Утв. Приказом федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 13 декабря 2011 г. N 949-ст
Национальный стандарт РФ ГОСТ Р 54760-2011
"ПРОДУКТЫ МОЛОЧНЫЕ СОСТАВНЫЕ И ПРОДУКТЫ ДЕТСКОГО ПИТАНИЯ НА МОЛОЧНОЙ ОСНОВЕ. ОПРЕДЕЛЕНИЕ МАССОВОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ МОНО- И ДИСАХАРИДОВ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ"
Component milk products and infant milk products. Determination of mono- and disugars mass concentration by high-performance liquid chromatographic method
Дата введения - 1 января 2013 г.
Введен впервые
Предисловие
Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ "О техническом регулировании", а правила применения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004 "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения"
Сведения о стандарте
1 Разработан Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом молочной промышленности Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИМИ Россельхозакадемии)
2 Внесен Техническим комитетом по стандартизации ТК 470 "Молоко и продукты переработки молока"
3 Утвержден и введен в действие приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 13 декабря 2011 г. N 949-ст
4 Введен впервые
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на составные молочные продукты и продукты детского питания на молочной основе (далее - продукт) и устанавливает определение массовой концентрации моно- и дисахаридов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).
Диапазон измерений массовой концентрации моно- и дисахаридов в продукте от 50, 0 до 10000, 0 мг/дм3.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ Р 12.1.019-2009 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты
ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике
ГОСТ Р 52501-2005 (ИСО 3696:1987) Вода для лабораторного анализа. Технические условия
ГОСТ Р 53228-2008 Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания
ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования
ГОСТ 12.1.005-88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны
ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности
ГОСТ 12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание
ГОСТ 12.4.021-75 Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие требования
ГОСТ 61-75 Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия
ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия
ГОСТ 13928-84 Молоко и сливки заготовляемые. Правила приемки, методы отбора проб и подготовка их к анализу
ГОСТ 14919-83 Электроплиты, электроплитки и жарочные шкафы бытовые. Общие технические условия.
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу
ГОСТ 27752-88 Часы электронно-механические кварцевые настольные, настенные и часы-будильники. Общие технические условия
ГОСТ 29169-91 (ИСО 648-77) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой
ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования
Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Термины и определения
В настоящем стандарте применены термины, установленные нормативным правовым актом Российской Федерации [1], а также следующий термин с соответствующим определением:
3.1 метод высокоэффективной жидкостной хроматографии: Метод разделения компонентов продукта, основанный на различии в равновесном распределении их между двумя несмешивающимися фазами, одна из которых неподвижна, а другая подвижна, с использованием высокого давления (до 400 бар) и мелкозернистых сорбентов (до 1, 8 мкм).
4 Сущность метода
Метод основан на определении углеводов в фильтрате, полученном после удаления из пробы продукта жира и белка, методом высокоэффективной жидкостной хроматографии при разделении на аминофазной колонке. Полученные результаты измерения сравнивают со значениями массовой концентрации моно- и дисахаридов в стандартных образцах, используя градуировочный график.
Пример хроматограммы молочного продукта представлен в приложении А.
5 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, реактивы и материалы
Хроматограф жидкостный высокоэффективный, включающий следующие элементы:
- колонку аминофазную длиной 300 мм, размером внутреннего диаметра 78 мм;
- предколонку длиной 300 мм, размером внутреннего диаметра 46 мм, заполненную катионом в гидрогенной форме;
- предколонку длиной 300 мм, размером внутреннего диаметра 46 мм, заполненную анионом в карбонатной форме;
- детектор высокочувствительный рефрактометрический с порогом шума не более 5×10-9 единиц рефракции;
- мешалку магнитную;
- насос, способный пропускать раствор со скоростью 0, 3 - 0, 6 см3/мин, с пульсацией не более 1% при давлении на колонку от 1, 5 до 4, 0 МПа;
- термостат для хроматографических колонок, обеспечивающий поддержание температуры элюента (8±2)°С;
- устройство петлевое для ввода пробы рабочим объемом петли 0, 020 см3;
- программу компьютерную для статистической обработки результатов типа "Мультихром", версия 1.5 и выше со встроенным интегратором.
Весы по ГОСТ Р 53228 с пределами допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания ±0, 001 г, ±0, 2 мг.
Дозаторы пипеточные переменного объема дозирования в диапазоне 0, 040 - 1, 000 см3 с относительной погрешностью дозирования ±1%.
Микрошприц для ВЭЖХ вместимостью 0, 100 см3.
Часы электронно-механические по ГОСТ 27752.
Электроплитка бытовая по ГОСТ 14919.
Баня ультразвуковая лабораторная рабочим объемом не менее 2 дм3.
