Введен в действие приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 18 января 2016 г. N 6-ст
Межгосударственный стандарт ГОСТ 33634-2015
"ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ, ПРОДОВОЛЬСТВЕННОЕ СЫРЬЕ. ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОСТАТОЧНОГО СОДЕРЖАНИЯ АНТИБИОТИКОВ ФТОРХИНОЛОНОВОГО РЯДА"
Food products, food raw materials. Immunoenzymatic method for determination of fluoroquinolones residual content
Дата введения - 1 января 2017 г.
Введен впервые
Предисловие
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"
Сведения о стандарте
1 Разработан Федеральным государственным бюджетным учреждением "Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов" (ФГБУ "ВГНКИ")
2 Внесен Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (Росстандарт)
3 Принят Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 27 октября 2015 г. N 81-П)
За принятие проголосовали:
|
Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97
|
Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97
|
Сокращенное наименование национального органа по стандартизации
|
|
Армения
Киргизия
Россия
|
AM
KG
RU
|
Минэкономики Республики Армения
Кыргызстандарт
Росстандарт
|
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 18 января 2016 г. N 6-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 33634-2015 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2017 г.
5 Введен впервые
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на мясо, мясо птицы, яйца, яичный меланж, яичный порошок, молоко и устанавливает иммуноферментный метод определения остаточного содержания антибиотиков фторхинолонового ряда (энрофлоксацина, ципрофлоксацина, норфлоксацина и офлоксацина) в диапазоне измерений от 5 до 1280 мкг/кг.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:
ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования
ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности
ГОСТ 12.1.019-79*(1) Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты
ГОСТ OIML R 76-1-2011 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания
ГОСТ 245-76 Реактивы. Натрий фосфорнокислый однозамещенный 2-водный. Технические условия
ГОСТ 334-73 Бумага масштабно-координатная. Технические условия
ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 2652-78 Реактивы. Калия бихромат технический. Технические условия
ГОСТ 4172-76 Реактивы. Натрий фосфорнокислый двузамещенный 12-водный. Технические условия
ГОСТ 4204-77 Реактивы. Кислота серная. Технические условия
ГОСТ 4233-77 Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия
ГОСТ 4328-77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия
ГОСТ ИСО 5725-6-2003*(2) Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике
ГОСТ 6552-80 Реактивы. Кислота ортофосфорная. Технические условия
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 7269-79 Мясо. Методы отбора образцов и органолептические методы определения свежести
ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу
ГОСТ 31467-2012 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Методы отбора проб и подготовка их к испытаниям
ГОСТ 29245-91 Консервы молочные. Методы определения физических и органолептических показателей
Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов по указателю "Национальные стандарты", составленному по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Термины, определения и сокращения
3.1 В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:
3.1.1 тест-система: Набор (комплект) специально подобранных реагентов (реактивов) и составных частей, предназначенный для определения одного или нескольких конкретных веществ.
3.1.2 вспомогательный раствор: Раствор, приготовляемый заблаговременно и необходимый для приготовления других типов растворов.
3.1.3 рабочий раствор: Раствор одного или нескольких реактивов, приготовляемый непосредственно перед использованием и необходимый для выполнения процедуры анализа.
3.2 В настоящем стандарте применены следующие сокращения:
ИФА - иммуноферментный анализ;
ОП - оптическая плотность;
АГ - антиген;
AT - антитела;
ФК - ферментный конъюгат;
П - относительное поглощение.
4 Сущность метода
4.1 Иммуноферментный метод основан на измерении содержания фторхинолонов в растворах экстрактов исследуемых проб с помощью непрямого твердофазного конкурентного ИФА.
4.2 Непрямой твердофазный конкурентный ИФА основан на способности антибиотиков фторхинолонового ряда взаимодействовать со специфичными AT, полученными к энрофлоксацину, в условиях конкуренции с белковым конъюгатом энрофлоксацина, нанесенным на поверхность лунок планшета, - твердофазным АГ.
