Национальный стандарт РФ ГОСТ Р ИСО 16256-2015
"КЛИНИЧЕСКИЕ ЛАБОРАТОРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ТЕСТ-СИСТЕМЫ IN VITRO. РЕФЕРЕНТНЫЙ МЕТОД ДЛЯ ТЕСТИРОВАНИЯ АКТИВНОСТИ IN VITRO АНТИМИКРОБНЫХ ПРЕПАРАТОВ В ОТНОШЕНИИ ДРОЖЖЕВЫХ ГРИБОВ, ВЫЗЫВАЮЩИХ ИНФЕКЦИОННЫЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ"
(утв. приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 27 апреля 2015 г. N 300-ст)
Clinical laboratory testing and in vitro diagnostic test systems. Reference method for testing the in vitro activity of antimicrobial agents against yeast fungi involved in infectious diseases
Дата введения - 1 июня 2016 г.
Введен впервые
Предисловие
1 Подготовлен Обществом с ограниченной ответственностью "Медтехстандарт" (ООО "Медтехстандарт") на основе собственного аутентичного перевода на русский язык международного стандарта, указанного в пункте 4
2 Внесен Техническим комитетом по стандартизации ТК 380 "Клинические лабораторные исследования и диагностические тест-системы in vitro"
3 Утвержден и введен в действие приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 27 апреля 2015 г. N 300-ст
4 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ИСО 16256:2012 "Клинические лабораторные исследования и диагностические тест-системы in vitro. Референтныйметоддлятестированияактивности in vitro антимикробныхпрепаратоввотношениидрожжевыхгрибов, вызывающихинфекционныезаболевания" (ISO 16256:2012 "Clinical laboratory testing and in vitro diagnostic test systems - Reference method for testing the in vitro activity of antimicrobial agents against yeast fungi involved in infectious diseases")
5 Введен впервые
Введение
Испытания чувствительности in vitro проводятся на микроорганизмах, предположительно являющихся причиной заболевания, особенно если организм относят к видам, которые могут проявлять резистентность к часто используемым антимикробным препаратам. Данные исследования также важны для контроля над резистентностью, в эпидемиологических исследованиях чувствительности и при сравнении новых и существующих препаратов.
Процедуры разведения используются для определения минимальных подавляющих концентраций (МПК) антимикробных препаратов и представляют собой референтный метод испытания чувствительности микроорганизмов к антимикотическим препаратам.
Методы МПК используются:
- для наблюдения над резистентностью,
- при сравнительных испытаниях новых препаратов для исследовательских и регистрационных целей;
- для определения чувствительности организмов, которые в рутинных тестах показывают сомнительные результаты;
- для испытаний на организмах, для которых рутинные тесты могут быть ненадежными, и в случае, когда для клинической практики необходим количественный результат.
В методах разведений микроорганизмы проверяются на способность к видимому росту на ряде агаризованных сред (разведение в агаре) или в бульоне (разведение в бульоне), содержащих последовательные разведения антимикробного препарата.
Наименьшую концентрацию антимикробного препарата (в мг/л), которая при определенных условиях испытаний in vitro подавляет видимый или оптически измеримый рост микроорганизмов в течение определенного промежутка времени, называют МПК.
МПК служит руководством для определения чувствительности организма к антимикробным препаратам для практикующего врача и помогает в принятии решения о проведении лечения. Необходимы тщательный контроль и стандартизация внутри- и межлабораторной воспроизводимости, поскольку результат в значительной степени зависит от методов испытания.
Общепринято, что при анализе МПК в бульонных тестах, воспроизводимых в пределах единственного двукратного разведения, результат достоверен (т.е. ±1 лунка или пробирка в серии двукратных разведений).
Разведение в бульоне - техника, при которой емкости, содержащие идентичные объемы растворов бульона с антимикробными препаратами в постепенно возрастающих концентрациях (как правило, в два раза), инокулированы известным количеством микроорганизмов.
Микроразведение в бульоне - тестирование в бульоне, выполняемое в планшетах для микроразведения.
