— Все документы — ГОСТы — ГОСТ 25383-82 (СТ СЭВ 2547-80) ЖИВОТНЫЕ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫЕ. МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ КОКЦИДИОЗА

ГОСТ 25383-82 (СТ СЭВ 2547-80) ЖИВОТНЫЕ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫЕ. МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ КОКЦИДИОЗА

ГОСТ 25383-82 (СТ СЭВ 2547-80) ЖИВОТНЫЕ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫЕ. МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ КОКЦИДИОЗА

Утв. Постановлением Госстандарта СССР от 11 августа 1982 г. N 3154
Государственный стандарт Союза ССР ГОСТ 25383-82 (СТ СЭВ 2547-80)
"ЖИВОТНЫЕ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫЕ. МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ КОКЦИДИОЗА"

Domestic animals. Methods of laboratory diagnostics of coccidiosis

С изменениями:

(27 мая 1987 г.)

Срок действия установлен с 1 января 1983 г.
до 1 января 1988 г.

Настоящий стандарт распространяется на все виды сельскохозяйственных животных и птиц и устанавливает методы лабораторной диагностики кокцидиоза.

Стандарт полностью соответствует СТ СЭВ 2547-80.

1. Методы отбора проб

1.1. Для проведения исследований отбирают пробы кала животных, пробы патологического материала, а также пробы подстилки.

1.2. Пробы кала берут от живых и павших животных.

1.2.1. От живых животных пробы кала берут у животных из одного стада, станка или же стаи с учетом числа животных в группе.

Если число животных в группе менее 100, кал берут не менее чем от 20 животных; в группе с числом животных от 101 до 500 - от 10%; с числом животных от 501 до 1000 - от 5% и с числом животных свыше 1000 - от 2% животных.

1.2.2. Кал берут из прямой кишки животного. От каждой головы крупного рогатого скота берут 50 г кала, овец, коз и свиней - 20 г, домашней птицы и кроликов - 10 г.

Отобранные пробы смешивают, получая объединенную пробу.

В случае проведения исследований кала от каждого животного смешивание проб не производят.

Допускается отбирать пробы кала с пола станков, выгулов и т.п.

1.2.3. От павших животных кал берут из конца ободочной кишки или из прямой кишки в количествах, указанных в п. 1.2.2.

1.2.4. Отобранные пробы кала упаковывают в полиэтиленовый пакет или помещают в хорошо закрывающийся сосуд.

До проведения исследований пробы хранят при температуре 2-4°С или консервируют, добавляя 2, 5%-ный раствор бихромата калия.

1.3. Пробы патологического материала отбирают при вскрытии павших животных.

Пробы берут из патолого-анатомически измененных частей кишки, у кроликов - также из желчного пузыря и паренхимы печени, у гусей - из почек. Если пробы нельзя исследовать сразу, кишку разрезают в продольном направлении и помещают в 2, 5%-ный раствор бихромата калия. Из печени кроликов вырезают беловатые очаги и консервируют их тем же способом. Пробы для гистологического исследования хранят в 10%-ном растворе формальдегида.

1.4. Пробы подстилки в зависимости от размера помещения отбирают не менее чем из десяти разных мест в бумажный или полиэтиленовый пакет.

1.5. Ко всем отобранным пробам прилагают сопроводительный документ с указанием:

количества проб;

размера поголовья;

системы содержания;

возраста и пола животных;

категории упитанности;

заболеваемости или смертности;

продолжительности заболевания;

способа проведенной санитарной обработки;

даты взятия материала для исследования.

2. Методы исследований

2.1. Методы определения наличия ооцист в кале

Сущность метода заключается в определении с помощью микроскопа наличия ооцист кокцидий, всплывающих на поверхность раствора с исследуемым материалом.

2.1.1. Аппаратура, материалы и реактивы

2.1.1.1. Для проведения исследования применяют:

микроскоп с окулярным микрометром марки МБИ-3 по ГОСТ 8284-78;

весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104-80 с наибольшим пределом взвешивания 200 г;

центрифугу с частотой вращения 5000 мин-1;

стаканы стеклянные вместимостью 150-200 см3 и 1000 см3по ГОСТ 25336-82;

чашки стеклянные лабораторные по ГОСТ 25336-82;

стекла предметные по ГОСТ 9284-75 и покровные по ГОСТ 5672-75;

пипетки градуированные исполнений 1, 2, 4, 5, 6, 2-го класса точности вместимостью 50 см3 по ГОСТ 20292-74;

посуду лабораторную фарфоровую;

воронки стеклянные по ГОСТ 25336-82;

штатив для пробирок;

петли;

марлю медицинскую по ГОСТ 9412-77;

вату гигроскопическую медицинскую по ГОСТ 5556-81;

фильтры беззольные по ГОСТ 12026-76;

натрий хлористый по ГОСТ 4233-77;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72.