4.3 Связавшиеся с твердой фазой AT взаимодействуют с вторичными антивидовыми AT, меченными пероксидазой хрена, которые выявляют путем измерения интенсивности окрашивания продукта реакции окисления 3, 3', 5, 5'-тетраметилбензидина (раствор N 11, см. приложение А) перекисью водорода.
Аналитический сигнал (регистрируемое значение ОП), характеризующий степень взаимодействия AT с АГ, обратно пропорционален массовой концентрации фторхинолонов в исследуемом растворе.
5 Метрологические характеристики
5.1 Установленный в настоящем стандарте метод обеспечивает определение содержания антибиотиков фторхинолонового ряда с расширенной неопределенностью результатов аналитических измерений при коэффициенте охвата k = 2, указанной в таблице 1.
Таблица 1 - Метрологические характеристики
|
Содержание фторхинолонов
|
Диапазон измерений содержания, мкг/дм3 (мкг/кг)
|
Значение относительной расширенной неопределенности U, при коэффициенте охвата k = 2,
Р = 0, 95, %
|
Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости) σr, %
|
Показатель воспроизводимости (относительное стандартное отклонение воспроизводимости) σR, %
|
Предел повторяемости r, % (при Р = 0, 95, n = 2)
|
|
В мясе, мясе птицы, яйцах, яичном порошке, яичном меланже, молоке
|
5 - 1280
|
75
|
13
|
35
|
36
|
5.2 Специфичность AT, применяемых для определения содержания фторхинолонов, выраженная в коэффициентах перекрестного реагирования, представлена в таблице 2.
Таблица 2 - Специфичность AT, применяемых для определения массовой концентрации фторхинолонов
|
Фторхинолон
|
Коэффициент перекрестного реагирования, %
|
|
Энрофлоксацин
|
100
|
|
Ципрофлоксацин
|
100
|
|
Норфлоксацин
|
60
|
|
Офлоксацин
|
20
|
6 Требования безопасности и условия выполнения измерений
6.1 При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007.
6.2 Помещения, в которых проводится анализ и подготовка проб, должны быть оборудованы приточно-вытяжной вентиляцией, и соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004 и электробезопасности по ГОСТ 12.1.019.
6.3 К выполнению измерений допускаются лица, владеющие техникой ИФА и изучившие инструкцию по применению тест системы и инструкции по эксплуатации используемых приборов.
6.4 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- температура окружающего воздуха ..............от.20°С до 30°С;
- атмосферное давление ..........................от 84 до 106 кПа;
- напряжение в питающем электросети .............от 200 до 240 В;
- частота переменного тока ......................от 49 до 51 Гц;
- относительная влажность воздуха ...............от 40% до 80%.
7 Средства измерений, аппаратура, материалы, посуда и реактивы
7.1 При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, аппаратуру, материалы и посуду:
- весы неавтоматического действия высокого класса точности по ГОСТ OIML R 76-1 с пределом допускаемой абсолютной погрешности ±0, 05 г;
- весы аналитические с пределом допускаемой абсолютной погрешности не более ± 0,1 мг;
- калькулятор любого типа с логарифмической функцией;
- рН-метр любой марки, позволяющий проводить измерения в диапазоне от 3 до 10 ед. рН с погрешностью ±0, 05 ед. рН;
- фотометр вертикального типа фотометрирования с диапазоном измерений ОП от 0 до 3 в комплекте с интерференционными светофильтрами для длин волн 450 и 620 нм;
- измельчитель-гомогенизатор лабораторный;
- морозильную камеру любого типа, обеспечивающую среднюю температуру в холодильной камере не выше минус 20°С;
- роторный испаритель любого типа или устройство для испарения экстрактов, термостатируемый нагревательный модуль с системой отдувки растворителей инертным газом;
