Введен в действие приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 28 сентября 2012 г. N 446-ст
Межгосударственный стандарт ГОСТ 31486-2012
"ПРЕМИКСЫ. МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ВИТАМИНА К3"
Premixes. Method for determination of vitamin К3
Дата введения - 1 июля 2013 г.
Введен впервые
Предисловие
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"
Сведения о стандарте
1 Разработан Открытым акционерным обществом "Всероссийский научно-исследовательский институт комбикормовой промышленности" (ОАО "ВНИИКП")
2 Внесен Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии
3 Принят Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол N 41 от 23 - 24 мая 2012 г.)
За принятие проголосовали:
Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97
|
Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97
|
Сокращенное наименование национального органа по стандартизации
|
Азербайджан
|
AZ
|
Азгосстандарт
|
Армения
|
AM
|
Минторгэкономразвития
|
Кыргызстан
|
KG
|
Кыргызстандарт
|
Российская Федерация
|
RU
|
Росстандарт
|
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 28 сентября 2012 г. N 446-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 31486-2012 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2013 г.
5 Настоящий стандарт подготовлен на основе применения ГОСТ Р 53027-2008
6 Введен впервые
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на премиксы и устанавливает фотометрический метод определения витамина К3.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования
ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности
ГОСТ 12.1.018-93 Система стандартов безопасности труда. Пожаровзрывобезопасность статического электричества. Общие требования
ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты
ГОСТ 83-79 Реактивы. Натрий углекислый. Технические условия
ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 1942-86 1, 2-Дихлорэтан технический. Технические условия
ГОСТ 3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия
ГОСТ 3760-79 Реактивы. Аммиак водный. Технические условия
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия
ГОСТ 13496.0-80 Комбикорма, сырье. Методы отбора проб
ГОСТ 24104-2001 Весы лабораторные. Общие технические требования
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 29169-91 (ИСО 648-77) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой
ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования
Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в часта, не затрагивающей эту ссылку.
3 Диапазоны измерений содержания витамина К3 и метрологические характеристики метода
Диапазоны измерений содержания витамина К3 и значения показателей повторяемости, воспроизводимости и точности при вероятности Р = 0, 95 приведены в таблице 1.
Таблица 1
Диапазон измерений, г/т
|
Показатель повторяемости (относительное среднеквадратичное отклонение повторяемости) σr, %
|
Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратичное отклонение воспроизводимости) σR, %
|
Показатель точности (границы относительной погрешности) ±δ, %
|
От 0 до 100 включ.
|
4, 8
|
7, 1
|
14
|
Св. 100 до 500 "
|
2, 9
|
5, 1
|
10
|
" 500 " 1000 "
|
2, 7
|
4, 9
|
9, 6
|
4 Требования техники безопасности
4.1 При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004, ГОСТ 12.1.018 и электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019.
4.2 Помещение, в котором проводят измерения, должно быть снабжено приточно-вытяжной вентиляцией. Работу с реактивами необходимо проводить в вытяжном шкафу.
4.3 При работе с концентрированными кислотами и щелочами необходимо использовать резиновые перчатки.
5 Отбор и подготовка проб к выполнению анализа
5.1 Отбор проб - по ГОСТ 13496.0.
Допускается отбирать пробы премиксов, упакованных в бумажные мешки, мешочным щупом с последующим заклеиванием отверстия.
5.2 Подготовка пробы к анализу - по [1].
6 Определение содержания витамина К3
Сущность метода заключается в извлечении витамина К3 из исследуемой пробы этиловым спиртом, реэкстракции 1, 2-Дихлорэтаном и фотометрировании продукта цветной реакции его с (2, 4-Динитрофенил)-гидразином при длине волны 635 нм.
6.1 Средства измерений, оборудование, материалы и реактивы
Весы лабораторные по ГОСТ 24104 с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более ±0, 0001 г.
Фотоэлектроколориметр с рабочим спектральным диапазоном от 315 до 980 нм с основной погрешностью измерений коэффициента пропускания не более 1% или спектрофотометр типа СФ.
Аппарат для встряхивания жидкости типа АВУ-1.
Центрифуга лабораторная ЦЭ-2 с числом оборотов 3000 об/мин.
Баня водяная с регулятором нагрева.
Колбы конические Кн-2-(250)-(34, 40) ТХС по ГОСТ 25336.
Колбы мерные 1(2)-2-25(100) по ГОСТ 1770.
Пипетки градуированные 2(3)-1(2)-2-0, 5(1, 0; 2, 0; 5, 0; 10; 25) по ГОСТ 29227.
Пипетки с одной меткой 1(2)-2-2(10, 20, 25, 50) по ГОСТ 29169.
Цилиндры 1(3)-50(100) по ГОСТ 1770.
Воронки лабораторные В-36(56, 75)-50(80, 110) ХС по ГОСТ 25336.
