МУК 4.2.1068-01 МЕТОД МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ИЗМЕРЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ КЛЕТОК ШТАММА-ПРОДУЦЕНТА ТИЛОЗИНА STREPTOMYCES FRADIAE БС-1 В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ

ГОСУДАРСТВЕННОЕ САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОЕ
НОРМИРОВАНИЕ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ГОСУДАРСТВЕННЫЕ САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИЕ
ПРАВИЛА И НОРМАТИВЫ

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Метод микробиологического измерения
концентрации клеток штамма-продуцента
тилозина Streptomyces fradiae БС-1
в воздухе рабочей зоны

Методические указания

МУК 4.2.1068-01

Минздрав России
Москва 2002

1. Разработаны д. м. н. Ивановым Н. Г., к. б. н. Шеиной Н. И. (Российский государственный медицинский университет).

2. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации - Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации 20 сентября 2001 г.

3. Введены впервые.

СОДЕРЖАНИЕ

УТВЕРЖДАЮ

Главный государственный

санитарный врач Российской

Федерации - Первый заместитель

Министра здравоохранения

Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

20 сентября 2001 г.

МУК 4.2.1068-01

Дата введения: с момента

утверждения

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Метод микробиологического измерения концентрации клеток штамма-продуцента тилозина Streptomyces fradiae БС-1 в воздухе рабочей зоны

Методические указания

Настоящие методические указания устанавливают методику проведения микробиологического количественного анализа концентрации клеток штамма-продуцента тилозина Streptomyces fradiae БС-1 в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 100 до 50000 клеток в 1 м³ воздуха.

Методические указания разработаны с целью обеспечения микробиологического контроля штамма Streptomyces fradiae БС-1 в воздухе производственных помещений биотехнологических производств и оценки соответствия уровня его содержания гигиеническим нормативам на основе учета требований ГОСТ 12.1.005-88 «ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования» и ГОСТ 8.563-96 «ГСИ. Методики выполнения измерений».

Методические указания предназначены для центров госсанэпиднадзора, санитарных лабораторий биотехнологических предприятий, микробиологических лабораторий научно-исследовательских институтов, работающих в области промышленной гигиены.

Систематическое положение штамма-продуцента

Порядок                            Actinomycetales

Класс                                 Actinomycetes

Семейство                        Streptomycetaceae

Род                                    Streptomyces

Вид                                    fradiae

Штамм                              БС-1

Культуралъно-морфологические особенности штамма

Штамм Streptomyces fradiae БС-1 является облигатным аэробом, растет на различных питательных средах: СР-6, СР-15, Гаузе-1, Ваксмана путем инкубирования в термостате при температуре 28 °С. Продолжительность развития составляет 10-15 суток.

Четкие культурально-морфологические свойства штамма проявляются на агаризованной среде СР-15 на 3 день развития. На этой среде штамм образует 6 морфологических типов колоний, из которых наиболее характерный тип составляет более 70 %. Изучаемый штамм представлен округлыми колониями до 9 мм в диаметре (в зависимости от плотности посева). Белый воздушный мицелий образуется в центре колонии и по периферии в виде одной, реже двух концентрических окружностей, край колоний не опушен. Профиль изогнутый, поверхность шероховатая, неопушенные части колоний гладкие, блестящие, кремовые. Структура мелкозернистая, по краю неопушенной части однородная. Консистенция плотная, пигмент с обратной стороны колоний желтовато-коричневый.

Предельно допустимая концентрация Streptomyces fradiae БС-1 в воздухе рабочей зоны - 2000 кл/м³, пометка А, 3 класс опасности.

Методика обеспечивает выполнение измерений количества клеток продуцента тилозина в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 100 до 50000 клеток в 1 м³ при доверительной вероятности 0,95.

Метод измерения концентрации штамма-продуцента Strepto-myces fradiae БС-1 основан на аспирации аппаратом Кротова микробных клеток (спор, обрывков мицелия) на поверхность плотной питательной среды СР-15 и подсчета выросших колоний, которые выявляются при задержке роста тест-культуры (Bacillus subtilis), происходящего вследствие диффузии в агар антибиотика, выделяемого штаммом-продуцентом Streptomyces fradiae БС-1.

