Введен в действие приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 13 мая 2016 г. N 312-ст
Межгосударственный стандарт ГОСТ EN 14148-2015
"ПРОДУКЦИЯ ПИЩЕВАЯ. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВИТАМИНА K1: МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ"
Foodstuffs. Determination of vitamin K1: by high performance liquid chromatographic method
Дата введения - 1 июля 2017 г.
Введен впервые
Предисловие
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"
Сведения о стандарте
1 Подготовлен Научно-производственным республиканским унитарным предприятием "Белорусский государственный институт стандартизации и сертификации" (БелГИСС) на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии европейского стандарта, указанного в пункте 5
2 Внесен Государственным комитетом по стандартизации Республики Беларусь
3 Принят Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации по переписке (протокол от 27 февраля 2015 г. N 75-П)
За принятие проголосовали:
|
Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97
|
Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97
|
Сокращенное наименование национального органа по стандартизации
|
|
Армения
|
AM
|
Минэкономики Республики Армения
|
|
Беларусь
|
BY
|
Госстандарт Республики Беларусь
|
|
Казахстан
|
KZ
|
Госстандарт Республики Казахстан
|
|
Киргизия
|
KG
|
Кыргызстандарт
|
|
Молдова
|
MD
|
Молдова-Стандарт
|
|
Россия
|
RU
|
Росстандарт
|
|
Таджикистан
|
TJ
|
Таджикстандарт
|
|
Узбекистан
|
UZ
|
Узстандарт
|
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 13 мая 2016 г. N 312-ст межгосударственный стандарт ГОСТ EN 14148-2015 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2017 г.
5 Настоящий стандарт идентичен европейскому стандарту EN 14148:2003 "Продукция пищевая. Определение витамина K1 с помощью ВЭЖХ" ("Foodstuffs. Determination of vitamin K1 by HPLC", IDT)
Европейский стандарт EN 14148:2003 разработан техническим комитетом CEN/TC 275 "Анализ пищевых продуктов. Горизонтальные методы" Европейского комитета по стандартизации (CEN).
Официальный экземпляр европейского стандарта, на основе которого подготовлен настоящий межгосударственный стандарт, и европейского стандарта, на который дана ссылка, имеются в Федеральном информационном фонде технических регламентов и стандартов.
При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных стандартов соответствующие им нормативные стандарты Российской Федерации, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА
6 Введен впервые
1 Область применения
Настоящий стандарт устанавливает метод определения витамина K1: в пищевой продукции с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Определение витамина K1: проводится путем измерения восстановленного филлохинона. Метод прошел валидацию для молока и детских смесей, однако известен опыт лабораторий, который показал, что метод также применим к другой пищевой продукции [10].
2 Нормативные ссылки
Для применения настоящего стандарта необходим следующий ссылочный документ. Для недатированных ссылок применяют последнее издание ссылочного стандарта (включая все его изменения).
EN ISO 3696 Water for analytical laboratory use - Specification and test methods (Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний)
3 Сущность метода
Витамин K1: отделяют в растворе пробы от сопутствующих веществ методом высокоэффективной жидкостной хроматографии и определяют флуориметрическим методом после восстановления в послеколоночном реакторе. Количественно определяют сумму изомеров витамина K1:, которые на колонках с фазой C18 выходят в виде единого неразрешенного пика [1] - [4].
4 Реактивы
4.1 Общие положения
Для проведения анализа, если не указано иное, используют только реактивы признанной аналитической чистоты и воду не ниже первой степени чистоты по EN ISO 3696 или дистиллированную воду.
4.2 Химические вещества и растворы
4.2.1 Метанол, массовая доля w(CH3OH)≥99, 8%.
4.2.2 Этанол, объемная доля φ(C2H5OH)≥99, 8%.
4.2.3 Смесь этанола и метанола, объемная доля φ(C2H5OH) = 95%
Смешивают 950 см3 этанола (4.2.2) с 50 см3 метанола (4.2.1).
4.2.4 Дихлорметан, массовая доля w(CH2Cl2)≥99, 5%.
4.2.5 Н-гексан, массовая доля w(C6H14)≥97%.
4.2.6 Петролейный эфир, с диапазоном температуры кипения 35 - 60°С, ч.д.а.
4.2.7 Гидроксид калия, массовая доля w(KOH)≥ 85%.
4.2.8 Раствор гидроксида калия молярной концентрации с(KОН) = 10 моль/дм3.