- термостат любого типа, поддерживающий температуру (37±1)°С;
- холодильник бытовой с цифровым контроллером температуры и рабочим диапазоном температур от 0°С до 8°С;
- центрифугу с бакет-ротором и адаптером для пробирок вместимостью 15 см3, частотой вращения не менее 4000 об/мин;
- шейкер вортексного типа, с вставкой для одной пробирки и диапазоном скорости от 150 до 2500 об/мин;
- шейкер переворачивающий вертикального вращения 360° в одной плоскости с адаптером для пробирок и диапазоном скорости от 20 до 100 об/мин;
- шкаф сушильный любого типа, обеспечивающий поддержание температуры не менее (95±5)°С;
- бумагу масштабно-координатную по ГОСТ 334, марки Н-1;
- бумагу фильтровальную по ГОСТ 12026;
- колбы 1-10(100, 1000)-2 по ГОСТ 1770;
- колбу типа Кн-1-50-24/29 ТС по ГОСТ 25336;
- пипетки многоканальные переменной вместимости 0, 03 - 0, 3 см3, с допустимой относительной погрешностью дозирования по метанолу и ацетонитрилу не более ±1, 0%;
- пипетки одноканальные переменной вместимости 20 - 100 мм3, 200 - 1000 мм3, 500 - 5000 мм3 с допустимой относительной погрешностью дозирования по метанолу и ацетонитрилу не более ±1%;
- пробирки полипропиленовые вместимостью 15 см3 с завинчивающимися крышками;
- пробирки типа П-1-10-0, 1 ХС по ГОСТ 25336;
- пробирки типа "Эппендорф" вместимостью 1, 5 см3;
- цилиндры 1(2, 3)-100(250)-1 по ГОСТ 1770.
7.2 При выполнении измерений применяют следующие реактивы:
- ацетонитрил для хроматографии, о.с.ч., с массовой долей основного вещества не менее 99, 9%;
- воду дистиллированную по ГОСТ 6709;
- гексан с содержанием основного вещества не менее 98%, х.ч.;
- дихлорметан для газовой хроматографии с массовой долей основного вещества не менее 99, 9%;
- калия бихромат по ГОСТ 2652;
- кислоту ортофосфорную по ГОСТ 6552, концентрированную, х.ч.;
- кислоту серную по ГОСТ 4204, концентрированную;
- натрия гидроксид по ГОСТ 4328, х.ч.;
- натрия гидрофосфат безводный, х.ч., по ГОСТ 4172;
- натрия дигидрофосфат 2-водный, ч.д.а., по ГОСТ 245;
- натрий хлористый по ГОСТ 4233, х.ч.;
- тест-систему для непрямого твердофазного конкурентного ИФА, укомплектованную в соответствии с приложением А.
8 Подготовка к выполнению измерений
8.1 Подготовка оборудования
8.1.1 При подготовке к проведению измерений лабораторную стеклянную посуду моют смесью водного раствора бихромата калия с концентрированной серной кислотой, многократно промывают водопроводной водой, ополаскивают дистиллированной водой и высушивают в сушильном шкафу.
8.1.2 Подготовку и проверку фотометра, рМ-метра проводят в соответствии с руководствами по эксплуатации приборов.
8.2 Приготовление растворов
8.2.1 Приготовление раствора фосфорной кислоты молярной концентрацией 1 моль/дм3
В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 50 см3 дистиллированной воды и осторожно приливают 12 см3 концентрированной фосфорной кислоты, доводят объем раствора дистиллированной водой до метки, закрывают пробкой и тщательно перемешивают.
Срок хранения раствора в вытяжном шкафу при комнатной температуре - не более 1 мес.
8.2.2 Приготовление фосфатного буферного раствора молярной концентрацией 0, 067 моль/дм3 и рН 7, 2
В мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят 7, 67 г безводного гидрофосфата натрия, 2, 02 г 2-водного дигидрофосфата натрия и 8, 7 г хлорида натрия, растворяют в 500 см3 дистиллированной воды. Измеряют рН, устанавливают его значение до 7, 2±0, 2, осторожно по каплям прибавляя раствор фосфорной кислоты (см. 8.2.1) и постоянно перемешивая. Затем объем в колбе доводят до метки дистиллированной водой.
Срок хранения раствора при температуре 4°С - не более 1 мес.
