МУК 4.2.964-00 САНИТАРНО-ПАРАЗИТОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВОДЫ ХОЗЯЙСТВЕННОГО И ПИТЬЕВОГО ИСПОЛЬЗОВАНИЯ

Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование РоссийскойФедерации

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Санитарно-паразитологическое исследование воды хозяйственного и питьевого использования

Методические указания

МУК 4.2.964-00

Минздрав России

Москва · 2000

Санитарно-паразитологическое исследование воды хозяйственного и питьевого использования: Методические указания. - М.: Федеральный центр госсанэпиднадзора Минздрава России, 2000.

1. Подготовлены коллективом авторов: Г.И. Новосильцев (к.м.н.), Н.А. Романенко (д.м.н., академик РАЕН), В.А. Рябченко (к.б.н.), Г.С. Горяинова, Т.А. Семенова (к.б.н.), М.Е. Батаева (к.м.н.), Ю.А. Рахманин (д.м.н., академик РАМН), Р.Э. Михайлова (д.м.н.) - ИМПиТМ им. Е.И. Марциновского Минздрава России, НИИКВОВ АКХ им. К.Д. Памфилова, НИИЭЧиГОС им. А.Н. Сысина РАМН. Использованы материалы, разработанные Н.А. Русановой (к.м.н), Г.Л. Медришем (к.т.н.) - НИИКВОВ АКХ им. К.Д. Памфилова.

2. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 22 марта 2000 г.

3. С введением настоящих методических указаний утрачивают силу МУК 4.2.668-97 «Санитарно-паразитологическое исследование воды» и раздел «Контроль качества питьевой воды по паразитологическому показателю (содержание цист лямблий)», пункты 4, 5, 6 Информационно-методического письма «О дополнительных мерах по осуществлению контроля качества питьевой воды по микробиологическим и паразитологическим показателям» от 24 июля 1998 г. № 1100/1670-98-11.

СОДЕРЖАНИЕ

1. Назначение и область применения. 2

2. Методика санитарно-паразитологического исследования воды хозяйственного и питьевого использования. 2

2.1. Принцип методики. 2

2.2. Чувствительность метода. 2

3. Оборудование и материалы.. 3

3.1. Оборудование. 3

3.2. Реактивы.. 4

3.3. Приготовление рабочих растворов реактивов. 4

4. Отбор и хранение проб. 4

5. Ход исследования. 5

6. Оценка результатов исследования. 6

7. Визуальная оценка вероятной жизнеспособности цист патогенных простейших кишечника и яиц гельминтов. 7

Приложение 1. 8

Приложение 2. 8

Приложение 3. 9

УТВЕРЖДАЮ

Главный государственный

санитарный врач Российской

Федерации - Первый заместитель

Министра здравоохранения

Российской Федерации

Г.Г. Онищенко

22 марта 2000 г.

Дата введения: 1 июня 2000 г.

Санитарно-паразитологическое исследование воды хозяйственного и питьевого использования

Методические указания

МУК 4.2.964-00

1.1. Настоящие методические указания устанавливают метод лабораторного исследования качества воды хозяйственно-питьевого и культурно-бытового водопользования по паразитологическим показателям безопасности для здоровья человека, проводимого в порядке государственного санитарно-эпидемиологического надзора.

1.2. Методические указания предназначены для применения в лабораториях учреждений, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор, а также ведомственный лабораторный контроль качества окружающей среды на соответствие:

*          СанПиН 2.1.4.559-96 «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества»;

*          СанПиН 2.1.2.568-96 «Гигиенические требования к устройству, эксплуатации и качеству воды плавательных бассейнов»;

*          СанПиН 3.2.563-96 «Профилактика паразитарных болезней на территории Российской Федерации»;

*          действующим санитарным правилам по охране поверхностных вод от загрязнения.

Методика предназначена для обнаружения в воде цист патогенных простейших кишечника (лямблий, амебы дизентерийной, балантидия) и яиц гельминтов, представляющих непосредственную угрозу для здоровья человека при их заглатывании, при осуществлении контроля качества воды по паразитологическим показателям в источниках хозяйственно-питьевого водоснабжения (поверхностных водоемах, ручьях, каптажах, колодцах, артезианских скважинах), в распределительной сети систем централизованного хозяйственно-питьевого водоснабжения, а также в водоемах рекреационного назначения*.

