Государственное
санитарно-эпидемиологическое нормирование Российской Федерации
Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.
ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ
ИЗОПРОПИЛФЕНАЦИНА В ВОДЕ
МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ
ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Методические указания
МУК
4.1.2292-07
1.
Разработаны Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (Т.В. Юдина,
Н.Е. Федорова, В.Н. Волкова).
2.
Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому
нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей
и благополучия человека (протокол от 21.06.2007 № 2).
3.
Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей
и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской
Федерации Г.Г. Онищенко 10 октября 2007 г.
4.
Введены в действие с 25 декабря 2007 г.
5.
Введены впервые.
Содержание
1.
Метрологические характеристики 2. Метод
измерений 3. Средства
измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы 3.1. Средства
измерений 3.2. Реактивы 3.3.
Вспомогательные устройства, материалы 4. Требования
безопасности 5. Требования
к квалификации операторов 6. Условия
измерений 7. Подготовка
к выполнению измерений 7.1.
Подготовка органических растворителей 7.2.
Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ 7.3.
Кондиционирование хроматографической колонки 7.4.
Приготовление градуировочных растворов и растворов внесения 7.5.
Установление градуировочной характеристики 7.6.
Приготовление 2% раствора уксусной кислоты в этилацетате 7.7.
Подготовка концентрирующего патрона Sep-Pak Plus
Silica для очистки экстракта 7.8. Проверка
хроматографического поведения изопропилфенацина на концентрирующем патроне Sep-Pak Plus Silica 8. Отбор проб 9. Выполнение
определения 9.1.
Экстракция 9.2. Очистка
экстракта 9.3. Условия
хроматографирования 10. Обработка
результатов анализа 11. Проверка
приемлемости результатов параллельных определений 12. Оформление
результатов 13. Контроль
качества результатов измерений |
УТВЕРЖДАЮ
Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный
врач Российской Федерации
Г.Г. Онищенко
10 октября 2007 г.
Дата введения: 25 декабря 2007 г.
4.1.
МЕТОДЫ
КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Определение
остаточных количеств изопропилфенацина в воде
методом
высокоэффективной жидкостной хроматографии
Методические
указания
МУК 4.1.2292-07
Настоящие
методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной
хроматографии для определения в воде массовой концентрации изопропилфенацина в
диапазоне 0,0002-0,004 мг/дм3.
2-(α-фенил-изопропилфенил)-ацетил)-индан-1,3-дион
(IUРАС)
С3Н7
С26Н22О3
Мол. масса 382,15
Твердое
вещество желто-оранжевого цвета. Температура плавления 148°С, кипения - более
350°С. Плотность 1,21 г/см3. Хорошо растворим в большинстве
органических растворителей (ацетоне, этаноле, диэтиловом эфире и др.).
Практически не растворим в воде - 0,3 мг/дм3.
Агрегатное
состояние в воздушной среде - аэрозоль и пары.
Острая
пероральная токсичность (LD50) для крыс - более 1,6±0,2
мг/кг, мышей - 3,4±0,5 мг/кг.
Область
применения
Изопропилфенацин
- ротентицид класса индандионов, обладающий антикоагулянтной активностью,
рекомендуется для борьбы с грызунами в открытом грунте (осень, зима, весна) на
зимующих культурах (зерновые, пастбищные травы, древесные, кустарниковые
насаждения и др.), в защищенном грунте на всех культурах независимо от сезона.
Применяется в виде приманки.
ОДУ
изопропилфенацина в воде водоемов - 0,0008 мг/дм3.
1.
Метрологические характеристики
При
соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном
соответствии с данной методикой погрешность (и её составляющие) результатов
измерений при доверительной вероятности Р
= 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1, для соответствующих
диапазонов концентраций.