Референтные методы настоящего стандарта предназначены для испытаний чистых культур дрожжевых грибов. Методы микроразведения в бульоне, описанные в настоящем стандарте, по существу аналогичны методам Clinical and Laboratory Standards Institute (Института клинических и лабораторных Стандартов) (CLSI) [1] и методам European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (Европейского комитета по вопросам исследования Чувствительности к Антимикробным препаратам) (EUCAST) [2].
Настоящими методами была показана схожесть, вплоть до идентичности, в определении значений МПК для флуконазола до 2 мг/л [3]. Исследования с некоторыми другими антимикотическими препаратами запланированы или находятся в процессе подготовки. Лаборатории, желающие использовать настоящий стандарт для проведения исследований новейших антимикотических препаратов, либо в качестве референтного метода для сопоставления МПК, проводимого с помощью диагностических приборов, должны выбрать процедуры испытания, основываясь на варианте прочтения МПК, установленного путем визуального анализа (CLSI метод) или при использовании спектрофотометра (EUCAST метод). В обоих случаях должны в точности соблюдаться процедурные детали для выбранного параметра.
ПРЕДОСТЕРЕЖЕНИЕ! Применение настоящего стандарта может быть связано с использованием опасных материалов, процедур и оборудования. Настоящий стандарт не предусматривает решения проблем безопасности, связанных с его применением. Ответственность за введение соответствующих правил техники безопасности, мер по охране здоровья и определение применимости регулятивных ограничений до начала использования полностью лежит на пользователе настоящего стандарта.
1 Область применения
Настоящий стандарт описывает метод испытания чувствительности к антимикотическим препаратам дрожжевых культур, вызывающих инфекции, включая Candida spp. и Cryptococcus neoformans. Референтный метод, описанный в настоящем стандарте, не использовался в исследованиях дрожжевых форм диморфных грибов, таких как В. dermatitidis и/или Н. capsulatum, разновидность capsulatum. Кроме того, исследования мицелиальных грибов (плесени) позволили выявить несколько дополнительных проблем в стандартизации, которые не учтены в данной методике. Референтные методы разведения в бульоне для тестирования чувствительности к антимикотическим препаратам мицелиальных грибов разработаны и в настоящее время доступны в виде CLSI документа М38 и EUCAST документа E.DEF 9.1 [4], [5], [6], [7], [8].
Настоящий стандарт описывает референтный метод микроразведения в бульоне, который может быть выполнен двумя различными путями. Один путь подразумевает визуальное определение МПК (CLSI метод) [1]: второй - спектрофотометрическое (EUCAST метод) [2]. МПК свидетельствует об активности лекарственного препарата в описанных условиях испытания и может быть интерпретирован для целей клинической практики с учетом и других факторов, таких как фармакология лекарственных средств или механизмы антимикотической резистентности. МПК могут быть распределены по следующим категориям: "чувствительные" (Ч) ("susceptible", S), "чувствительные, дозозависимые" (ЧДЗ) ("susceptible dose-dependent", S-DD), "промежуточные" (П) ("intermediate", I), "нечувствительные" (НЧ) ("non-susceptible", NS), резистентные" (Р) ("resistant", R). Дополнительно, классификация МПК может быть использована для определения дикого и не дикого типов грибных популяций. Клиническая интерпретация значений МПК находится вне области применения настоящего стандарта; интерпретацию категорий пограничных значений, характерных для методов, производных от CLSI и EUCAST, можно найти, сверившись с последними пояснительными таблицами, предоставляемыми организациями [2], [9]. Желательно сравнивать методы рутинного тестирования чувствительности или диагностических приборов для тестирования сданным референтным методом с целью гарантирования сопоставимых и надежных результатов для валидации и регистрации.
2 Термины и определения
В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:
2.1 антимикотический препарат (antifungal agent): Вещество биологического, полусинтетического или синтетического происхождения, которое подавляет или полностью останавливает рост грибов, и таким образом потенциально применимо для лечения инфекций.
Примечание - Дезинфицирующие средства, антисептики и консерванты не включены в данное определение.