4.2.9 Калий фосфорнокислый однозамещенный, массовая доля w(KH2PO4)≥99, 5%.
4.2.10 Карбонат калия, массовая доля w(K2CO3)≥99, 9%.
4.2.11 Ацетат натрия, безводный, массовая доля w(CH3COONa)≥99, 5%.
4.2.12 Уксусная кислота, массовая доля w(CH3COOH)≥99, 8%.
4.2.13 Хлорид цинка, массовая доля w(ZnCl2)≥98%.
4.2.14 Цинк, порошок, размер частиц < 63 мкм, массовая доля w(Zn)≥ 97%.
4.2.15 Фосфатный буфер с рН 7, 9 - 8, 0
Растворяют 54, 0 г калия фосфорнокислого однозамещенного (4.2.9) примерно в 350 см3 воды, регулируют рН до 7, 9 - 8, 0 раствором гидроксида калия (4.2.8) и разбавляют до 500 см3 водой.
4.2.16 Раствор хлорида-ацетата цинка
Взвешивают 13, 7 г хлорида цинка (4.2.13), 4, 1 г безводного натрия ацетата (4.2.11) и 3, 0 г уксусной кислоты (4.2.12) и переносят в мерную колбу вместимостью 50 см3, растворяют в метаноле (4.2.1) и объем содержимого колбы доводят до метки метанолом.
4.2.17 Липаза типа VII
Липаза из Candida rugosa с каталитической активностью 1000 Ед/мг или другой подходящий вариант*. Могут использоваться другие источники фермента из видов Pseudomonas и Rhizopus с учетом разницы в показателях активности.
4.2.18 Подвижная фаза для ВЭЖХ.
Смешивают 100 см3 дихлорметана (4.2.4), 900 см3 метанола (4.2.1) и 5 см3 раствора хлорида-ацетата цинка (4.2.16). Фильтруют через фильтр с размером пор 0, 45 мкм.
4.3 Витамин K1:, образец сравнения (филлохинон, 3-фитилменадион), массовая доля w(C31H46O2)≥99%
Витамин K1: можно приобрести у различных поставщиков. Степень чистоты филлохинона может отличаться. Поэтому необходимо определить массовую концентрацию градуировочного раствора спектрофотометрическим методом в ультрафиолетовой области (см. 4.4.4).
4.4 Исходные растворы
4.4.1 Меры предосторожности
Витамин K1: очень чувствителен к свету. Следует принять меры по защите образца сравнения и соответствующих растворов в процессе выполнения методики с использованием лабораторной посуды из коричневого стекла.
4.4.2 Исходный раствор I витамина K1:, массовой концентрацией ρ(C31H46O2) = 1, 0 мг/см3
Взвешивают около 100 мг (точная навеска) образца сравнения витамина K1: (4.3), переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, растворяют в метаноле (4.2.1) и объем содержимого колбы доводят до метки метанолом. Раствор можно хранить в среде азота в течение 3 мес при температуре минус 20°С в темном месте.
Примечание - При растворении указанных количеств витамина K1: могут возникнуть затруднения.
4.4.3 Исходный раствор II витамина K1:, массовой концентрацией ρ(C31H46O2) = 50, 0 мкг/см3
Переносят пипеткой 5, 0 см3 исходного раствора I витамина K1: (4.4.2) в мерную колбу вместимостью 100 см3 и объем содержимого колбы доводят до метки метанолом (4.2.1). Раствор может храниться в среде азота в течение 1 мес при температуре минус 20°С в темном месте.
4.4.4 Определение массовой концентрации
Выпаривают 5, 0 см3 исходного раствора II витамина K1: (4.4.3) с помощью ротационного испарителя в условиях частичного вакуума или под воздействием потока азота. Повторно растворяют осадок в 25, 0 см3 н-гексана (4.2.5) или петролейного эфира (4.2.6).
Измеряют на спектрофотометре (5.1) оптическую плотность раствора в кювете с оптической длиной пути 1 см относительно н-гексана или петролейного эфира в качестве образца сравнения в максимуме поглощения при длине волны около 248 нм. Рассчитывают массовую концентрацию витамина K1: в исходном растворе II витамина K1: (4.4.3)ρ, мкг/см3, по формуле
,
(1)
где A248 - величина оптической плотности раствора в максимуме поглощения при длине волны около 248 нм;
104 - коэффициент для перевода 
в микрограмм на миллилитр;
5 - коэффициент разбавления при замене растворителя метанола на н-гексан;
419 - величина витамина K1: в н-гексане (4.2.5) или петролейном эфире (4.2.6) при 248 нм ([5]);
4.5 Стандартные растворы
4.5.1 Промежуточный стандартный раствор витамина K1:, массовая концентрация ρ(C31H46O2) = 2, 5 мкг/см3
Пипеткой переносят 5, 0 см3 исходного раствора II витамина K1: (4.4.3) в мерную колбу вместимостью 100 см3 и объем содержимого колбы доводят до метки метанолом (4.2.1).