Таблица 1
Метрологические параметры
Анализируемый объект | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (дм3) | Показатель точности (граница относительной погрешности) ±δ, %Р=0,95 | Стандартное отклонение повторяемости, σr% | Предел повторяемости, r, % | Предел воспроизводимости, R, % |
Вода | от 0,004 до 0,001 вкл. | 100 | 4,2 | 12 | 15 |
менее 0,001 до 0,0002 | 150 | 5,4 | 15 | 19 |
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение,
доверительный интервал среднего результата для полного диапазона концентраций (n=20) приведены в табл. 2.
Таблица 2
Полнота извлечения вещества,
стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата
Анализируемый объект | Метрологические параметры, Р=0,95, n=20 |
предел обнаружения, мг/дм3 | диапазон определяемых концентраций, мг/дм3 | среднее значение определения, % | стандартное отклонение, S, % | доверительный интервал среднего результата, ±, % |
Вода | 0,0002 | 0,0002-0,004 | 91,3 | 3,8 | 2,7 |
2.
Метод измерений
Методика
основана на определении вещества с помощью высокоэффективной жидкостной
хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором после экстракции из анализируемой
пробы воды дихлорметаном и последующей очистки экстракта на патроне для
твердофазной экстракции SepPakSilica.
3.
Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы
3.1.
Средства измерений
Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым
детектором с переменной длиной волны (фирмы Waters, США) 15311-02 | Номер в Государственном реестре средств измерений |
Весы аналитические ВЛА-200 | ГОСТ 24104 |
Колбы мерные 2-50-2,
2-100-2 и 2-1000-2 | ГОСТ 1770 |
Меры массы | ГОСТ 7328 |
Пипетки градуированные 2
класса точности вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10 см3 | ГОСТ 29227 |
Пробирки градуированные вместимостью
5 или 10 см5 | ГОСТ 1770 |
Цилиндры мерные 2 класса
точности вместимостью 10, 50, 100 и 1000 см3 | ГОСТ 1770 |
Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими
характеристиками.
3.2.
Реактивы
Изопропилфенацин, аналитический стандарт с
содержанием основного вещества (сумма изомеров) 94,6% (ЗАО «Щелково Агрохим») | |
Ацетонитрил для хроматографии, хч | ТУ 6-09-4326-76 |
Вода бидистиллированная, деионизованная или
перегнанная над КМnО4 | ГОСТ
6709 |
н-Гексан, хч | ТУ 6-09-33-75 |
Натрий серно-кислый безводный, хч | ГОСТ 4166 |
Кислота орто-фосфорная, хч, 85% | ГОСТ 6552 |
Метилен хлористый (дихлорметан), хч | ГОСТ 12794 |
Этиловый эфир уксусной кислоты (этилацетат) эталонный | ГОСТ 4166 |
Допускается использование
реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.
3.3.
Вспомогательные устройства, материалы
Аллонж прямой с отводом для вакуума (для работы с
концентрирующими патронами) | |
Баня ультразвуковая фирмы Донау (Швейцария) | |
Бумажные фильтры «красная лента», обеззоленные | ТУ 6-09-2678-77 |
Воронки делительные вместимостью 1000 см3 | ГОСТ 25336 |
Воронки конусные диаметром 30-37 и 60 мм | ГОСТ 25336 |
Груша резиновая | |
Колбы плоскодонные вместимостью 200-250 см3 | ГОСТ 9737 |
Колбы круглодонные на шлифе, вместимостью 10, 100
и 250 см3 | ГОСТ 9737 |
Мембранные фильтры капроновые, диаметром 47 мм | |
Насос водоструйный | ГОСТ 10696 |
Патроны для твердофазной экстракции типа Sep-PakPlusSilicaCartridges(масса
сорбента 690 г) | |
Пробирки центрифужные | ГОСТ 25336 |
Ротационный вакуумный испаритель В-169 фирмы Buchi,
Швейцария | ТУ 25-11-917-74 |
Стаканы химические, вместимостью 50 и 100 см3 | ГОСТ 25336 |
Стекловата | |
Стеклянные палочки | |
Установка для перегонки растворителей через
мембрану | |
Хроматографическая колонка стальная, длиной 250
мм, внутренним диаметром 4,6 мм, содержащая Symmetry® С18, зернением 5 мкм | |
Шприц для ввода образцов для жидкостного
хроматографа вместимостью 50-100 мм3 | |
Шприц медицинский с разъемом Льюера | ГОСТ 22090 |
Допускается применение хроматографических колонок и другого
оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
4.