Воронки делительные ВД-1-250 ХС по ГОСТ 25336.
Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026 или фильтры "красная лента".
Аммиак водный по ГОСТ 3760.
(2, 4-Динитрофенил)-гидразин.
Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья с объемной долей этилового спирта 96, 0% - 96, 3%.
Кислота соляная по ГОСТ 3118.
Витамин К3 менадион (2-метил-1, 4-нафтохинон) фирмы Supelko
1, 2-Дихлорэтан по ГОСТ 1942.
Натрий углекислый по ГОСТ 83, раствор с массовой долей углекислого натрия 10%.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Примечания
1 Допускается применение средств измерений, вспомогательного оборудования с аналогичными метрологическими и техническими характеристиками, а также материалов и реактивов, по качеству не ниже указанных.
2 Все реактивы должны быть квалификации х.ч. или ч.д.а.
6.2 Подготовка к выполнению анализа
6.2.1 Приготовление раствора (2, 4-Динитрофенил)-гидразина
80 мг (2, 4-Динитрофенил)- гидразина, взвешенного с погрешностью не более ±0, 01 мг, помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3, растворяют при нагревании до 70°С на водяной бане в 80 см3 этилового спирта по 6.1, охлаждают до комнатной температуры, добавляют 2 см3 соляной кислоты (35% - 38%) и доводят содержимое в колбе до метки этиловым спиртом, тщательно перемешивают.
6.2.2 Приготовление раствора этилового спирта с массовой долей 40%
В стеклянную емкость вносят 40 см3 этилового спирта, приливают 56 см3 дистиллированной воды, перемешивают.
6.2.3 Приготовление стандартного раствора витамина К3
Навеску витамина К3 массой 10 мг, взвешенную с погрешностью не более ±0, 1 мг, переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, приливают до метки этиловый спирт с массовой долей 40% и тщательно перемешивают.
Затем 10 см3 полученного раствора переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, доводят до метки этиловым спиртом с массовой долей 40% и перемешивают.
25 см3 полученного раствора отбирают в делительную воронку вместимостью 250 см3, добавляют 50 см3 1, 2-Дихлорэтана, 20 см3 раствора углекислого натрия с массовой долей 10% и перемешивают в течение 0, 5 - 1, 0 мин. Раствор отстаивают до разделения фаз. Затем фазу, содержащую 1, 2-Дихлорэтана (нижнюю), переносят в другую делительную воронку, добавляют 20 см3 дистиллированной воды и перемешивают в течение 0, 5 мин. После перемешивания раствор снова отстаивают до фазоразделения и фазу, содержащую 1, 2-Дихлорэтана, фильтруют через бумажный беззольный фильтр. Получают стандартный раствор витамина К3, в 1 см3 которого содержится 5 мкг витамина К3. Раствор витамина К3 хранят в холодильнике при температуре от 4°С до 6°С.
6.2.4 Построение градуированного графика
В 10 мерных колб вместимостью по 25 см3 приливают стандартный раствор витамина К3 (см. 6.2.3) в объемах, указанных в таблице 2.
Таблица 2 - Растворы сравнения
Наименование показателя
|
Номера колб
|
1
|
2
|
3
|
4
|
5
|
6
|
7
|
8
|
9
|
10
|
Объем стандартного раствора, см3
|
0, 5
|
1, 0
|
2, 0
|
3, 0
|
4, 0
|
5, 0
|
6, 0
|
7, 0
|
8, 0
|
9, 0
|
Масса витамина К3, мкг/25 см3
|
2, 5
|
5
|
10
|
15
|
20
|
25
|
30
|
35
|
40
|
45
|
В каждую из 10 колб приливают по 7, 5 см3 раствора (2, 4-Динитрофенил )-гидразина и помещают их в водяную баню одновременно с испытуемыми и контрольным растворами (см. 6.2.5) на 2 ч при температуре (70±2)°С, периодически перемешивая содержимое колб. После этого растворы в колбах охлаждают до комнатной температуры, приливают в каждую колбу по 7, 5 см3 смеси этилового спирта по 6.1 и водного аммиака с массовой долей 25% в объемном соотношении 1:1, перемешивают, доводят объемы в колбах до метки этиловым спиртом, тщательно перемешивают и измеряют оптические плотности растворов сравнения в порядке возрастания их концентраций на спектрофотометре при длине волны 635 нм или фотоэлектроколориметре с красным светофильтром при длине волны (625±25) нм в кювете толщиной поглощающего свет слоя 10 мм относительно контрольного раствора.
По полученным данным строят градуировочный график, откладывая на оси ординат значения оптической плотности растворов сравнения, на оси абсцисс - содержание витамина К3, мкг/25 см3 раствора.