4.5.2 Стандартный аналитический раствор витамина K1: для ВЭЖХ, массовая концентрация ρ(C31H46O2) = 25, 0 нг/см3
Пипеткой переносят 1 см3 промежуточного стандартного раствора витамина K1: (4.5.1) в мерную колбу из коричневого стекла вместимостью 100 см3 и объем содержимого колбы доводят до метки метанолом (4.2.1). Данный раствор должен быть свежеприготовленным.
5 Оборудование
Используют стандартное лабораторное оборудование, в том числе перечисленное ниже.
5.1 Ультрафиолетовый спектрофотометр
УФ-спектрофотометр, способный измерять оптическую плотность при установленной длине волны, в кюветах с оптической длиной пути 1 см.
5.2 Система для ВЭЖХ
Система для ВЭЖХ, состоящая из насоса, устройства для инжекции проб, флуориметрического детектора, позволяющего выполнять измерения при заданных длинах волн (например, при длине волны возбуждения 243 нм и длине регистрации 430 нм), и системы для сбора и обработки данных (например, интегратора).
5.3 Колонка для ВЭЖХ
Аналитическая колонка с обращенной фазой, диаметром 3, 0 - 4, 6 мм, длиной 100 - 250 мм, заполненная частицами размером 3 - 10 мкм.
Допускается использовать колонки других размеров или с частицами другого размера. В этом случае параметры разделения должны быть адаптированы к таким материалам, чтобы обеспечить аналогичные результаты.
Могут использоваться и другие системы (см. приложение С), которые обеспечивают надлежащее разделение филлохинона от других совместно экстрагируемых компонентов пробы.
5.4 Система послеколоночной дериватизации
Колонка из нержавеющей стали или стекла, помещенная между аналитической колонкой и флуориметрическим детектором, диаметром 2, 0 - 6, 0 мм, длиной 10 - 150 мм, заполненная цинковым порошком (4.2.14).
5.5 Устройство для фильтрации
Подходит мембранный фильтр с размером пор 0, 45 мкм.
Примечание - Фильтрация подвижной фазы, так же как и раствора пробы, через мембранный фильтр до использования или инжектирования может увеличить срок службы колонок.
6 Методика проведения испытания
6.1 Меры предосторожности
Витамин K1: очень чувствителен к свету. Во время проведения испытаний следует принимать меры для защиты пробы и соответствующих растворов с использованием лабораторной посуды из коричневого стекла.
6.2 Подготовка аналитической пробы
Гомогенизируют аналитическую пробу. Измельчают грубый материал при помощи соответствующего измельчителя и снова перемешивают, предварительно охлаждая, чтобы не допустить воздействия высокой температуры в течение длительного периода.
6.3 Приготовление раствора пробы
6.3.1 Экстракция из пробы
Взвешивают 1 г порошкообразной или 10 г жидкой пробы с точностью до 0, 001 г в закрывающуюся аналитическую пробирку или коническую колбу. В порошкообразную пробу добавляют 15 см3 воды с температурой 40°С и перемешивают на вортексе, в жидкую пробу добавляют 5 см3 воды с температурой 40°С. Проводят холостой опыт, используя только реактивы без пробы (см. 6.5).
6.3.2 Обработка ферментом
Добавляют 5 см3 фосфатного буфера с рН 7, 9 - 8, 0 (4.2.15) и перемешивают. Добавляют 1, 0 г липазы (4.2.17), перемешивают на вортексе, закрывают пробкой и встряхивают в течение примерно 2 - 3 мин. Выдерживают смесь при температуре (37±2)°С в течение 2 ч. Через равные промежутки времени, например 20 мин, энергично встряхивают смесь вручную.
6.3.3 Экстракция
Смесь охлаждают до комнатной температуры, добавляют 10 см3 смеси этанола и метанола (4.2.3) и 1, 0 г карбоната калия (4.2.10) и хорошо перемешивают. Добавляют установленный объем VE (30 см3) н-гексана (4.2.5) и энергично встряхивают. Затем оставляют в темном месте до разделения фаз или центрифугируют при 2000g в течение 10 мин. Н-гексановый экстракт можно хранить в течение ночи при температуре 4°С в среде азота в темном месте.