Колбы мерные 1-50-2, 1-100-2, 1-250-2, 1-1000-2 по ГОСТ 1770.
Цилиндры вместимостью 1-50-2, 1-100-2 по ГОСТ 1770.
Пипетки градуированные 1-1-2-10 по ГОСТ 29227.
Пипетки с одним делением 1(2)-2-5, 1(2)-2-10, 2-2-20 по ГОСТ 29169.
Колбы П-1-50-19/26 ТС (Кн-1-25-19/26 ТС) по ГОСТ 25336.
Воронки В-56-80 ХС по ГОСТ 25336.
Насос водоструйный лабораторный по ГОСТ 25336.
Прибор для фильтрования стеклянный с фильтром с размером диаметра 0, 45 мкм.
Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026, фильтры с размером диаметра 12, 5 см.
Фильтры мембранные с размером диаметра пор не более 0, 5 мкм.
Ацетат цинка двуводный, массовой долей основного вещества не менее 99, 999%.
Кислота уксусная ледяная по ГОСТ 61.
Кислота фосфорновольфрамовая 24-водная.
Образцы стандартные углеводов массовой долей основного вещества не менее 99, 0%.
Вода для лабораторного анализа первой степени чистоты (бидистиллированная) по ГОСТ Р 52501.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Допускается применение других средств измерений, вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающим необходимую точность измерения, а также реактивов и материалов по качеству не хуже вышеуказанных.
6 Отбор проб
Отбор проб - по ГОСТ 13928 и ГОСТ 26809.
7 Подготовка к проведению измерений
7.1 Подготовка стандартного раствора углевода
В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 75 мг соответствующего стандартного образца углевода с записью результата до четвертого знака после запятой и растворяют в небольшом количестве бидистиллированной воды. Объем раствора доводят бидистиллированной водой до метки.
Срок хранения раствора при температуре от 4°С до 6°С - не более 7 сут.
7.2 Реактив для предварительной обработки пробы
(91, 00±0, 01) г ацетата цинка двуводного, (54, 60±0, 01) г фосфорновольфрамовой кислоты 24-водной и 58, 1 см3 ледяной уксусной кислоты аккуратно вносят в мерную колбу вместимостью 1000 см3 и растворяют в небольшом количестве бидистиллированной воды. Объем раствора доводят бидистиллированной водой до метки.
Срок хранения реактива при температуре от 4°С до 6°С - не более 10 сут.
7.3 Подготовка градуировочных растворов
Градуировочные растворы, содержащие 250, 500, 750 и 1000 мг углевода на 1000 см3 обезжиренного пастеризованного молока готовят, добавляя 5, 10, 15 и 20 см3 соответственно стандартного раствора углевода, подготовленного по 7.1, к обезжиренному пастеризованному молоку, не содержащему данного углевода.
В четыре мерные колбы вместимостью 50 см3 помещают по 15 см3 обезжиренного пастеризованного молока.
7.3.1 Градуировочный раствор А, содержащий 250 мг углевода на 1000 см3 продукта
7.3.1.1 В первую мерную колбу, содержащую 15 см3 молока, помещают 5 см3 стандартного раствора углевода (по 7.1) и перемешивают. Мерным цилиндром добавляют 15 см3 бидистиллированной воды и вновь перемешивают.
7.3.1.2 Затем с помощью пипетки добавляют 5, 5 см3 реактива для предварительной обработки образца по 7.2 и перемешивают. Объем раствора доводят бидистиллированной водой до метки и перемешивают. Оставляют на 1 ч при температуре (23±2)°С и фильтруют через бумажный фильтр с размером диаметра 12, 5 см, отбрасывая первые 5 см3 фильтрата.
7.3.2 Градуировочный раствор Б, содержащий 500 мг углевода на 1000 см3 продукта
Во вторую мерную колбу, содержащую 15 см3 молока, помещают 10 см3 стандартного раствора углевода по 7.1 и перемешивают. Добавляют 10 см3 бидистиллированной воды, используя мерный цилиндр, и перемешивают. Далее - по 7.3.1.2.
7.3.3 Градуировочный раствор В, содержащий 750 мг углевода на 1000 см3 продукта
В третью мерную колбу, содержащую 15 см3 молока, помещают 15 см3 стандартного раствора углевода по 7.1 и перемешивают. Добавляют 5 см3 бидистиллированной воды, используя мерный цилиндр, и перемешивают. Далее - по 7.3.1.2.
7.3.4 Градуировочный раствор Г, содержащий 1000 мг углевода на 1000 см3 продукта
В четвертую мерную колбу, содержащую 15 см3 молока, помещают 20 см3 стандартного раствора углевода по 7.1 и перемешивают. Добавляют 5 см3 бидистиллированной воды, используя мерный цилиндр, и перемешивают. Далее - по 7.3.1.2.