8.2.3 Приготовление раствора гидроксида натрия молярной концентрацией 0, 1 моль/дм3
В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 0, 4 г гидроксида натрия, растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды, перемешивают и доводят до метки дистиллированной водой.
Срок хранения раствора при комнатной температуре - не более 1 мес.
8.2.4 Приготовление рабочего буферного раствора
В мерную колбу вместимостью 10 см3 приливают до метки раствор N 10 (см. приложение А), добавляют 28 мм3 раствора N 13 (см. приложение А), перемешивают и закрывают притертой пробкой.
Используют свежеприготовленный раствор.
8.2.5 Приготовление смеси ацетонитрила и раствора гидроксида натрия молярной концентрацией 0, 1 моль/дм3
В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 90 см3 ацетонитрила и доводят до метки раствором гидроксида натрия (см. 8.2.3). Колбу закрывают пробкой и тщательно перемешивают.
Срок хранения раствора при комнатной температуре в вытяжном шкафу - 2 сут.
8.2.6 Приготовление рабочих градуировочных растворов K0 - K5
Для приготовления рабочего разведения градуировочных растворов K0 - K5 в пробирки типа "Эппендорф", маркированные K0, K1, K2, K3, K4 и K5, вносят по 0, 27 см3 рабочего буферного раствора (см. 8.2.4) и по 0, 03 см3 реактивов N 3 - N 8 (см. приложение А), соответственно маркировке. Перемешивают, в результате получают растворы со следующими концентрациями энрофлоксацина: K0 - 0 мкг/см3; K1 - 0, 5 мкг/см3; K2 - 2, 0 мкг/см3; K3 - 8, 0 мкг/см3; K4 - 32, 0 мкг/см3; K5 - 128, 0 мкг/см3.
Используют свежеприготовленные растворы.
Концентрированные градуировочные растворы после вскрытия флаконов хранят при температуре от 2°С до 8°С в течение всего срока годности набора.
8.2.7 Приготовление рабочего раствора буфера для промывки
В колбу вместимостью 50 см3 вносят 47, 5 см3 дистиллированной воды, добавляют 2, 5 см3 реактива N 2 (см. приложение А), перемешивают.
Срок хранения раствора при температуре от 2°С до 8°С не более - 1 мес.
8.2.8 Приготовление рабочего раствора ферментного конъюгата
В стеклянную пробирку вносят 2, 25 см3 реактива N 10 (см. приложение А) и 0, 25 см3 реактива N 9 (см. приложение А), перемешивают.
Используют свежеприготовленный раствор.
8.3 Отбор проб
8.3.1 Отбор проб мяса и мясных продуктов - по ГОСТ 7269.
8.3.2 Отбор проб мяса птицы - по ГОСТ 31467.
8.3.3 Отбор проб молока - по ГОСТ 26809.
8.3.4 Отбор проб яиц, яичного меланжа и яичного порошка проводят по нормативным документам, действующим на территории государства, принявшего стандарт.
8.3.5 Срок хранения отобранных проб при температуре от 2°С до 8°С - 2 сут. При отсутствии возможности исследования проб в течение двух суток они должны быть заморожены при температуре минус 20°С со сроком хранения не более двух месяцев.
8.4 Подготовка проб
8.4.1 Подготовка проб мяса, мяса птицы, яиц, яичного меланжа, яичного порошка
Яйца отделяют от скорлупы и перемешивают на гомогенизаторе. Яичный меланж, яичный порошок тщательно перемешивают.
Мышечную ткань предварительно очищают от жира, грубой соединительной ткани и измельчают на гомогенизаторе. Далее обработку пробы проводят в соответствии с рисунком 1.
"Рисунок 1 - Обработка испытуемых проб"
8.4.2 Подготовка проб молока
Отобранную пробу молока перед анализом тщательно перемешивают.