6.3.4 Перенос и разбавление фазы
Переносят в виалу пипеткой аликвотный объем Va фазы н-гексана (6.3.3): 0, 5 см3 для обогащенной пробы и 5, 0 см3 для необогащенной пробы. Удаляют растворитель в токе азота и снова растворяют осадок в установленном объеме V метанола (4.2.1) - 1, 0 см3, получая раствор анализируемой пробы для анализа методом ВЭЖХ.
6.4 Идентификация
Идентифицируют витамин K1:, сравнивая время удержания пика на хроматограммах, полученных при анализе раствора анализируемой пробы (6.3.4) и стандартного аналитического раствора (4.5.2). Идентификацию пика также можно выполнить, если добавлять соответствующие стандартные растворы в небольшом количестве в раствор анализируемой пробы.
Было доказано, что разделение и количественный анализ являются удовлетворительными при соблюдении указанных ниже экспериментальных условий (см. также рисунки А.1 - А.3). Альтернативные условия ВЭЖХ приведены в таблице С.1.
|
Неподвижная фаза и размеры колонки:
|
Resolve C18, 5 мкм, 150 х 3, 9 мм.
|
|
Подвижная фаза:
|
Смешивают 100 см3 дихлорметана (4.2.4), 900 см3 метанола (4.2.1) и 5 см3 раствора хлорида-ацетата цинка (4.2.16).
|
|
Скорость потока:
|
1, 0 см3/мин.
|
|
Инжектируемый объем:
|
20 мм3.
|
|
Колонка для дериватизации:
|
Колонка из нержавеющей стали размером 20 x 4 мм, заполненная цинковым порошком (4.2.14).
|
|
Детектирование:
|
Флуориметрическое, длина волны возбуждения - 243 нм; длина волны регистрации - 430 нм.
|
Примечания
1 На неподвижных фазах С18 изомеры витамина K1: (цис- и транс-) элюируются единым неразрешенным пиком ([6], [7]). Современные исследования показали, что разделение изомеров в пробах пищевой продукции может быть осуществлено на колонках с фазой С30 ([10]). В стандартных растворах и концентратах проб изомеры могут быть определены в условиях нормальнофазовой хроматографии с применением ультрафиолетового детектирования ([8], [9]).
2 В ходе экспериментальных исследований было установлено, что колонку для дериватизации можно нагреть до 40°С во время проведения анализов методом ВЭЖХ, для ускорения дериватизации.
6.5 Определение
Инжектируют 20 мм3 стандартного раствора анализируемой пробы (4.5.2) и аналитического раствора пробы (6.3.4) в хроматографическую систему.
При использовании метода внешнего стандарта находят интегрированием значения площадей пиков или определяют высоты пиков и сравнивают результаты с соответствующими значениями для образца сравнения.
Обычно концентрация витамина K1: в растворе пробы очень мала. Поэтому, чтобы избежать загрязнений, все работы необходимо проводить с использованием чистой лабораторной посуды. Чтобы убедиться в отсутствии загрязнений, проводят холостую пробу с использованием тех же количеств реактивов, но без анализируемой пробы.
7 Обработка результатов измерений
Результат измерений рассчитывают при помощи градуировочной характеристики, либо используют соответствующие программы интегратора, либо применяют следующий упрощенный способ.
Рассчитывают массовую долю витамина K1: w, мкг/100 г пробы, по формуле
,
(2)
где AS - площадь пика или высота пика витамина K1:, полученная при использовании раствора анализируемой пробы (6.3.4), в единицах площади или высоты;
ρ- массовая концентрация витамина K1: в стандартном аналитическом растворе (4.5.2), нг/см3;
V - конечный объем аналитического раствора пробы (6.3.4), см3;
VE - объем экстракта н-гексана (6.3.3), см3;
100 - коэффициент для перевода массовой доли на 100 г пробы;
AST - площадь пика или высота пика витамина K1:, полученная при использовании стандартного аналитического раствора (4.5.2), в единицах площади или высоты;
m - масса пробы, г;
VA - объем аликвоты экстракта, использованной для переноса фазы, см3;
1000 - коэффициент для перевода нанограммов в микрограммы.
Результат измерений для витамина K1: регистрируют в протоколе в микрограммах на 100 г пробы.
