Введен в действие приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 12 октября 2012 г. N 488-ст
Межгосударственный стандарт ГОСТ 31477-2012
"МЯСО И МЯСНЫЕ ПРОДУКТЫ. ИММУНОПРЕЦИПИТАЦИОННЫЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ МАССОВОЙ ДОЛИ ЖИВОТНОГО (ГОВЯЖЬЕГО, СВИНОГО, БАРАНЬЕГО) БЕЛКА"
Meat and meat products. Immune method of determination of animal (pork, beef, mutton) proteins
Дата введения - 1 июля 2013 г.
Введен впервые
Предисловие
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"
Сведения о стандарте
1 Разработан Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом мясной промышленности имени В.М. Горбатова Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИМП им. В.М. Горбатова Россельхозакадемии)
2 Внесен Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии
3 Принят Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол N 41 от 23 - 24 мая 2012 г.)
За принятие проголосовали:
Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97
|
Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97
|
Сокращенное наименование национального органа по стандартизации
|
Азербайджан
|
AZ
|
Азстандарт
|
Армения
|
AM
|
Минэкономики Республики Армения
|
Беларусь
|
BY
|
Госстандарт Республики Беларусь
|
Казахстан
|
KZ
|
Госстандарт Республики Казахстан
|
Кыргызстан
|
KG
|
Кыргызстандарт
|
Молдова
|
MD
|
Молдова-Стандарт
|
Российская Федерация
|
RU
|
Росстандарт
|
Таджикистан
|
TJ
|
Таджикстандарт
|
Узбекистан
|
UZ
|
Узстандарт
|
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 12 октября 2012 г. N 488-ст введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2013 г.
5 Настоящий стандарт подготовлен на основе применения ГОСТ Р 53514-2009
6 Введен впервые
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на мясо и мясные полуфабрикаты и устанавливает иммунопреципитационный метод определения массовой доли животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка.
Стандарт предназначен для идентификации свиного, говяжьего или бараньего белка в составе мясного сырья и мясных продуктов, не подвергнутых тепловой обработке.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:
ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования
ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности
ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты
ГОСТ 12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание
ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 9656-75 Реактивы. Кислота борная. Технические условия
ГОСТ 10652-73 Реактивы. Соль динатриевая этилендиамин-N, N, N', N'-тетрауксусной кислоты 2-водная (трилон Б). Технические условия
ГОСТ 20903-75 Кюветы прямоугольные кварцевые для спектрофотометров. Основные размеры. Технические требования
ГОСТ 25011-81 Мясо и мясные продукты. Методы определения белка
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 26678-85 Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия
Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов по указателю "Национальные стандарты", составленному по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Сущность метода
Метод основан на проявлении особых свойств защитных систем высших позвоночных - вырабатывать новые сывороточные белки (антитела) при введении в организм посторонних для него веществ (антигенов). Используют диагностическую преципитирующую сыворотку к конкретному виду животного белка, вызывающую образование нерастворимого комплекса антиген-антитело.
4 Диапазоны измерений и метрологические характеристики метода
4.1 Диапазон измерений массовой доли животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка от 1% до 85%.
4.2 Метрологические характеристики метода при доверительной вероятности 0, 95 приведены в таблице 1.
Таблица 1
Наименование показателя
|
Диапазон измерений массовой доли, %
|
Границы относительной погрешности, ±δ, %
|
Предел повторяемости, rотн, %
|
Предел воспроизводимости, Rотн, %
|
Массовая доля животного белка, %
|
От 1 до 85 включ.
|
30
|
24
|
38
|
5 Отбор проб
5.1 Отбор проб - по [1].
5.2 Пробу хранят в холодильнике при температуре от 0°С до 5°С до полного завершения испытания в течение суток.
Допускается хранение проб при температуре от минус 20°С до минус 10°С в герметичной упаковке в течение одной недели с даты отбора проб на исследование.