2.1.2. Подготовка к исследованию

2.1.2.1. Приготовление флотационного раствора

К 1 дм3 горячей воды добавляют 400 г хлористого натрия, тщательно размешивают, выдерживают 30 мин и фильтруют через вату или складчатый фильтр в чистую склянку. Плотность флотационного раствора должна составлять 1, 3 г/см2.

2.1.2.2. Исключен с 1 января 1988 г.

2.1.3. Проведение исследования

2.1.3.1. Из пробы выделяют навеску кала массой 3-5 г, помещают навеску в ступку, заливают 15-20 см3 воды, размешивают до жидкой консистенции и процеживают через марлю в центрифужные пробирки.

Пробирки центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 5000 мин-1. Жидкую часть сливают, затем добавляют 10 см3 флотационного раствора, тщательно перемешивают палочкой и повторно центрифугируют. При помощи петли из каждой пробирки берут по три капли раствора, наносят на предметное стекло и накрывают покровным стеклом. Определяют наличие ооцист под микроскопом. После проведения одного исследования петлю обжигают.

2.2. Метод определения количества ооцист в кале

2.2.1. Аппаратура, материалы и реактивы

2.2.1.1. Для проведения исследования применяют аппаратуру, материалы и реактивы, указанные в п. 2.1.1, и дополнительно счетную камеру Горяева.

2.2.2. Проведение исследования

2.2.2.1. Взвешивают 5 г кала, взятого из отобранной пробы, и тщательно размешивают в ступке с 45 см3 воды. Полученную суспензию фильтруют через один слой марли, осадок отбрасывают. 10 см3 фильтрата помещают в центрифужную пробирку и центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 5000 мин-1. Жидкую часть сливают, к осадку добавляют 10 см3 флотационного раствора, тщательно перемешивают и еще раз центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 5000 мин-1. Из пробирки снимают при помощи петли поверхностный слой жидкости и в счетной камере Горяева подсчитывают количество ооцист во всех 225 квадратах. Для определения количества ооцист в 1 г кала, подсчитанное в камере Горяева, число ооцист умножают на 1111.

2.2.3. Обработка результатов

2.2.3.1. У домашней птицы наличие 50000 ооцист на 1 г кала не влияет на зоотехнические показатели цыплят, обнаружение более 100000 ооцист на 1 г кала свидетельствует о заражении средней степени, обнаружение ооцист в количестве более 300000 на 1 г кала - о высокой степени заражения и малой эффективности применяемого препарата.

У крупного рогатого скота и овец наличие до 1000 ооцист в 1 г кала свидетельствует о низкой степени заражения, до 5000 - о средней степени заражения, более 5000 - о высокой степени заражения.

У кроликов наличие до 10000 ооцист на 1 г кала служит признаком низкой степени заражения, до 100000 - высокой степени заражения, более 100000 - очень высокой степени заражения.

2.3. Метод исследования павших или убитых животных

Сущность метода заключается в выявлении и определении с помощью микроскопа различных стадий кокцидий в пробах, взятых при паталого-анатомическом вскрытии животных. У животных исследуют желудочно-кишечный тракт, при этом учитывают наличие в крови паталого-анатомических изменений, локализацию, а также размер, форму, цвет, структуру стадий развития.

2.3.1. Аппаратура и реактивы

2.3.1.1. Для проведения исследования применяют:

ножницы по ГОСТ 21239-77;

пинцеты по ГОСТ 21241-77;

Чашки лабораторные стеклянные по ГОСТ 25336-82;

пипетки пастеровские;

натрий хлористый по ГОСТ 4233-77;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72.

2.3.2. Проведение исследования

2.3.2.1. Исследуемые части кишок кладут в чашки Петри или другую посуду и разрезают в продольном направлении. Несколько капель содержимого кишки разбавляют на предметном стекле физиологическим раствором, накрывают покровным стеклом и рассматривают под микроскопом. Можно также соскабливать краем предметного стекла слизистую оболочку пораженной кишки. Соскоб разбавляют физиологическим раствором и рассматривают под микроскопом для установления наличия мерозоитов, шизонтов или гамет кокцидий.

У павших кроликов исследуют беловатые очаги в печени и содержимое желчного пузыря на наличие ооцист кокцидий Eimeria. Очаги разрезают и с помощью пастеровской пипетки наносят их содержимое на предметное стекло. Накрыв препарат покровным стеклом, рассматривают его под микроскопом. Аналогичным образом поступают и с поражениями почек гусей.