________________

* Настоящая методика не предназначена для индикации в воде ооцист криптоспоридий, т.к. для их определения требуются более сложная подготовка диагностического материала и использование дорогостоящих специальных тест-систем, не выпускаемых в настоящее время отечественными производителями.

Цисты патогенных простейших кишечника и яйца гельминтов обнаруживаются при микроскопическом исследовании осадка, получаемого после центрифугирования не менее 4-кратно разведенного раствора флотанта с плотностью 1,26, в который искомые паразитарные агенты попадают из осадка, смываемого с мембранных фильтров после фильтрации через них исследуемой воды. Осаждение цист простейших и яиц гельминтов происходит за счет резкого снижения плотности флотанта, которая после разведения достигает 1,03 и менее, что ниже плотности паразитарных агентов. Плотность их приводится в разделе 7.

Метод обладает чувствительностью с пределом обнаружения, равным единичным цистам лямблий на 1 л. Эффективность выделения цист лямблий данным методом зависит от исходной концентрации паразитарных патогенов в пробе, объема пробы, мутности, обилия фитопланктона и квалификации исполнителя.

3.1.1. Устройство для вакуумной фильтрации через мембранные фильтры: стационарное устройство, используемое для бактериологических и химических исследований в лабораториях водоочистных станций и центров госсанэпиднадзора: фильтровальный аппарат АФ или «Прибор вакуумного фильтрования» ПВФ-142/ЭМ. При отсутствии указанных стационарных установок может быть использован аппарат Гольдмана, состоящий из воронки Гольдмана, колбы для фильтрования под вакуумом номинальной вместимостью 2000-5000 мл (ГОСТ 6514-63), водоструйного насоса (ГОСТ 10696-75) или насоса Комовского, а в полевых условиях - ручного велосипедного насоса или других установок, прошедших гигиеническую оценку и имеющих гигиеническое заключение.

3.1.2. Мембранные фильтры с порами размером 3-5 мк и диаметром мембранного диска, соответствующим размерам фильтровальной ячейки фильтрующего устройства, - от 35 ± 2 мм и более. В качестве мембранных фильтров могут быть применены фильтрующие мембраны «Владипор» марки МФАС-СПА ТУ 6-55-221-15-18-98 (предназначены для использования в приборе ПВФ-142/ЭМ), «Миллипор», «Прагопор», «Сарториус» или другие с аналогичными свойствами, прошедшие гигиеническую оценку и имеющие гигиеническое заключение.

3.1.3. Лабораторная центрифуга типа ОПН-3, ОПН-8, ЦЛС-31М со сменным ротором или другие с аналогичными параметрами, обеспечивающие 1500-2500 об/мин (600-650 g), позволяющие центрифугировать пробы воды в центрифужных пробирках объемом 10-250 мл.

3.1.4. Холодильник электрический или газовый, поддерживающий температуру 4-6 °С.

3.1.5. Термостат электрический типа ТС-80 или аналогичный с автоматическим терморегулятором и термометром с ценой деления 0,2 °С.

3.1.6. Микроскоп биологический (типа МБИ, «Биолам» и др.), снабженный бинокулярной насадкой (АУ-12 и др.), препаратоводителем (типа СТ-12 и др.), имеющий объективы 10, 20, 40 и объектив 90-100х масляной иммерсии, а также желательно объектив 40-65х водной иммерсии, обеспечивающий увеличение от 100 до 1000 крат, имеющий объектив и укомплектованный окуляр-микрометром и объект-микрометром для калибровки первого, а также имеющий оптику фазового контраста, расширяющую возможности дифференциации цист от фитопланктона.

3.1.7. Осветитель ОИ-19 для микроскопа или другой аналогичный с мощностью лампы не менее 50 ватт.

3.1.8. Весы лабораторные для взвешивания в диапазоне 50 мг - 200 г равноплечные ручные (аптекарские) с разновесами, ВЛР-200 и др.