2.2 антимикотические препараты - свойства (antifungal agents-properties)
2.2.1 активность (potency): Активная фракция тестируемого вещества, определяемая в биопробе в сравнении с референтным образцом того же вещества.
Примечание - Активность выражают как массовую долю в миллиграммах на грамм (мг/г), или как значение активности в Международных единицах (ME) на грамм, или как объемная доля в процентах, или как молярная концентрация в молях на литр компонентов в испытуемом веществе.
2.2.2 концентрация (concentration): Количество антимикотического препарата в определенном объеме жидкости.
Примечания
1 Концентрацию выражают в мг/л.
2 мг/л = мкг/мл, но не рекомендуется использование единицы измерения мкг/мл.
2.3 основной раствор (stock solution): Исходный раствор, используемый для дальнейших разведений.
2.4 минимальная подавляющая концентрация; МПК (minimum inhibitory concentration, MIC): Наименьшая концентрация, которая при определенных условиях испытания in vitro ослабляет рост на определенную величину в течение определенного периода времени.
Примечание - МПК выражают в мг/л.
2.5 пограничные значения (breakpoint, ВР): Специфические значения МПК, которые могут быть использованы для распределения грибов по клиническим категориям: "чувствительные" (Ч) ("susceptible", S), "чувствительные, дозозависимые" (ЧДЗ) ("susceptible dose-dependent", S-DD), "промежуточные" (П) ("intermediate", I), "нечувствительные" (НЧ) ("nonsusceptible", NS) или "резистентные" (Р) ("resistant", R).
Примечание - Для текущих интерпретаций пограничных значений можно сослаться на последние публикации организаций, применяющих данный референтный метод (например, CLSI and EUCAST) [1], [2], [9].
2.5.1 путь визуального чтения (visual reading pathway)
2.5.1.1 "чувствительный"; Ч ("susceptible", S): Грибной штамм, ингибированный in vitro концентрацией антимикотического препарата, ассоциированный с высокой вероятностью терапевтического успеха.
Примечания
1 Грибные штаммы относят к категории чувствительных при применении соответствующих пограничных значений в определенной фенотипической тест-системе.
2 Данное пограничное значение может быть изменено в определенных обстоятельствах (например, изменения в обычно используемых дозах лекарственных препаратов, появление новых механизмов резистентности).
2.5.1.2 "чувствительные, дозозависимые"; ЧДЗ (susceptibledose-dependent, S-DD): Грибной штамм, ингибированный in vitro концентрацией антимикотического препарата, который может быть применен in vivo при использовании повышенных доз препарата, если такие схемы применения безопасны.
Примечания
1 Грибные штаммы относят к категории "чувствительных, дозозависимых" при применении соответствующих пограничных значений в определенной фенотипической тест-системе.
2 Данный класс чувствительности означает, что инфекция, вызванная изолятом, может быть соответствующим образом обработана в таких участках тела, где лекарственный препарат присутствует в физиологических концентрациях, или при использовании высокой дозы лекарственного препарата.
3 Данное пограничное значение может быть изменено в определенных обстоятельствах (например, изменения в обычно используемых дозах лекарственных препаратов, появление новых механизмов резистентности).
2.5.1.3 "промежуточный"; П ("intermediate", I): Микроорганизм, уровень противомикробной активности препарата к которому связан с неопределенным терапевтическим эффектом.
Примечание - Отсюда следует, что инфекция, вызванная изолятом, может быть соответствующим образом обработана в таких участках тела, где лекарственный препарат присутствует в физиологических концентрациях, или при использовании высокой дозы лекарственного препарата; он также указывает на буферную зону, которая должна предотвращать мелкие неконтролируемые технические факторы от несоответствий в интерпретации.
2.5.1.4 "нечувствительный"; НЧ ("nonsusceptible", NS): Категория, используемая для дрожжевых грибов, для которых в настоящее время определена только интерпретативная категория "чувствительные", но не интерпретивные категории "чувствительные, дозозависимые", "промежуточные" и "устойчивые" (то есть исключительно интепретивная категория "чувствительные").