2.3.3. Обработка результатов

2.3.3.1. Для своевременной диагностики кокцидиоза у домашней птицы подсчет ооцист проводят один раз в 7 дней, начиная в двух-, трехнедельного возраста цыплят. Из каждой группы вскрывают по 4-6 ослабленных птиц. Исследуют соскобы со слизистой и содержимое кишечника в месте перехода двенадцатиперстной кишки в тощую, середины тонкого отдела кишечника и слепых кишок. Несколько капель наносят на предметное стекло, разбавляют водой и накрывают покровным стеклом. Просматривают под микроскопом 20 полей зрения, определяют среднее количество ооцист на одно поле зрения и проводят идентификацию кокцидий вида Eimeria в соответствии с ключом идентификации, представленном на схеме. В зависимости от клинических проявлений, степени и характера изменений отделов кишечника, локализации поражения и стадий развития кокцидий определяют виды ооцист Е. tenella, E. necatrix, E. acervulina, E. maxima, E. ргаесох. (см. схему. См. с. 339).

2.3.4. Оценка результатов

2.3.4.1. Наличие ооцист видов Е. acervulina менее 50 и ооцист Е. tenella, Е. necatrix, Е. maxima менее 5 кокцидий в поле зрения - признак низкой степени заражения.

При установлении разных стадий развития кокцидий в большом количестве у павших птиц или животных кокцидиоз считают причиной падежа.

2.4. Метод исследования подстилки на наличие ооцист кокцидий

Сущность метода заключается в подсчете количества ооцист в 1 г подстилки и определении по данным подсчета тяжести клинического течения кокцидиоза и резистентности кокцидий к используемому антикокцидиозному препарату.

2.4.1. Аппаратура, материалы и реактивы

2.4.1.1. Для проведения исследования применяют аппаратуру, материалы и реактивы, указанные в п. 2.1.1.

2.4.2. Проведние исследования

2.4.2.1. Пробу подстилки хорошо перемешивают и взвешивают 100 г. Заливают 1 дм3 воды, выдерживают до набухания содержимого и тщательно размешивают. Полученную суспензию фильтруют через марлю, осадок отбрасывают. Фильтрат тщательно перемешивают и отбирают 100 см3 в центрифужную пробирку. Центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 5000 мин-1. Жидкую часть сливают, к осадку добавляют 50 см3 флотационного раствора, тщательно перемешивают и центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 5000 мин-1. Из пробирки снимают при помощи петли поверхностный слой и в счетной камере Горяева подсчитывают количество ооцист во всех 225 квадратах. Полученное число ооцист умножают на 5555, и определяют количество ооцист в 1 г подстилки.

2.4.3. Исключен с 1 января 1988 г.

2.5. Метод установления интенсивности инфекции

2.5.1. Проведение исследования

2.5.1.1. Интенсивность инфекции ооцистами Eimeria или другими формами развития этого рода устанавливают подсчетом их в микроскопическом препарате и делением полученного числа на 3.

2.5.2. Обработка результатов

2.5.2.1. Подсчитанное число ооцист делят на 3. Это число будет равным числу паразитов в 1 г кала. В зависимости от этого для самых патогенных видов Eimeria устанавливают следующие степени интенсивности инфекции:

слабая инфекция (+) - 1-10 ооцист на 1 г кала;

средняя инфекция (++) - 11-100 ооцист на 1 г кала;

сильная инфекция (+ + +) - больше 100 ооцист на 1 г кала.

При оценке интенсивности инфекции следует учитывать не только наличие ооцист различных видов Eimeria, но и присутствие других паразитов.

Ключ и идентификации видов Eimeria цыплят

Наименование показателя

Характеристика

Клинические признаки

Кровотечения

I

Кровотечений не отмечено

Патологические изменения

Глубокие эрозии эпителия

I

Слизистый энтерит

I

Слизистонекротический энтерит

Отдел кишечника

I

Слепые кишки

I

I

I

Тонкая кишка

I

I

I

12-перстная, верхний отдел тонкой кишки

I

Средний отдел тонкой кишки

I

I

Нижний отдел тонкой кишки

I

Наличие в мазке развивающихся стадий кокцидий

I

Большие шизонты

I

I

I

Большие шизонты

I

I

I

Гаметоциты и мелкие ооцисты в большом количестве

I

Гаметоциты и большие желтоватые ооцисты

I

Гаметоциты или ооцисты

I

I

Дополнительные признаки

I

Казеозная масса в слепых кишках, большое количество ооцист

I

I

Слепые кишки без изменений

I

I

I

I

I

I

Слабое заражение характеризуется наличием беловатых раздельных фокусон, сильное - слиянием поражений и распространением по кишечнику.

I

I

I

I

При сильном заражении видимые геморрагии или некрозы

I

I

I

I

I

I

I

Беловатый энсудат и казеозные массы, в тяжелых случаях некроз нижнего отдела кишечника

I

I

I

I

При слабо заражении сероватые или красноватые стенки кишок без видимой крови

I

I

↓

E. tenella

I

I

↓

Е. necatrix

I

I

↓

Е. acervulina

I

I

↓

Е. maxima

I

I

↓

E. ргаесох

Возврат к списку
(Нет голосов)

Комментарии (0)


Чтобы оставить комментарий вам необходимо авторизоваться
Самые популярные документы
Новости
Все новости