3.1.9. Денсиметры (ареометры) типа 1 (А1) с пределами измерения от 1,000 до 1,400 кг/м³ ГОСТ 1300-74.

3.1.10. Дозаторы пипеточные П1-0,1, П1-0,5, П1-1,0 мл ТУ 64-339-81 или аналогичные.

3.1.11. Пинцет анатомический.

3.1.12. Кисти мягкие из волоса белки, колонка или соболя для живописи №№ 12-18.

3.1.13. Стаканы стеклянные высокие с носиком (ВН) номинальной вместимостью 50-100 мл ГОСТ 10394-63.

3.1.14. Пробирки центрифужные градуированные (ПЦГ) емкостью 10 мл ГОСТ 1770-64.

3.1.15. Стекла предметные 25 ´ 75 мм.

3.1.16. Стекла покровные 18 ´ 18, 24 ´ 24 мм ГОСТ 6672-59.

3.1.17. Чашки биологические (Петри) ГОСТ 25336-82.

3.1.18. Часы песочные на 3-5 мин или часы сигнальные.

3.1.19. Штативы лабораторные для пробирок ТУ 64-1-707-80.

3.1.20. Емкости для отбора проб воды из нейтрального материала, пригодные для обеззараживания принятыми методами: канистры пластмассовые емкостью 5-10-20-25 л, стеклянные бутыли, фляги молочные металлические емкостью 30-35 л, эмалированные бидоны.

3.1.21. Цилиндры измерительные с носиком 1-100, 1-250, 1-500 ГОСТ 1770-74.

3.1.22. Колба 2-50-2, 2-100-2, 1-1000 ГОСТ 1770-74.

3.1.23. Капельница для многократной дозировки по Манну ГОСТ 9876-61.

3.1.24. Широкогорлые стеклянные или пластиковые флаконы емкостью 100-500 мл с притертыми или завинчивающимися крышками.

3.1.25. Спиртовка.

3.1.26. Иглы препаровальные.

3.1.27. Ножницы с прямыми браншами.

3.2.1. Формальдегид 40 %-ный (продажный).

3.2.2. Сульфат цинка семиводный (ZnSО₄ 7Н₂О) х.ч.

3.2.3. Сахароза ч.д.а.

3.2.4. Сульфат магния (MgSО₄) ч.д.а.

3.2.5. Тиосульфат натрия ГОСТ 244-76.

3.2.6. Вода дистиллированная ГОСТ 6709-72.

3.2.7. Натрий хлористый х.ч. ГОСТ 4233-77.

3.2.8. Йод кристаллический х.ч.

3.2.9. Калий йодистый (KI) х.ч.

3.2.10. Эозин сухой х.ч.

3.2.11. Метиленовый синий сухой х.ч.

3.2.12. Кислота хлористоводородная (НСl) 30 % х.ч.

3.2.13. Сульфат аммония [(NH₄)₂SО₄] х.ч.

3.2.14. Сульфат железа [Fе₂(SО₄)₃] х.ч.

3.2.15. Сульфат меди (CuSО₄) x.ч.

3.2.16. Панкреатин сухой.

3.2.17. Сода двууглекислая (Na₂CO₃).

3.3.1. Флотанты - любой из трех ниже названных:

*                    33 %-ный водный раствор семиводного сульфата цинка: 331 г семиводного сульфата цинка растворяют в 1 дм³ кипящей дистиллированной воды;

*                    30 %-ный водный раствор сахарозы: 300 г сахарозы ч.д.а. растворяют в 1 дм³ горячей (70-80 °С) дистиллированной воды;

*                    раствор, состоящий из смеси насыщенных растворов сульфата магния (250 г соли растворяют в 1 л воды при температуре 80 °С), тиосульфата натрия (300 г соли растворяют в 1 л кипящей воды) и дистиллированной воды, соотношение компонентов 3:3:1.