Примечание - В данную категорию обычно включают новые антимикотические препараты, для которых еще не встречались резистентные изоляты.
2.5.1.5 резистентный; Р ("resistant", R): Грибной штамм, ингибированный in vitro концентрацией антимикотического препарата, ассоциирующийся с высокой вероятностью отсутствия терапевтического успеха.
Примечания
1 Штаммы грибов относятся к категории резистентных при применении соответствующих пограничных значений в заданной фенотипической тест-системе.
2 В определенных обстоятельствах пограничные значения могут быть изменены (например, изменения в обычно используемых дозах лекарственных препаратов, появление новых механизмов резистентности).
2.5.2 путь спектрофотометрического чтения (spectrophotometric reading pathway)
2.5.2.1 чувствительный; Ч ("susceptible", S): Микроорганизм, уровень антимикробной активности которого связан с высокой вероятностью терапевтического успеха.
2.5.2.2 промежуточный; П ("intermediate", I): Микроорганизм, уровень антимикробной активности которого связан с сомнительным терапевтическим эффектом.
Примечание - Отсюда следует, что инфекция, вызванная изолятом, может быть соответствующим образом обработана в таких участках тела, где лекарственный препарат присутствует в физиологических концентрациях, или при использовании высокой дозы лекарственного препарата: он также указывает на буферную зону, которая должна предотвращать мелкие неконтролируемые технические факторы от несоответствий в интерпретации.
2.5.2.3 резистентный; Р ("resistant", R): Микроорганизм, уровень антимикробной активности которого связан с высокой вероятностью терапевтической неудачи.
2.6 дикий тип (wild type): Отсутствие приобретенных механизмов резистентности к антимикотическому препарату для данного грибного штамма.
2.7 референтный штамм (reference strain): Зарегистрированный, полностью охарактеризованный грибной штамм с определенными стабильными фенотипами и/или генотипами чувствительности к антимикотикам.
Примечание - Референтные штаммы хранят в качестве исходных культур, из которых получают рабочие культуры. Они могут быть получены из коллекций культур и использованы для контроля качества.
2.8 методы испытания чувствительности
2.8.1 разведение в бульоне (broth dilution): Техника, при которой емкости заполняются соответствующими объемами антимикотического раствора, с использованием возрастающих (в два раза) концентраций антимикотического препарата и соответствующих объемов бульона заданного инокулюма.
Примечание - Цепь этого метода заключается в определении МПК.
2.8.2 микроразведение (microdilution): Выполнение разведения в бульоне в планшетах для микроразведения емкостью ≤300 мкл на лунку.
2.9 бульон (broth): Жидкая среда, обычно используемая для выращивания дрожжевых грибов in vitro.
2.10 инокулюм (inoculum): Количество дрожжевых клеток в суспензии в расчете на конечный объем.
Примечание - Инокулюм выражается в колониеобразующих единицах на миллилитр (КОЕ/мл).
2.11 инокулюм-эффект (inoculum effect): Изменения в МПК, связанные с изменениями в инокулюме.
3 Процедуры испытания
— Все документы — ГОСТы — ГОСТ Р ИСО 16256-2015 КЛИНИЧЕСКИЕ ЛАБОРАТОРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ТЕСТ-СИСТЕМЫ IN VITRO. РЕФЕРЕНТНЫЙ МЕТОД ДЛЯ ТЕСТИРОВАНИЯ АКТИВНОСТИ IN VITRO АНТИМИКРОБНЫХ ПРЕПАРАТОВ В ОТНОШЕНИИ ДРОЖЖЕВЫХ ГРИБОВ, ВЫЗЫВАЮЩИХ ИНФЕКЦИОННЫЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ
Городом с самыми дешевыми квартирами в новостройках оказался Воронеж
Аналитик Гутман: период с мая по июль является лучшим периодом для продажи дачи
«МК»: в России не отменят льготную ипотеку
Аренда квартир в Москве подешевела на 10 %
Вице-премьер Хуснуллин: ставка по ипотеке должна быть пять процентов