В полипропиленовую пробирку вместимостью 15 см3 вносят 2 см3 пробы, 8 см3 смеси ацетонитрила и раствора натрия гидроксида (см. 8.2.5), гомогенизируют в течение 2 мин, после чего перемешивают на шейкере вортексного типа в течение 10 мин. Далее процедуру экстракции и обезжиривания пробы проводят согласно рисунку 1.
Сухие молочные продукты восстанавливают по ГОСТ 29245 (пункт 3.4).
9 Проведение иммуноферментного анализа
9.1 Общие положения
9.1.1 При проведении испытаний следует использовать реагенты и компоненты, входящие в один и тот же набор (тест-систему). Разбавление или замена реагентов из набора (тест-системы) другой серии не допускается.
9.1.2 Наборы (тест-системы) следует хранить при температуре от 2°С до 8°С в пределах срока хранения.
9.1.3 Окрашивание раствора субстрата N 11 (см. приложение А) является признаком его порчи и делает невозможным его применение для анализа.
9.2 Подготовка тест-системы к проведению анализа
9.2.1 Перед использованием тест-систему вынимают из холодильника и выдерживают при комнатной температуре не менее 30 мин, после чего аккуратно встряхивают каждый флакон. Реактив N 2 (см. приложение А) необходимо прогреть в сушильном шкафу при температуре 37°С до полного растворения кристаллов солей и тщательно перемешать.
9.2.2 После использования, реагенты тест-системы сразу помещают в холодильник.
9.2.3 На всех стадиях необходимо избегать воздействия прямого солнечного света.
9.2.4 Для каждого реактива и раствора используют отдельные съемные наконечники автоматических пипеток. Внесение растворов в лунки проводят осторожно, не касаясь наконечниками их дна и стенок.
9.2.5 Каждый исследуемый рабочий раствор экстрактов испытуемых проб анализируют в двух повторностях.
Примечание - Далее приведены расходы реактивов на два стрипа*(3), что достаточно для анализа двух исследуемых проб. Для другого числа проб количество используемых стрипов и смешиваемых объемов реагентов изменяют в соответствии с количеством исследуемых проб.
9.3 Проведение испытания
9.3.1 Из планшета извлекают необходимое число стрипов. Неиспользованные стрипы хранят в закрытом фольгированном полиэтиленовом пакете с зип-локом*(4) при температуре от 2°С до 8°С в течение срока годности тест-системы.
9.3.2 В лунки планшета вносят по 0, 05 см3 рабочих градуировочных растворов (8.2.6) и по 0, 05 см3растворов экстрактов испытуемых проб.
Каждый раствор вносят в двойной повторности (лунки-дубли).
Внесение растворов проводят согласно приложению Б.
Далее в каждую лунку вносят по 0, 05 см3 раствора N 1 (см. приложение А). Стрипы заклеивают пленкой или закрывают крышкой, инкубируют в термостате при температуре 37°С в течение 1 ч, после чего содержимое лунок сливают.
9.3.3 В лунки планшета вносят по 0, 2 см3 раствора буфера для промывки (см. 8.2.7), оставляют на 1 - 2 мин и сливают. Процедуру промывки повторяют еще три раза. Остатки жидкости интенсивно стряхивают на чистую фильтровальную бумагу.
9.3.4 В лунки планшета вносят по 0, 1 см3 раствора ферментного конъюгата (см. 8.2.8), заклеивают пленкой или закрывают крышкой, инкубируют в термостате при температуре 37°С 1 ч и отмывают, как указано в 9.3.3.
9.3.5 В лунки планшета вносят по 0, 1 см3 раствора N 11 (см. приложение А) и инкубируют при комнатной температуре в темноте в течение 15 мин. Добавляют 0, 1 см3 раствора N 12 (см. приложение А) и аккуратно перемешивают легким постукиванием по ребру планшета. Помещают планшет в вертикальный фотометр и измеряют значения ОП при длине волны 450 им.
Запись результатов проводят согласно приложению В.
10 Обработка результатов измерения
10.1 По показателям ОП в лунках-дублях находят среднеарифметические значения. Разность значений ОП для них в процентах от среднего не должна превышать 10.