6 Средства измерений, оборудование, материалы и реактивы
Спектрофотометр типа "Аквилон"*, обеспечивающий измерения в диапазоне длин волн от 200 до 900 нм.
Кюветы кварцевые толщиной 1 см по ГОСТ 20903.
Весы лабораторные с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более ±0, 1 мг.
Микроизмельчитель тканей или гомогенизатор с частотой вращения 8000 - 24000 об/мин.
Центрифуга с регулируемой скоростью вращения до 8000 об/мин.
Пробирки центрифужные по ГОСТ 25336.
Аппарат встряхивающий.
Холодильник бытовой по ГОСТ 26678.
Дозатор пипеточный переменного объема.
Колбы мерные 2-го класса точности вместимостью 250 см3 по ГОСТ 1770.
Цилиндр мерный 2-го класса точности вместимостью 250 см3 по ГОСТ 1770.
Воронки стеклянные ВД-1-100 ХС по ГОСТ 25336.
Диагностическая сыворотка.
Свинина, говядина, баранина с массовой долей белка по Кьельдалю не менее 18% для использования в качестве контрольного образца.
Соевый изолят с массовой долей белка по Кьельдалю не менее 85%.
Кислота борная по ГОСТ 9656, ч.
2-амино-2(гидроксиметил)-1, 3-пропандиол (ТРИС) с массовой долей основного вещества 99, 9%.
Соль динатриевая этилендиамин-N, N, N', N'-тетрауксусной кислоты (трилон Б) по ГОСТ 10652, ч.д. а.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками, оборудования с техническими характеристиками и реактивов по качеству не ниже указанных в настоящем стандарте.
7 Подготовка к выполнению измерений
7.1 Приготовление растворов
7.1.1 Приготовление концентрированного буферного раствора
Навеску 2-амино-2(гидроксиметил)-1, 3-пропандиола (ТРИС) массой 15, 0 г и навеску трилона Б массой 1, 5 г с помощью воронки переносят в мерную колбу вместимостью 250 см3 и при перемешивании добавляют 100 - 150 см3 дистиллированной воды. Полученный раствор перемешивают, в него добавляют постепенно 5, 5 г борной кислоты и доводят объем раствора до метки дистиллированной водой. Раствор тщательно перемешивают до растворения осадка.
7.1.2 Приготовление рабочего буферного раствора
В мерную колбу вместимостью 250 см3 с помощью мерного цилиндра вносят 50 см3 концентрированного буферного раствора. Раствор в колбе доводят до метки дистиллированной водой, тщательно перемешивают и получают рабочий буферный раствор, содержащий в 1 см3 0, 012 г ТРИС, 0, 001 г трилона Б и 0, 0044 г борной кислоты.
7.2 Приготовление испытуемого экстракта пробы
7.2.1 Навеску пробы массой 5, 0 г перемешивают с 5 см3 рабочего буферного раствора в гомогенизаторе в течение 5 мин и выдерживают смесь 1 ч при температуре от 5°С до 8°С, периодически встряхивая в течение 5 мин.
7.2.2 Смесь центрифугируют при 5000 об/мин в течение 20 мин. Для измерений используют верхний прозрачный слой, содержащий экстракт анализируемого белка.
7.3 Приготовление двухкомпонентных модельных мясорастительных смесей для построения градуировочного графика
Навески по 25, 0 г свинины (говядины или баранины) смешивают с навесками 400, 0 г и 100, 0 г соевого изолята и навески по 100, 0 г свинины (говядины или баранины) смешивают с навесками 100, 30, 15 и 3, 5 г соевого изолята.
Каждую смесь перемешивают на микроизмельчителе тканей в течение 30 мин до образования гомогенной массы. Допускается использование уменьшенных навесок в случае приготовления смеси путем растирания в ступке. Получают двухкомпонентные модельные мясорастительные смеси, массовая доля животного (свиного, говяжьего, бараньего) белка в которых относительно массовой доли общего белка равна 1, 3%; 5, 0%; 17, 5%; 41, 4%; 58, 5% и 86, 1%.