8 Прецизионность
8.1 Общие положения
Данные по прецизионности определения витамина K1: были получены в 1998 году при межлабораторном испытании, проводимом в соответствии с Международным руководством АОАС на различных обогащенных и необогащенных пробах молочных продуктов [4]. Эти данные представлены в приложении В. Результаты, полученные в ходе совместного исследования, не обязательно могут быть применены к содержанию исследуемого вещества и матрицам пробы, отличным от представленных в приложении В.
8.2 Повторяемость
Абсолютное расхождение между двумя отдельными результатами испытаний, которые были получены при применении одного и того же метода на идентичном испытательном материале одним и тем же оператором на одном и том же оборудовании в течение короткого промежутка времени, не должно превышать предел повторяемости r более чем в 5% случаев.
|
Значения для витамина K1::
| | | |
|
ультрапастеризованное цельное жидкое необогащенное молоко (1)
|  = 0, 49 мкг/100 г |
r = 0, 12 мкг/100 г
| |
|
сухое молоко из цельного козьего молока (2)
|
= 6, 63 мкг/100 г
|
r = 0, 60 мкг/100 г
| |
|
детские смеси на основе молока с пониженной
жирностью обогащенные (3)
|
= 118, 07 мкг/100 г
|
r = 14, 01 мкг/100 г
| |
|
детские смеси на основе сыворотки с пониженной
жирностью обогащенные (4)
|
= 32, 24 мкг/100 г
|
r = 4, 31 мкг/100 г
| |
|
детские смеси на основе сои с повышенной жирностью, обогащенные (5)
|
= 78, 69 мкг/100 г
|
r = 5, 71 мкг/100 г
| |
|
детские смеси на основе сыворотки с повышенной
жирностью, обогащенные (6)
|
= 49, 64 мкг/100 г
|
r = 7, 11 мкг/100 г
| |
|
детские смеси на основе сыворотки с пониженной
жирностью обогащенные (7)
|
= 90, 94 мкг/100 г
|
r = 11, 32 мкг/100 г
| |
|
NIST SRM 1846** сухая детская смесь (8)
|
= 94, 62 мкг/100 г
|
r = 15, 05 мкг/100 г
| |
|
Число в скобках - номер пробы в таблице В.1 (см. приложение В).
|
| | | | | |
8.3 Воспроизводимость
Абсолютное расхождение между двумя отдельными результатами испытаний, полученными при применении одного и того же метода на идентичном испытательном материале двумя лабораториями, не должно превышать предел воспроизводимости R более чем в 5% случаев.
|
Значения для витамина K1:
| | | | | |
|
ультрапастеризованное, цельное, жидкое, необогащенное молоко (1)
| |
= 0, 49 мкг/100 г
|
R =
|
0, 15 мкг/100 г
| |
|
сухое молоко из цельного козьего молока (2)
| |
= 6, 63 мкг/100 г
|
R =
|
1, 08 мкг/100 г
| |
|
детские смеси на основе молока с пониженной жирностью обогащенные (3)
| |
= 118, 07 мкг/100 г
|
R =
|
18, 19 мкг/100 г
| |
|
детские смеси на основе сыворотки с пониженной жирностью обогащенные (4)
| |
= 32, 24 мкг/100 г
|
R =
|
5, 98 мкг/100 г
| |
|
детские смеси на основе сои, с повышенной жирностью, обогащенные (5)
| |
= 78, 69 мкг/100 г
|
R =
|
9, 53 мкг/100 г
| |
|
детские смеси на основе сыворотки, с повышенной жирностью, обогащенные (6)
| |
= 49, 64 мкг/100 г
|
R =
|
10, 65 мкг/100 г
| |
|
детские смеси на основе сыворотки, с пониженной жирностью, обогащенные (7)
| |
= 90, 94 мкг/100 г
|
R =
|
11, 60 мкг/100 г
| |
|
NIST SRM 1846**, сухая детская смесь (8)
| |
= 94, 62 мкг/100 г
|
R =
|
17, 95 мкг/100 г
| |
|
Число в скобках - номер пробы в таблице В.1 (см. приложение В).
|
| | | | | | | |
9 Протокол испытаний
Протокол испытания должен содержать следующие сведения:
a) всю информацию, необходимую для полной идентификации пробы;
b) ссылку на настоящий стандарт или примененный метод;
c) дату и тип методики отбора пробы (если они известны);
d) дату поступления пробы в лабораторию;
e) дату проведения испытания;
f) результаты испытания с указанием единиц выражения результатов;
g) все особенности, наблюдавшиеся при проведении испытания;
h) все операции, не оговоренные в методике или рассматриваемые как необязательные, которые могли повлиять на результаты испытания.