7.3.5 Все растворы готовят перед определением.
7.4 Подготовка элюента
Дегазацию растворенного в элюенте воздуха проводят с помощью водоструйного или вакуумного насоса, обрабатывая бидистиллированную воду ультразвуком в течение 30 с при комнатной температуре. По возможности избегают вспенивания элюента.
Элюент готовят в день определения.
7.5 Подготовка анализируемой пробы продукта
7.5.1 Пробу продукта нагревают до температуры (20±2)°С и аккуратно перемешивают. Если жир не растворился, пробу постепенно нагревают до температуры (40±2)°С, аккуратно перемешивают переворачиванием (не допуская вбивания воздуха), и быстро охлаждают до температуры (20±2)°С.
7.5.2 (15.000±0, 001) г подготовленной по 7.5.1 пробы помещают в мерную колбу вместимостью 50 см3. Мерным цилиндром приливают 20 см3 бидистиллированной воды. Добавляют 5, 5 см3 реактива для предварительной обработки пробы по 7.2 и перемешивают. Объем раствора доводят бидистиллированной водой до метки и перемешивают. Полученный раствор оставляют на 1 ч при температуре (23±2)°С, затем фильтруют через бумажный фильтр, отбрасывая первые 5 см3 фильтрата.
7.6 Подготовка хроматографа
Установку, включение и подготовку хроматографа к работе выполняют в соответствии с руководством по эксплуатации прибора.
7.6.1 Условия хроматографирования
- скорость потока - 0, 3 - 0, 6 см3/мин;
- температура - 85, 0°С;
- подвижная фаза: бидистиллированная вода;
- детектор: рефрактометрический.
7.6.2 Построение градуировочного графика
Для построения градуировочного графика измеряют площади пиков, соответствующие массовым концентрациям углеводов в градуировочных растворах. Каждый градуировочный раствор хроматографируют не менее трех раз. Измерения выполняют последовательно, начиная с растворов с наименьшей массовой концентрацией определяемого вещества.
Полученные при хроматографировании значения не должны отклоняться от стандартных более чем на 5, 00%.
По полученным данным, используя программные обеспечения к приборам, рассчитывают коэффициенты регрессии а и b прямой Y = а Cугр+b.
Градуировочный график строят с учетом вычисленных значений уравнения:
Y=aCугр+b,
(1)
где Y - площадь пика углеводов;
а и b - коэффициенты регрессии;
Cугр - массовая концентрация углеводов в градуировочном растворе, мг/см3.
7.6.3 Градуировку проводят не реже 1 раза в квартал, а также при использовании новой партии реактивов, замене колонок или ремонте хроматографа.
8 Условия проведения измерений
При выполнении измерений в лаборатории должны соблюдаться следующие условия:
- температура окружающего воздуха .............(20±5)°С;
- относительная влажность воздуха .............(55±25)%;
- атмосферное давление ........................(96±10) кПа;
- частота переменного тока ....................(50±5) Гц;
- напряжение в сети ...........................(220±10) В.
Для проведения измерений применяют бидистиллированную воду, которую готовят следующим образом: дистиллированную воду фильтруют через мембранный фильтр (размер диаметра пор не более 0, 5 мкм), затем кипятят для удаления растворенного воздуха и охлаждают до комнатной температуры.
9 Проведение измерений
9.1 Дегазация анализируемой пробы
В мерную колбу вместимостью 50 см3 помещают 3 см3 фильтрата по 7.5. Дегазацию растворенного в фильтрате воздуха проводят с помощью вакуумного насоса, обрабатывая ультразвуком в течение 30 с при комнатной температуре. По возможности избегают вспенивания.
9.2 В инжектор хроматографа вводят от 0, 01 до 0, 03 см3 тщательно отмеренного дегазированного фильтрата со скоростью потока 0, 3 - 0, 6 см3/мин.
Плоттер выбирают так, чтобы минимальная высота пика углевода составляла около 5 мм для градуировочного раствора А.
10 Обработка результатов измерений
Массовую концентрацию углеводов в анализируемой пробе продукта С, мг/дм3, вычисляют по формуле
,
(2)
где V1 - объем анализируемой пробы после разбавления по 7.5, см3;
C3 - концентрация углевода, рассчитанная по градуировочному графику (7.6.2), мг/дм3;
V2 - объем анализируемой пробы, взятый для анализа по 9.2, см3.
Вычисления проводят до второго десятичного знака. За окончательный результат принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений, выполненных в условиях повторяемости, если выполняется условие приемлемости по разделу 11.
Окончательный результат округляют до первого десятичного знака.