6.2.5 Приготовление контрольного раствора
5 см3 1, 2-Дихлорэтана отбирают в мерную колбу вместимостью 25 см3, приливают 7, 5 см3 раствора (2, 4-Динитрофенил) - гидразина. Колбу помещают в водяную баню одновременно с испытуемыми пробами и растворами сравнения, далее проводят ту же самую обработку, что и с испытуемой пробой по 6.3.2 и 6.3.3.
6.3 Проведение анализа
6.3.1 Навеску премикса массой от 5 до 10 г, взвешенную с погрешностью не более ±0, 01 г, помещают в колбу вместимостью 250 см3, приливают 100 см3 этилового спирта с массовой долей 40%, встряхивают на аппарате в течение 15 мин и центрифугируют в течение 10 мин при 3000 об/мин. Центрифугат фильтруют для устранения случайно оставшихся взвешенных частиц. Отбирают от 5 до 25 см3 фильтрата в зависимости от предполагаемого содержания витамина К3 в испытуемом образце премикса, в делительную воронку вместимостью 250 см3 приливают 50 см3 1, 2-Дихлорэтана и 20 см3 раствора углекислого натрия с массовой долей 10% и перемешивают в течение 0, 5 - 1, 0 мин.
Раствор отстаивают до разделения фаз. Затем фазу, содержащую 1, 2-Дихлорэтана, в полном объеме переносят в другую делительную воронку, приливают в нее 20 см3 дистиллированной воды и перемешивают в течение 0, 5 мин.
После этого раствору снова дают отстояться до фазоразделения и фазу, содержащую 1, 2-Дихлорэтана, фильтруют через бумажный беззольный фильтр.
6.3.2 5 см3 1, 2-Дихлорэтанового экстракта испытуемых проб отбирают в мерную колбу вместимостью 25 см3, приливают 7, 5 см3 раствора (2, 4-Динитрофенил)-гидразина (см. 6.2.1), колбу помещают в водяную баню и выдерживают ее 2 ч при температуре (70±2)°С, периодически перемешивая содержимое колбы.
6.3.3 По истечении указанного времени содержимое колбы охлаждают до комнатной температуры, приливают 7, 5 см3 смеси этилового спирта по 6.1 и водного аммиака с массовой долей 25% в объемном соотношении 1:1, доводят объем в колбе этиловым спиртом до метки, тщательно перемешивают и измеряют оптическую плотность испытуемого раствора на спектрофотометре при длине волны 635 нм или фотоэлектроколориметре с красным светофильтром при длине волны (625±25) нм в кювете толщиной поглощающего свет слоя 10 мм относительно контрольного раствора (см. 6.2.5). Раствор готовят в день проведения анализа.
7 Обработка результатов анализа
7.1 Содержание витамина К3 в премиксе Х, г/т, вычисляют по формуле
,
(1)
где с - масса витамина К3, найденная по градуировочному графику, мкг;
v - объем спиртового экстракта, см3;
v2 - объем 1, 2-Дихлорэтана, взятый для экстракции, см3;
106 - коэффициент перевода микрограммов в граммы;
m - масса навески премикса, г;
v1 - объем фильтрата спиртового экстракта, взятый для экстрагирования 1, 2-Дихлорэтаном, см3;
v3 - объем 1, 2-Дихлорэтанового экстракта, взятый для окрашивания, см3;
106 - коэффициент перевода граммов в тонны.
7.2 Вычисления выполняют с точностью до второго десятичного знака с последующим округлением до первого десятичного знака.
8 Оформление результатов анализа
При анализе каждой пробы выполняют два параллельных определения, начиная со взятия навески испытуемой пробы. Если расхождение между результатами параллельных определений не превышает допустимое (X1, X2, - результаты первого и второго параллельных определений и их среднеарифметическое значение соответственно), то среднеарифметическое значение принимают за результат анализа. В противном случае получают еще два результата определений и вычисляют окончательный результат анализа пробы по [2] (подраздел 5.2).
Значения предела повторяемости r и предела воспроизводимости R приведены в таблице 3.
Таблица 3
Диапазон измерений, г/т
|
Предел повторяемости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами параллельных определений) r, %
|
Предел воспроизводимости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в разных лабораториях) R, %
|
От 0 до 100 включ.
Св. 100 " 500 "
" 500 " 1000 "
|
13
8
8
|
20
14
14
|
По полученному результату анализа и значению относительной погрешности δ (см. таблицу 1) рассчитывают абсолютную погрешность по формуле
,
(4)
где - среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений.
Результат анализа представляют в виде (), %. Допускается представление результата в виде (), %, где Δл - значение характеристики погрешности результатов анализа, установленное при реализации методики в конкретной лаборатории и обеспечиваемое контролем стабильности результатов анализа, при условии Δл≤Δ.
Библиография
[1]
|
ИСО 6498:1998
|
Корма для животных. Приготовление проб для испытания
|
[2]
|
ИСО 5725-6:1994
|
Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике
|
Комментарии (0)
Чтобы оставить комментарий вам необходимо авторизоваться