитках, содержащих яблочный сок, с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии.
Предел обнаружения патулина настоящим методом составляет 10 мкг/дм3 при условии, что взятый для анализа объем пробы готового к употреблению сока составляет 5 см3.
2 Сущность метода
Метод основан на экстракции патулина из исследуемой пробы этилацетатом, очистке экстракта перераспределением в водный раствор карбоната натрия и количественном и качественном анализе экстракта с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием спектрофотометрического детектора в ультрафиолетовой области.
3 Реактивы
Используют реактивы аналитической чистоты и воду квалификации "для ВЭЖХ".
3.1 Растворитель: этилацетат.
3.2 Подвижная фаза - раствор ацетонитрила в воде объемной концентрации 10%.
3.3 Экстрагирующий раствор - водный раствор безводного карбоната натрия концентрации 14 г/дм3.
3.4 Ацетатный буфер, рН 4.
Смешивают 16, 4 см3 уксусной кислоты [с (CH3COOH) = 0, 2 моль/дм3] с 3, 6 см3 раствора ацетата натрия [с (CH3COONa) = 0, 2 моль/дм3].
3.5 Уксусная кислота, ледяная.
3.6 Стандартный раствор патулина (C7H6O4).
3.6.1 Приготовление стандартного раствора
Навеску патулина массой 10, 0 мг, взятую с точностью до 0, 1 мг, растворяют в мерной колбе с одной отметкой вместимостью 100 см3 в ацетатном буфере (3.4). Объем содержимого в колбе доводят до метки ацетатным буфером.
Пипеткой переносят 10, 0 см3 приготовленного раствора в другую мерную колбу с одной отметкой вместимостью 100 см3, объем содержимого в колбе доводят до метки ацетатным буфером. Массовая концентрация патулина в приготовленном стандартном растворе составляет около 10 мкг/см3.
Измеряют оптическую плотность стандартного раствора при длине волны 276 нм на подходящем спектрофотометре с использованием кварцевых кювет рабочей длиной 10 мм.
3.6.2 Расчет концентрации стандартного раствора патулина
Концентрацию стандартного раствора патулина (3.6.1) ρps, мкг/см3, вычисляют по формуле
,
(1)
где А - оптическая плотность стандартного раствора патулина;
А276 - молярный показатель поглощения раствора патулина при длине волны 276 нм, дм3·моль-1·см-1 (А276 = 14600);
М - молярная масса патулина, г/моль;
С - постоянная прибора (обычно С = 1).
4 Приборы и лабораторное оборудование
Перед использованием лабораторное оборудование промывают раствором гипохлорита натрия концентрации 10 г/дм3.
Обычное лабораторное оборудование, в частности следующее:
4.1 Жидкостный хроматограф, снабженный спектрофотометрическим детектором в ультрафиолетовой области (пригодным для работы при длине волны 276 нм) и самописцем или интегратором.
4.2 Обращенно-фазовая колонка ODS* или другая аналогичная колонка со следующими параметрами:
- эффективность не менее 35000 теоретических тарелок на метр;
- длина 250 мм;
- внутренний диаметр 4, 6 мм;
- неподвижная фаза размером частиц 5 мкм.
5 Отбор проб
Проба, поступающая в лабораторию, должна быть представительной и без следов порчи или изменения свойств продукта при транспортировании и хранении.
6 Проведение испытаний
6.1 Приготовление испытуемого раствора
При испытаниях концентрированных яблочных соков их разводят водой 1:5 по объему. Дальнейшую процедуру проводят для всех продуктов одинаково, как описано ниже.
6.1.1 Пробу объемом 5, 0 см3 экстрагируют порцией этилацетата объемом 5, 0 см3 (3.1) в течение не менее 1 мин. Экстракцию повторяют еще два раза новыми порциями этилацетата объемом по 5, 0 см3. Этилацетатные фазы объединяют и экстрагируют раствором карбоната натрия (3.3) объемом 2, 0 см3.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Экстракцию раствором карбоната натрия проводят как можно быстрее, например в течение 1 - 2 мин, из-за нестабильности патулина в щелочной среде.