_______________________________
* Например, L-1754; Sigma Chemical Co, P.O. 14508, Saint Louis МО 63178, USA (США). Указанный продукт использовался в межлабораторном испытании. Информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не является рекламой указанного продукта со стороны CEN. Могут быть использованы эквивалентные продукты, если было установлено, что они дают аналогичные результаты.
** Принято опорное значение при испытаниях (94±10) мкг/100 г.
Приложение А
(справочное)
Примеры хроматограмм
Рисунок А.1 - Пример разделения витамина К1 из пробы 1
(ультрапастеризованное цельное жидкое необогащенное молоко) методом ВЭЖХ
Рисунок А.2 - Пример разделения витамина K1 из пробы 2
(сухое молоко из цельного козьего молока) методом ВЭЖХ
Рисунок А.3 - Пример разделения витамина K1 из пробы 5
(обогащенные детские смеси на основе сои с повышенной жирностью) методом ВЭЖХ
|
Неподвижная фаза и размеры колонки:
|
Resolve C18, 5 мкм, 150 x 3, 9 мм
|
|
Подвижная фаза:
|
Смешивают 100 см3 дихлорметана (4.2.4), 900 см3 метанола (4.2.1) и 5 см3 раствора хлорида-ацетата цинка (4.2.16).
|
|
Скорость потока:
|
1, 0 см3/мин
|
|
Инжектируемый объем:
|
20 мм3
|
|
Колонка для дериватизации:
|
Колонка из нержавеющей стали размером 20 x 4 мм, заполненная цинковым порошком (4.2.14).
|
|
Детектирование:
|
Флуориметрическое, длина волны возбуждения - 243 нм;
|
|
длина волны регистрации - 430 нм.
|
Приложение В
(справочное)
Данные по прецизионности
Следующие данные по прецизионности были установлены при межлабораторном совместном испытании [4].
Таблица В.1
|
Номер пробы
|
1
|
2
|
3
|
4
|
5
|
6
|
7
|
8
|
|
Исследуемое вещество
|
Витамин K1
|
Витамин K1
|
Витамин K1
|
Витамин K1
|
Витамин K1
|
Витамин K1
|
Витамин K1
|
Витамин K1
|
|
Год межлабораторного испытания
|
1998
|
1998
|
1998
|
1998
|
1998
|
1998
|
1998
|
1998
|
|
Количество лабораторий
|
33
|
34
|
34
|
34
|
34
|
34
|
34
|
34
|
|
Количество проб
|
2
|
2
|
2
|
2
|
2
|
2
|
2
|
2
|
|
Количество лабораторий, оставшихся после вычитания выбросов
|
32
|
29
|
34
|
34
|
34
|
34
|
33
|
34
|
|
Количество выбросов
|
1
|
5
|
0
|
0
|
0
|
0
|
1
|
0
|
|
Количество комплектов данных
|
62
|
56
|
66
|
66
|
66
|
66
|
64
|
66
|
|
Среднее значение , мкг/100 г
|
0, 49
|
6, 63
|
118, 07
|
32, 24
|
78, 69
|
49, 64
|
90, 94
|
94, 62
|
|
Стандартное отклонение повторяемости sr, мкг/100 г
|
0, 04
|
0, 21
|
5, 00
|
1, 54
|
2, 04
|
2, 54
|
4, 04
|
5, 38
|
|
Относительное стандартное отклонение повторяемости RSDr, %
|
9, 03
|
3, 23
|
4, 24
|
4, 77
|
2, 59
|
5, 11
|
4, 44
|
5, 68
|
|
Предел повторяемости
r [r=2, 8·sr], мкг/100 г
|
0, 12
|
0, 60
|
14, 01
|
4, 31
|
5, 71
|
7, 11
|
11, 32
|
15, 05
|
|
Стандартное отклонение воспроизводимости sR, мкг/100 г
|
0, 05
|
0, 39
|
6, 50
|
2, 14
|
3, 40
|
3, 80
|
4, 14
|
6, 41
|
|
Относительное стандартное отклонение воспроизводимости RSDR, %
|
10, 94
|
5, 81
|
5, 50
|
6, 63
|
4, 33
|
7, 66
|
4, 56
|
6, 78
|
|
Предел воспроизводимости
R [R=2, 8·sR], мкг/100 г
|
0, 15
|
1, 08
|
18, 19
|
5, 98
|
9, 53
|
10, 65
|
11, 60
|
17, 95
|
|
Пробы:
1 - ультрапастеризованное цельное жидкое необогащенное молоко;
2 - сухое молоко из цельного козьего молока;
3 - обогащенная детская смесь на основе молока с пониженной жирностью;
4 - обогащенная детская смесь на основе сыворотки с пониженной жирностью;
5 - обогащенная детская смесь на основе сои с повышенной жирностью;
6 - обогащенная детская смесь на основе сыворотки с повышенной жирностью;
7 - обогащенная детская смесь на основе сыворотки с пониженной жирностью;
8 - NIST SRM 1846, сухая детская смесь с принятым значением (94±10) мкг/100 г.