При данном методе на чашке Петри после забора пробы может быть учтено до 50 колоний, т. к. большее количество колоний на чашке могут образовывать сливающиеся зоны лизиса, что приводит к занижению результатов.

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы.

5.7. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы

Прибор для бактериологического анализа воздуха, модель 818 (щелевой прибор Кротова)                                                                                                      ТУ 64-12791-77

Термостаты электрические суховоздушные или водяные

Автоклав электрический                                                                          ГОСТ 9586-75

Бокс, оборудованный бактерицидными лампами

Холодильник бытовой

Весы лабораторные, аналитические типа ВЛА-200

Микроскоп биологический с иммерсионной системой типа «Биолам» Л-211

Водяная баня или водяной термостат

Газовая горелка или спиртовка лабораторная

Чашки Петри

Петли бактериологические

Пробирки биологические, вместимостью 20 и 35 мл                           ГОСТ 10515-75

Пипетки мерные на 1,5 и 10 мл                                                               ГОСТ 10515-75

Пипетки мерные на 1,5, и 10 мл                                                              ГОСТ 1770-74

Колбы конические, вместимостью 250 и 500 мл                                   ГОСТ 1770-74

Секундомер                                                                                                ГОСТ 9586-75

Барометр                                                                                                     ГОСТ 24696-79

Марля медицинская                                                                                   ГОСТ 9412-77

Вата медицинская гигроскопическая                                                      ГОСТ 25556-81

5.2. Реактивы, растворы

Среда СР-15, агаризованная питательная Среда для продуцента тилозина (состав в %: меласса - 0,5, крахмал - 0,5, соевая мука - 0,5, кукурузный экстракт - 0,5, (NH₄)₂SО₄ - 0,1, NaCl - 0,1, MgSO₄×7Н₂O - 0,05. СаСО₃ - 0,2, агар - 1,5. рН среды до стерилизации 7,0-7,2. Режим стерилизации 1,1-1,2 атм., 40-50 мин)

Агаризованная среда Хоттингера, рН 6,8-7,0

Спирт этиловый ректификат                                                                   ГОСТ 5962-67

Хлороформ

Тетрациклина гидрохлорид

Амфотерицин В для внутривенного введения

Тест-культура Вас. subtilis вариант Л₂ музейный штамм, споры хранят в виде водной суспензии при температуре 4 °С.

При выполнении измерений концентрации клеток продуцента Биовита и хлортетрациклина в воздухе рабочей зоны соблюдают:

·                  правила техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.005-88;

·                  правила электробезопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации приборов;

·                  требования, изложенные в руководстве «Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности» (1980);

·                  положения «Инструкций по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности» (1977).

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются лица с высшим или средним специальным образованием, прошедшие соответствующую подготовку и имеющие навыки работы в области микробиологических исследований.

Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях в соответствии с ГОСТ 15150-69 при температуре воздуха (20±5) °С, атмосферном давлении 630-800 мм рт. ст. и влажности воздуха не более 80 %.

9.1. Условия отбора проб воздуха

Для определения концентрации Streptomyces fradiae БС-1 воздух производственных помещений аспирируют со скоростью 10 л/мин на поверхность плотной питательной среды СР-15 в чашку Петри, помещенную в аппарат Кротова.

Аппарат Кротова перед каждым отбором воздуха тщательно протирают спиртом. На подвижный диск устанавливают чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Крышку прибора закрывают. После отбора пробы воздуха и остановки диска открывают крышку прибора, снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. В период отбора проб воздуха крышку чашки Петри хранят в стерильном пакете из бумаги, полиэтилена или других стерильных емкостях.

Время аспирации воздуха (1-10 мин) зависит от предполагаемой концентрации клеток штамма-продуцента в воздухе рабочей зоны.

Отбор проб сопровождается составлением акта отбора с указанием места, времени и условий отбора.

9.2. Выполнение анализа