Предварительно определяют массовую долю общего белка методом Кьельдаля по ГОСТ 25011.
8 Проведение измерений
8.1 Измерение испытуемых растворов
8.1.1 20 мм3 экстракта пробы смешивают с 400 мм3 рабочего буферного раствора, измеряют фоновое поглощение на спектрофотометре при λ = 405 нм (контроль), затем добавляют 20 мм3 диагностической сыворотки, содержащей антитела, к определяемому виду белка, проводят реакцию осаждения при постоянном встряхивании смеси в течение 1 ч. Для выявления специфического белка измеряют оптическую плотность среды в кювете с толщиной оптического слоя 1 см.
8.1.2 Для подтверждения действия диагностической преципитирующей сыворотки на животный белок параллельно проводят анализ контрольного образца, не содержащего определяемый белок.
8.1.3 Для каждого испытуемого раствора проводят два измерения, по результатам которых с помощью градуировочного графика находят средние значения массовой концентрации животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка в этих растворах.
8.2 Построение градуировочного графика
Градуировочный график строят по результатам двукратного определения в соответствии с 8.1.1 массовой доли животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка в двухкомпонентных модельных мясорастительных смесях, содержащих животный белок и добавки растительного соевого белка, соответственно в таблицах 2 - 4.
Таблица 2
Оптическая плотность среды (D405) при 405 нм
|
0, 070
|
0, 075
|
0, 100
|
0, 158
|
0, 200
|
0, 260
|
Массовая доля свиного белка в образце С, % от общего белка
|
1, 3
|
5, 0
|
17, 5
|
41, 4
|
58, 5
|
86, 1
|
Таблица 3
Оптическая плотность среды (D405) при 405 нм
|
0, 065
|
0, 085
|
0, 110
|
0, 135
|
0, 155
|
0, 175
|
0, 200
|
0, 225
|
0, 250
|
0, 275
|
Массовая доля говяжьего белка в образце С, % от общего белка
|
1
|
10
|
20
|
30
|
40
|
50
|
60
|
70
|
80
|
90
|
Таблица 4
Оптическая плотность среды (D405) при 405 нм
|
0, 060
|
0, 090
|
0, 115
|
0, 130
|
0, 160
|
0, 170
|
0, 190
|
0, 230
|
0, 260
|
0, 280
|
Массовая доля бараньего белка в образце С, % от общего белка
|
11
|
110
|
220
|
330
|
440
|
550
|
660
|
770
|
880
|
990
|
9 Обработка результатов
9.1 Массовую долю животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка Бж, %, относительно массовой доли общего белка, вычисляют по формуле
,
(1)
где С - среднеарифметическое значение массовой доли животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка в испытуемой пробе, %;
Бк - массовая доля общего белка в анализируемом образце, определенная методом Кьельдаля, %.
9.2 За окончательный результат измерения принимают среднеарифметическое двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости:
[(2|С1-С2|)/(С1+С2)]·100≤rотн,
(2)
где С1 и С2 - результаты параллельных определений массовой доли животного (свиного, говяжьего, бараньего) белка, определенные по градуировочному графику, %;
rотн - предел повторяемости, приведенный в таблице 1.
Результат вычислений округляют до целого числа.
10 Требования безопасности
10.1 При подготовке и проведении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007.
10.2 Помещение, в котором проводят измерения, должно быть снабжено приточно-вытяжной вентиляцией. Работу необходимо проводить, соблюдая правила личной гигиены и противопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.004, и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.
10.3 При работе с электроприборами необходимо соблюдать требования безопасности по ГОСТ 12.1.019.
_____________________________
* Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта.
Библиография
[1]
|
ИСО 17604:2003
|
Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Отбор проб с туши для микробиологического анализа
|
Комментарии (0)
Чтобы оставить комментарий вам необходимо авторизоваться