6.1.2 Карбонатную фазу (6.1.1) экстрагируют свежей порцией этилацетата объемом 5, 0 см3, экстракт объединяют с предыдущими порциями. Карбонатную фазу отбрасывают. К экстракту добавляют 5 капель уксусной кислоты (3.5), смесь перемешивают и упаривают на ротационном испарителе до объема 1 - 2 см3.
6.1.3 Полученный таким образом раствор количественно переносят во флакон вместимостью около 5 см3 с помощью нескольких порций этилацетата объемом около 1 см3 каждая. Раствор упаривают досуха в токе азота при температуре 40°С. Остаток растворяют в 0, 5 см3 подвижной фазы (3.2) или ацетатного буфера (3.4).
6.2 Построение градуировочного графика
Порции стандартного раствора патулина (3.6.1) объемом 1, 0; 2, 0; 3, 0; 5, 0 и 7, 5 см3 переносят пипеткой в пять мерных колб с одной отметкой вместимостью 10 см3, объем содержимого в колбах доводят до метки ацетатным буфером (3.4); получают градуировочные растворы.
Устанавливают скорость потока подвижной фазы через колонку жидкостного хроматографа около 1 см3/мин. Чувствительность детектора хроматографа устанавливают таким образом, чтобы оптической плотности 0, 01 соответствовал сигнал величиной на полную шкалу регистрирующего устройства.
В хроматограф (4.1) вводят от 0, 010 до 0, 030 см3 каждого градуировочного раствора.
Градуировочный график строят, откладывая по оси абсцисс концентрацию патулина в микрограммах на кубический сантиметр, по оси ординат - соответствующие величины высоты или площади пиков.
6.3 Проведение определения
В хроматограф вводят от 0, 010 см3 до 0, 030 см3 испытуемого раствора (6.1.3) при тех же условиях, что и при построении градуировочного графика.
Идентификацию пика патулина в испытуемом растворе проводят сравнением с пиками патулина в градуировочных растворах. Следует отличать пик патулина от пика оксиметилфурфурола (ОМФ).
7 Обработка результатов
Концентрацию патулина в испытуемом растворе определяют непосредственно по градуировочному графику (6.2). Содержание патулина в продукте ρp, мкг/дм3, вычисляют по формуле
,
(2)
где ρpt - концентрация патулина в испытуемом растворе, определенная по градуировочному графику, мкг/см3.
V1 - объем, до которого сконцентрирован этилацетатный экстракт, см3;
V2 - объем пробы продукта, взятый для экстракции, см3.
8 Точность метода
8.1 Сходимость результатов
r = 41, 9 мкг/дм3; sr = 14, 9 мкг/дм3,
где r - предел сходимости;
sr - среднеквадратическое отклонение сходимости.
8.2 Воспроизводимость результатов
R = 47, 5 мкг/дм3; SR = 22, 6 мкг/дм3,
где R - предел воспроизводимости;
SR - среднеквадратическое отклонение воспроизводимости.
9 Протокол испытаний
В протоколе испытаний указывают:
- метод испытаний;
- результат испытаний;
- окончательный результат с оценкой сходимости, если была проверена сходимость результатов.
Также следует отметить особенности проведения испытаний, не указанные в настоящем стандарте или рассматриваемые как несущественные, с побочными обстоятельствами, способными повлиять на результат испытаний.
Протокол испытаний должен содержать информацию, необходимую для полной идентификации образца.
________________
* ODS - октадецилсилан.
— Все документы — ГОСТы — ГОСТ Р 51435-99 (ИСО 8128-1-93) СОК ЯБЛОЧНЫЙ, СОК ЯБЛОЧНЫЙ КОНЦЕНТРИРОВАННЫЙ И НАПИТКИ, СОДЕРЖАЩИЕ ЯБЛОЧНЫЙ СОК. МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ПАТУЛИНА С ПОМОЩЬЮ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Городом с самыми дешевыми квартирами в новостройках оказался Воронеж
Аналитик Гутман: период с мая по июль является лучшим периодом для продажи дачи
«МК»: в России не отменят льготную ипотеку
Аренда квартир в Москве подешевела на 10 %
Вице-премьер Хуснуллин: ставка по ипотеке должна быть пять процентов