|
Приложение С
(справочное)
Альтернативные системы ВЭЖХ
Разделение и количественное определение витамина K1 было признано удовлетворительным при применении следующих хроматографических условий [4].
Таблица С.1
|
Неподвижная фаза
|
Размеры колонки, (мм х мм)(а)
|
Колонка для дериватизации,
(мм х мм)(а)
|
Скорость потока,
(см3/мин)(с)
|
|
Alltima® C18, 5 мкм
|
150 x 4, 6
|
20 x 4
|
1, 5
|
|
Novapak® C18, 5 мкм
|
100 х 8, 0
|
20 x 4
|
1, 5
|
|
Lichrospher® 100 RP18, 5 мкм
|
250 х 4, 0
|
125 х 3(b)
|
1, 5
|
|
Resolve® C18, 5 мкм
|
150 x 3, 9
|
20 x 4
|
1, 0
|
|
L-Column® ODS, 5 мкм
|
250 х 4, 6
|
20 x 4
|
0, 8
|
|
L-Column® ODS, 5 мкм
|
150 x 4, 6
|
10 х 6
|
0, 8
|
|
Capcell Pak® C18, 5 мкм
|
250 х 4, 6
|
20 x 2
|
1, 0
|
|
Econosphere® C18, 5 мкм
|
250 х 4, 6
|
30 х 4, 6
|
1, 0
|
|
Vydac® С18, 5 мкм
|
250 х 4, 6
|
20 x 4
|
1, 0
|
|
Nucleosil® 120 С18, 5 мкм
|
250 х 4, 0
|
30 x 4
|
1, 3
|
|
Spherisorb® ODS2, 5 мкм
|
250 х 4, 6
|
20 x 4
|
1, 5
|
|
Varian® С18, 5 мкм
|
250 х 4, 6
|
20 х 4, 6
|
1, 2
|
|
Pickering® C18, 5 мкм
|
150 x 4, 6
|
20 x 4
|
1, 0
|
|
Hypersil® BDS C18, 3 мкм
|
150 x 3, 0
|
40 x 2
|
0, 5
|
|
ChromSpher® C18, 5 мкм
|
100 x 3, 0
|
40 x 3
|
0, 6
|
|
Hypersil® ODS, 5 мкм
|
250 х 4, 6
|
20 x 4
|
1, 0
|
|
Vydac® 201 ТР54 С18, 5 мкм
|
250 х 4, 6
|
50 x 2, 1
|
0, 8
|
|
Partisil® ODS3, 5 мкм
|
250 х 4, 6
|
20 x 4
|
1, 0
|
|
Supelco® C18, 5 мкм
|
250 х 4, 0
|
30 x 4
|
1, 5
|
|
YMC Pack® ODS-AM, 5 мкм
|
250 х 4, 6
|
150 x 4, 6
|
1, 3
|
|
Zorba® R x C18, 5 мкм
|
150 x 4, 6
|
20 x 4
|
1, 0
|
|
Zorba® ODS, 5 мкм
|
250 х 4, 6
|
20 x 4
|
1, 5
|
|
μBondapak® C18, 10 мкм
|
300 х 3, 9
|
20 x 4
|
1, 0
|
|
Prodigy® ODS3, 5 мкм
|
150 x 4, 6
|
20 x 4
|
1, 5
|
|
YMC® C30, 5 мкм(d)
|
250 х 4, 6
|
20 x 4
|
1, 5
|
|
(а) Нержавеющая сталь.
(b) Стекло.
(с) Состав подвижной фазы, который указан в настоящем стандарте.