Связывание AT (или относительное поглощение) П, %, рассчитывают по формуле
,
(1)
где ОПп - среднее значение ОП, измеренной в лунках с градуировочными растворами энрофлоксацина K1 - K5 (см. 8.2.6) или рабочими растворами экстрактов испытуемых проб;
ОПк - среднее значение ОП, измеренной в лунках с градуировочным раствором K0 (см. 8.2.6).
По значениям процентов связывания, вычисленным для градуировочных растворов и соответствующим известным значениям массовой концентрации энрофлоксацина мкг/см3), строят градуировочный график в полулогарифмической системе координат.
10.2 Для построения градуировочного графика используют масштабно-координатную бумагу. На ось абсцисс наносят значения логарифмов концентраций энрофлоксацина в рабочих разведениях градуировочных растворов (см. 8.2.6). По оси ординат откладывают значения процентов связывания, рассчитанные для массовых концентраций по формуле (1), и строят градуировочный график с использованием линейной зависимости.
10.3 С помощью градуировочного графика по значению процента связывания, полученного для рабочих растворов экстрактов испытуемых проб, находят логарифм массовой концентрации фторхинолонов. С помощью калькулятора вычисляют его обратное значение (антилогарифм), соответствующее массовой концентрации определяемого фторхинолона в растворе экстракта. После чего рассчитывают содержание фторхинолонов в пробе С, мкг/дм3 (мкг/кг), по формуле
C=c·K,
(2)
где с - массовая концентрация фторхинолонов в рабочем растворе экстракта испытуемой пробы, определяемая по градуировочному графику, мкг/дм3;
К - коэффициент пересчета мкг/дм3 в рабочем растворе экстракта испытуемой пробы в мкг/дм3 (мкг/кг), учитывающий как разведение, так и степень извлечения фторхинолонов и равный 10.
Результаты измерений массовой концентрации (содержания) фторхинолонов С, мкг/дм3 (мкг/кг), округляют до целого числа.
За окончательный результат принимают среднеарифметическое двух измерений, выполненных в условиях повторяемости, если выполняется условие приемлемости
|C1-C2|≤0, 01·Ccp·r,
(3)
где C1 и C2 - результаты определений содержания фторхинолонов, полученные в условиях повторяемости, мкг/кг,
Ccp - среднеарифметическое результатов двух определений содержания фторхинолонов в пробе, мкг/кг;
r - предел повторяемости, %, (см. таблицу 1).
10.4 Допускается использование программного обеспечения, позволяющего определять содержание фторхинолонов в пробе по средним значениям ОП, измеренным в лунках с градуировочными растворами и рабочими растворами экстрактов испытуемых проб.
11 Контроль точности результатов измерения
Проверку приемлемости результатов измерений, полученных в условиях повторяемости (сходимости) и воспроизводимости, проводят с учетом требований ГОСТ ИСО 5725-6 (раздел 5).
Относительное расхождение между результатами, полученными в разных лабораториях, не должно превышать относительного стандартного отклонения воспроизводимости (см. таблицу 1).
_____________________________
*(1) В Российской Федерации действует ГОСТ Р 12.1.019-2009 "Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".
*(2) В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике".
*(3) Стрип - полоска из восьми лунок.
*(4) Зип-лок - замок, обеспечивающий герметизацию пакета.
Приложение А
(рекомендуемое)
Комплектация тест-системы* "Фторхинолоны ИФА"
В комплектацию тест-системы входят:
Планшет 96-луночный полистироловый стрипованный для иммунологических исследований, сенсибилизированный антигеном;
Пакет полиэтиленовый фольгированный с зип-локом.
Пленка полиэтиленовая самоклеящаяся для заклеивания планшетов.