Требования безопасности
4.1.
При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности
при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при
работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в
технической документации на жидкостный хроматограф.
4.2.
Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе
не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно-допустимые концентрации
(ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников
безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.
5.
Требования к квалификации операторов
К
выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже
лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.
К проведению
пробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт
работы в химической лаборатории.
6.
Условия измерений
При выполнении измерений
соблюдают следующие условия:
-
процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при
температуре воздуха (20±5)°С и относительной влажности не более 80%.
-
выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных
технической документацией к прибору.
7.
Подготовка к выполнению измерений
Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка
органических растворителей (при необходимости), подготовка подвижной фазы для
ВЭЖХ, кондиционирование хроматографической колонки, приготовление растворов для
градуировки и внесения, установление градуировочной характеристики, подготовка
патронов для твердофазной экстракции, проверка хроматографического поведения
вещества на них, отбор проб.
7.1.
Подготовка органических растворителей
7.1.1. Очистка ацетонитрила
Ацетонитрил
кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 часа, после
чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно
перегоняют над прокаленным карбонатом калия.
7.1.2. Очистка этилацетата
Этилацетат
промывают последовательно 5% водным раствором карбоната натрия, насыщенным
раствором хлористого кальция, сушат над безводным карбонатом калия и перегоняют
или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических
тарелок не менее 50.
7.1.3.
Очистка н-гексана
Растворитель
последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты, до тех
пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, водой до нейтральной
реакции промывных вод, перегоняют над поташом.
7.2.
Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ
В мерную колбу
вместимостью 1000 см3 помещают 890 см3 ацетонитрила, 110
см3 бидистиллированной или деионизованной воды и 1 см3 ортофосфорной
кислоты, перемешивают, фильтруют и дегазируют.
7.3.
Кондиционирование хроматографической колонки
Промывают
колонку подвижной фазой (приготовленной по п. 7.2) при скорости подачи
растворителя 1,0 см3/мин до установления стабильной базовой линии.
7.4.
Приготовление градуировочных растворов и растворов внесения
7.4.1. Исходный раствор изопропилфенацина для градуировки (концентрация
100 мкг/см3)
В мерную колбу
вместимостью 100 см3 вносят 0,01 г изопропилфенацина, добавляют
50-70 см3 ацетонитрила, перемешивают, доводят ацетонитрилом до метки,
вновь перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.
Растворы № 1-5 готовят
объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора для
градуировки.
7.4.2. Раствор № 1 изопропилфенацина для градуировки и внесения (концентрация
10 мкг/см3)
В мерную колбу
вместимостью 100 см3 помещают 10 см3 исходного раствора
изопропилфенацина с концентрацией 100 мкг/см3 (п. 7.4.1), разбавляют
ацетонитрилом до метки, перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение
месяца.
Этот раствор
используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения
действующего вещества методом «внесено-найдено».
7.4.3. Рабочие растворы № 2-5 изопропилфенацина для градуировки
(концентрация 0,05-1,0 мкг/см3)
В 4 мерные
колбы вместимостью 100 см3 помещают по 0,5; 1,0; 5,0 и 10,0 см3
градуировочного раствора № 1 с концентрацией 10 мкг/см3 (п. 7.4.2),
доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по п. 7.2, тщательно перемешивают, получают рабочие
растворы №№ 2-5 с концентрацией изопропилфенацина 0,05; 0,1; 0,5 и 1,0 мкг/см3,
соответственно.
Растворы
хранятся в холодильнике в течение недели.
7.5.
Установление градуировочной характеристики
Администратор
04.10.2013