(d) Данная колонка отделяет изомеры витамина K1 (цис- и транс-). Результаты, полученные на этой колонке, не включены в статистические данные.
|
Приложение ДА
(справочное)
Сведения о соответствии ссылочных европейских стандартов межгосударственным стандартам
Таблица ДА.1
|
Обозначение ссылочного европейского стандарта
|
Степень соответствия
|
Обозначение и наименование соответствующего межгосударственного стандарта
|
|
EN ISO 3696
|
-
|
*
|
|
* Соответствующий межгосударственный стандарт отсутствует. До его принятия рекомендуется использовать перевод на русский язык европейского стандарта EN ISO 3696. Официальный перевод данного европейского стандарта находится в Федеральном информационном фонде технических регламентов и стандартов Российской Федерации.
|
Библиография
|
[1]
|
Indyk, H.E., and Woollard, D.С.: Vitamin K in Milk and Infant Formulas: Determination of Phylloquinone and Menaquinone-4. Analyst 122, 1997, 465 - 469 (Витамин K в молоке и детских смесях. Определение содержания филлохинона и менахинона-4)
|
|
[2]
|
Indyk, H.E., Littlejohn, V.C., Lawrence, J.L., and Woollard, D.C.: Liquid Chromatographic Determination of Vitamin K1 in Infant Formulas and Milk. J. AOAC intern. 78, 1995, 719 - 723. AOAC Official Methods of Analysis, 17th Ed, 2000, Method 999.15 - Determination of Vitamin K1 by HPLC (Определение содержания витамина K1 в детских смесях и молоке при помощи жидкостной хроматографии. Официальные методы анализа. Определение содержания витамина K1 методом ВЭЖХ)
|
|
[3]
|
Haroon, Y., Bacon, D.S., and Sadowski, J.A.: Chemical reduction system for the detection of phylloquinone (vitamin K1) and menaquinones (vitamin K2:). J. Chromatogr. 384, 1987, 382 - 389 (Системы химической дериватизации для обнаружения филлохинона (витамина K1) и менахинонов (витамина K2:))
|
|
[4]
|
Indyk, H.E., and Woollard, D.C.: Vitamin K in Milk and Infant Formulas by Liquid Chromatography: Collaborative study. J. AOAC Intern. 83, 2000, 121 - 130 (Определение содержания витамина K в молоке и детских смесях методом жидкостной хроматографии: Совместное исследование)
|
|
[5]
|
The Merck Index: Vitamin K1. 12th Ed.: 7536, p. 1269 (1996) (Каталог Мерк. Витамин K1)
|
|
[6]
|
Ball, G. F. M, in G. F. M. Ball (Hrsg.): Fat-Soluble Vitamin Assays in Food Analysis: A Comprehensive Review. Else-vier Applied Science, London, 1988, 258 - 273 (Образцы жирорастворимых витаминов в анализе пищевых продуктов. Комплексный анализ)
|
|
[7]
|
Eitenmiller, R.R. and Landen, W.O.: Vitamin Analysis for the Health and Food Sciences. CRC Press, Boca Raton, London, New York, Washington, D.C., 1999, 149 - 184 (Анализ витаминов для наук о здоровье и пище)
|
|
[8]
|
European Pharmacopoeia 1997: 1997: 1036; Phytomenadione. 1332 - 1334 (Европейская фармакопея 1997. Фитоменадион)
|
|
[9]
|
European Pharmacopoeia - Supplement 2000: 1999: 1036; Phytomenadione. 1060 - 1062 (Европейская фармакопея. Дополнение 2000. Фитоменадион)
|
|
[10]
|
Woolard, D.C., Indyk, Н.Е., Bertram, Y.F., and Cook, K.K.: Determination of Vitamin K1 Isomers in Food by liquid Chromatography with С 30 Bonded-Phase Column, J. AOAC Intern. 85, 2002, 682 - 691 (Определение изомеров витамина K1 в пищевых продукта методом жидкостной хроматографии на колонке с С 30 химически связанной фазой)
|
— Все документы — ГОСТы — ГОСТ EN 14148-2015 ПРОДУКЦИЯ ПИЩЕВАЯ. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВИТАМИНА K1: МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Городом с самыми дешевыми квартирами в новостройках оказался Воронеж
Аналитик Гутман: период с мая по июль является лучшим периодом для продажи дачи
«МК»: в России не отменят льготную ипотеку
Аренда квартир в Москве подешевела на 10 %
Вице-премьер Хуснуллин: ставка по ипотеке должна быть пять процентов