Растворы:
N 1 - AT - антитела к энрофлоксацину;
N 2 - раствор фосфатного буфера для промывки с добавлением твина-20 (20-кратный концентрат), рН (7, 0 - 7, 4);
N 3 - буфер для экстракции:
N 4 - K1, N 5 - K2, N 6 - K3, N 7 - K4, N 8 - K5 - градуировочные растворы с известным содержанием (мкг/дм3) энрофлоксацина;
N 9 - ФК - конъюгат антител против IgG (Н + L) кролика с пероксидазой хрена (10-кратный концентрат);
N 10 - реакционный буферный раствор с добавлением твина-20 и бычьего сывороточного альбумина, рН 7, 0 - 7, 4, стерильный;
N 11 - раствор субстрата на основе 3, 3', 5, 5'-тетраметилбензидина с добавлением перекиси водорода;
N 12 - стоп-реагент, раствор серной кислоты молярной концентрацией 0, 5 моль/дм3;
N 13 - натрия ацетат, раствор молярной концентрацией 1, 5 моль/дм3.
_____________________________
* Данный комплект реагентов является рекомендуемым и приведен для удобства пользователей настоящего стандарта.
Приложение Б
(рекомендуемое)
Схема заполнения лунок планшета
Внесение реагентов следует проводить согласно следующей схеме:
|
1
|
2
|
3
|
4
|
5
|
6
|
7
|
8
|
9
|
10
|
11
|
12
|
|
А
|
K0
|
K0
|
N 3
|
N 3
|
N 11
|
N 11
|
N 19
|
N 19
|
N 27
|
N 27
|
N 35
|
N 35
|
|
В
|
K1
|
K1
|
N 4
|
N 4
|
N 12
|
N 12
|
N 20
|
N 20
|
N 28
|
N 28
|
N 36
|
N 36
|
|
С
|
K2
|
K2
|
N 5
|
N 5
|
N 13
|
N 13
|
N 21
|
N 21
|
N 29
|
N 29
|
N 37
|
N 37
|
|
D
|
K3
|
K3
|
N 6
|
N 6
|
N 14
|
N 14
|
N 22
|
N 22
|
N 30
|
N 30
|
N 38
|
N 38
|
|
Е
|
K4
|
K4
|
N 7
|
N 7
|
N 15
|
N 15
|
N 23
|
N 23
|
N 31
|
N 31
|
N 39
|
N 39
|
|
F
|
K5
|
K5
|
N 8
|
N 8
|
N 16
|
N 16
|
N 24
|
N 24
|
N 32
|
N 32
|
N 40
|
N 40
|
|
G
|
N 1
|
N 1
|
N 9
|
N 9
|
N 17
|
N 17
|
N 25
|
N 25
|
N 33
|
N 33
|
N 41
|
N 41
|
|
Н
|
N 2
|
N 2
|
N 10
|
N 10
|
N 18
|
N 18
|
N 26
|
N 26
|
N 34
|
N 34
|
N 42
|
N 42
|
Приложение В
(рекомендуемое)
Таблица для записи результатов измерения
Таблица В.1
|
Маркировка варианта
|
Значение ОП
|
 , % |
lg С
|
Содержание фторхиналона
|
|
по лункам
|
среднее
|
в экстракте с, мкг/дм3
|
в исследуемой
пробе С, мкг/дм3 (мкг/кг)
|
|
K0
| | | | | | |
|
K1
| | | | | | |
|
K2
| | | | | | |
|
K3
| | | | | | |
|
K4
| | | | | | |
|
K5
| | | | | | |
|
N 1
| | | | | | |
|
N ...
| | | | | | |
|
N 42
| | | | | | |
— Все документы — ГОСТы — ГОСТ 33634-2015 ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ, ПРОДОВОЛЬСТВЕННОЕ СЫРЬЕ. ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОСТАТОЧНОГО СОДЕРЖАНИЯ АНТИБИОТИКОВ ФТОРХИНОЛОНОВОГО РЯДА
Городом с самыми дешевыми квартирами в новостройках оказался Воронеж
Аналитик Гутман: период с мая по июль является лучшим периодом для продажи дачи
«МК»: в России не отменят льготную ипотеку
Аренда квартир в Москве подешевела на 10 %
Вице-премьер Хуснуллин: ставка по ипотеке должна быть пять процентов