11 Контроль точности результатов измерений
11.1 Метрологические характеристики метода определения массовой концентрации моно- и дисахаридов
Приписанные характеристики погрешности и ее составляющих метода определения массовой концентрации моно- и дисахаридов при Р = 0, 95 приведены в таблице 1.
Таблица 1
|
Диапазон измерений массовой концентрации углеводов, мг/дм3
|
Предел повторяемости
rотн., %
|
Предел воспроизводимости
Rотн., %
|
Границы
относительной
погрешности ±δ, %
|
|
От 50, 0 до 1000, 0 вкл.
|
12
|
23
|
16
|
|
Св. 1000, 0 до 10000, 0
|
9
|
17
|
12
|
11.2 Проверка приемлемости результатов определений, полученных в условиях повторяемости
Проверку приемлемости результатов определений массовой концентрации моно- и дисахаридов, полученных в условиях повторяемости (два параллельных определения, n = 2), проводят с учетом требований ГОСТ Р ИСО 5725-6 (пункт 5.2.2).
Результаты измерений считаются приемлемыми при условии:
|X1-X2|≤rотн·0, 01Xср,
где X1, X2 - значения двух параллельных определений, полученных в условиях повторяемости, мг/дм3;
Xср - среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений, мг/дм3;
rотн - пределы повторяемости (сходимости), значения которых приведены в таблице 1, %.
Если данное условие не выполняется, то проводят повторное определение и проверку приемлемости результатов определений в условиях повторяемости в соответствии с требованиями ГОСТ Р ИСО 5725-6 (пункт 5.2.2).
11.3 Проверка приемлемости результатов определения, полученных в условиях воспроизводимости
Проверку приемлемости результатов определений массовой концентрации моно- и дисахаридов, полученных в условиях воспроизводимости (в двух лабораториях, m = 2), проводят с учетом требований ГОСТ Р ИСО 5725-6 (пункт 5.3.2.1).
Результаты определений, выполненные в условиях воспроизводимости, считаются приемлемыми при условии:
|X'1-X'2|≤Rотн·0, 01Xср,
где X'1, X'2 - результаты определений, полученные в двух лабораториях в условиях воспроизводимости, мг/дм3;
Rотн - пределы воспроизводимости, значения которых приведены в таблице 1%;
Xср - среднеарифметическое значение результатов определений, выполненных в условиях воспроизводимости, мг/дм3.
Если данное условие не выполняется, то процедуры повторяют в соответствии с требованиями ГОСТ Р ИСО 5725-6 (пункт 5.3.3).
12 Оформление результатов
Результат измерений массовой концентрации моно- и дисахаридов в документах, предусматривающих его использование, представляют в виде:
Xср±δ·0, 01Xср, при Р = 0, 95,
где δ - границы относительной погрешности измерений, % (таблица 1);
Xср - среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений, мг/дм3.
13 Требования, обеспечивающие безопасность
При выполнении работ необходимо соблюдать следующие требования:
- помещение лаборатории должно быть оборудовано общей приточно-вытяжной вентиляцией в соответствии с требованиями ГОСТ 12.4.021. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать норм, установленных требованиями ГОСТ 12.1.005;
- требования техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.007;
- требования техники безопасности при работе с электроустановками в соответствии с требованиями ГОСТ Р 12.1.019.
Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.004 и быть оснащено средствами пожаротушения в соответствии с требованиями ГОСТ 12.4.009.
Приложение А
(справочное)
Пример хроматограммы определения массовой концентрации моно- и дисахаридов в молочном продукте
А.1 Пример хроматограммы определения массовой концентрации моно- и дисахаридов в молочном продукте приведен на рисунке А.1.
Рисунок А.1
Библиография
|
[1]
|
Федеральный закон от 12 июня 2008 г. N 88-ФЗ "Технический регламент на молоко и молочную продукцию" (с изменением)
|
— Все документы — ГОСТы — ГОСТ Р 54760-2011 ПРОДУКТЫ МОЛОЧНЫЕ СОСТАВНЫЕ И ПРОДУКТЫ ДЕТСКОГО ПИТАНИЯ НА МОЛОЧНОЙ ОСНОВЕ. ОПРЕДЕЛЕНИЕ МАССОВОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ МОНО- И ДИСАХАРИДОВ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
В ЦБ заявили, что темпы роста ипотеки в России достигли 1,5 процента
«Суточно.ру»: дешевле всего арендовать жилье посуточно можно в Челябинске
ВТБ: чаще всего россияне покупают в ипотеку однокомнатные квартиры
Застройщика в ЯНАО обязали исправить проблему с холодным жильем для переселенцев
Эксперты по недвижимости: в среднесрочной перспективе новостройки в России подешевеют