После приготовления флотанта и снижения его температуры до 18 °С контролируют его удельную плотность ареометром. Для выделения цист простейших и яиц гельминтов, представляющих непосредственную опасность заражения человека при заглатывании с водой, удельная плотность флотанта должна быть 1,25-1,26. Если величина этого показателя ниже, ее нужно откорректировать, добавляя более концентрированные растворы соответствующих веществ.

3.3.2. 3 %-ный раствор Люголя: 1,5 г йода кристаллического и 3 г калия йодистого растворяют в 100 мл дистиллированной воды (первым растворяют калий йодистый), выдерживают в темноте при 37 °С в течение 3 суток, после чего используют в работе.

3.3.3. 2 %-ный водный раствор формалина: 1 часть 40 %-ного формальдегида растворяют в 20 частях дистиллированной воды.

3.3.4. Жидкость Барбагалло: 3 %-ный формалин на физиологическом растворе (0,85 % хлорида натрия).

3.3.5. 1 %-ный водный раствор эозина.

3.3.6. Раствор, состоящий из 1 части метиленового синего и 50000 частей дистиллированной воды, готовят путем последовательных разведений.

3.3.7. Смесь (искусственный дуоденальный сок), состоящая из 0,5 г панкреатина, 0,9 г двууглекислой соды и 5 мл дистиллированной воды.

3.3.8. Раствор хлористоводородной кислоты 1 %-ный.

Отбор проб питьевой воды и воды плавательных бассейнов по количеству и кратности проводят в соответствии с СанПиН 2.1.4.559-96 «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества» и СанПиН 2.1.2.568-96 «Гигиенические требования к устройству, эксплуатации и качеству воды плавательных бассейнов».

Контроль воды подземных водоисточников по паразитологическим показателям может быть рекомендован при условии неоднократных неудовлетворительных микробиологических результатов исследования.

Количество проб и точек забора в распределительной сети утверждается по согласованию с санитарно-эпидемиологической службой при разработке рабочей программы с учетом численности водопотребителей.

Отбор проб воды производится в чистые емкости. Сосуды больших объемов - молочные фляги, металлические и пластмассовые ведра и т.п., которые тщательно промываются кипяченой водой и ополаскиваются отбираемой для анализа водой.

Пробы воды могут доставляться в лабораторию без обработки или, в целях облегчения их транспортирования, после предварительной обработки (концентрирования материала путем фильтрования на месте отбора проб, в лаборатории водопроводной станции и др.).

С этой же целью может быть использована методика первичной концентрации паразитарных патогенов с помощью таких коагулянтов, как сульфат аммония, сульфат железа, сульфат меди в дозе 0,1-0,3 г/л.

В пробу воды на месте отбора добавляют коагулянт, затем тщательно перемешивают и отстаивают 1-2 ч. После этого надосадочную жидкость удаляют, а осадок переносят в сосуд объемом 1 л и доставляют в лабораторию. Содержимое сосуда вновь отстаивают 1-2 ч, а осадок после удаления надосадочной жидкости переносят в центрифужные пробирки 10-50 мл (в зависимости от объема осадка) и центрифугируют в течение 5 мин при 1500 об/мин. Надосадочную жидкость сливают, а к осадку добавляют 3 мл 1 %-ного раствора хлористоводородной кислоты для растворения хлопьев коагулянта, перемешивают и центрифугируют в таком же режиме. Надосадочную жидкость удаляют, а осадок обрабатывают по нижеописанной методике.

Пробы, не прошедшие предварительную обработку, могут храниться при температуре 15-20 °С не более двух суток.

В случае если первичная обработка пробы воды (фильтрование) проводилась вне лаборатории, использованные фильтры помещают в широкогорлый флакон или стеклянную банку, добавляют 30-50 мл исходной воды; закрывают флакон или банку завинчивающейся или притертой крышкой, маркируют, указывают дату, место отбора, количество профильтрованной воды и транспортируют в лабораторию для дальнейшего исследования. При невозможности исследования в день отбора материал хранят при 4 °С не более суток; при отсутствии необходимости определения жизнеспособности цист кишечных простейших и яиц гельминтов материал хранят при 4 °С не более 3-4 суток после добавления в него формальдегида с таким расчетом, чтобы концентрация его в суспензии составила 2 %.