ГОСТ 34228-2017 ПРОДУКЦИЯ СОКОВАЯ. ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОНСЕРВАНТОВ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Juice products. Determination of preservatives by high performance liquid chromatography method

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены в ГОСТ 1.0-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 Разработан Некоммерческой организацией "Российский союз производителей соков" (РСПС) при участии Акционерного общества "Мултон" (АО "Мултон") и Общества с ограниченной ответственностью "ПепсиКо Холдингс" (ООО "ПепсиКо Холдингс")

2 Внесен Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 Принят Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 30 ноября 2017 г. N 52-2017)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97	Код страны no МК (ИСО 3166) 004-97	Сокращенное наименование национального органа по стандартизации
Армения	AM	Минэкономики Республики Армения
Беларусь	BY	Госстандарт Республики Беларусь
Киргизия	KG	Кыргызстандарт
Россия	RU	Росстандарт
Узбекистан	UZ	Узстандарт
Украина	UA	Минэкономразвития Украины

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 12 декабря 2017 г. N 1921-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 34228-2017 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2019 г.

5 Введен впервые

Настоящий стандарт распространяется на соковую продукцию из фруктов и овощей и устанавливает метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для измерения массовой доли консервантов*:

- 4-гидроксибензойной кислоты;

- бензойной кислоты;

- сорбиновой кислоты;

- метил-4-гидроксибензоата;

- этил-4-гидроксибензоата;

- н-пропил-4-гидроксибензоата;

- н-бутил-4-гидроксибензоата.

──────────────────────────────

* Для некоторых ягод (клюква, брусника и др.) характерно природное (естественное) содержание бензойной кислоты в диапазоне 50-250 мг/кг. Данное соединение консервантом не является, что следует учитывать при измерении соков и соковой продукции из данных ягод на подлинность и безопасность.

Диапазон измерений массовой концентрации (массовой доли) консервантов составляет от 10, 0 до 320 мг/дм³ (млн^-1) без учета разбавления пробы.

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:

ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019-79** Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 61-75 Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия

ГОСТ OIML R 76-1-2011 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3117-78 Реактивы. Аммоний уксуснокислый. Технические условия

ГОСТ ИСО 5725-6-2003*** Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике

──────────────────────────────

** В Российской Федерации действует ГОСТ Р 12.1.019-2009.

*** В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002.

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ ISO 7886-1-2011 Шприцы инъекционные однократного применения стерильные. Часть 1. Шприцы для ручного использования

ГОСТ 10521-78 Реактивы. Кислота бензойная. Технические условия

ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ ИСО/МЭК 17025-2009 Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий

ГОСТ 22967-90 Шприцы медицинские инъекционные многократного применения. Общие технические требования и методы испытаний

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26313-2014 Продукты переработки фруктов и овощей. Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

Метод основан на разделении группы консервантов на аналитических обращенно-фазовых хроматографических колонках, заполненных сорбентом С8 с дополнительными функциональными группами ("энд-кэпинг").

Детектирование разделенных консервантов осуществляют с помощью спектрофотометрического детектора или диодноматричного детектора в диапазоне длин волн 190-600 нм.

При необходимости идентификацию консервантов в пробе соковой продукции проводят путем сравнения времен удерживания и спектров поглощения (см. таблицу 1).

Таблица 1

Наименование консерванта	Максимум светопоглощения, нм
4-гидроксибензойная кислота	252, 7
Бензойная кислота	226, 8
Сорбиновая кислота	259, 8
Метил-4-гидроксибензоат	252, 6
Этил-4-гидроксибензоат	256, 2
н-пропил-4-гидроксибензоат	256, 2
н-бутил-4-гидроксибензоат	256, 2

4.1 Хроматограф жидкостный, снабженный спектрофотометрическим детектором, позволяющим проводить измерения в диапазоне длин волн 190-600 нм, либо диодно-матричным детектором, позволяющим проводить измерения в диапазоне длин волн 190-600 нм, снабженный программным обеспечением для сбора и обработки хроматографических данных. Требования к метрологическим характеристикам хроматографа приведены в таблицах 2 и 3.

Относительное среднеквадратичное отклонение выходного сигнала, %, не более
по площади пика	по высоте пика	по времени удерживания	по площади пика за 8 ч непрерывной работы
3	3	1, 0	4

Значение уровня флуктуационных шумов нулевого сигнала, е. о. п., не более	Значение дрейфа нулевого сигнала, е. о. п./час, не более	Относительное среднеквадратичное отклонение выходных сигналов, %, не более		Относительное изменение выходного сигнала за 8 ч непрерывной работы, %, не более
		Время удерживания	Площадь пика	Время удерживания	Площадь пика
1, 5 · 10-5	1, 5 · 10-3	0, 3	1, 0	2, 0	2, 0

4.2 Весы с максимальной нагрузкой от 200 до 220 г, с пределом допускаемой погрешности взвешивания ± 0, 0001 г.

4.3 Весы неавтоматического действия по ГОСТ OIML R 76-1, с максимальной нагрузкой от 200 до 220 г, с пределом допускаемой погрешности взвешивания ± 0, 001 г.

4.4 Пипетки градуированные 2-1-2-5, 2-1-2-10 и 2-1-2-25 по ГОСТ 29227.

4.5 Колбы мерные 2-25-2, 2-50-2, 2-100-2, 2-1000-2 по ГОСТ 1770.

4.6 Цилиндры мерные 2-го класса точности любого исполнения вместимостью 1000 см³ по ГОСТ 1770.

4.7 Стаканы любого типа исполнения 1 вместимостью 50, 100 и 1000 см³ по ГОСТ 25336.

4.8 Пробирки для центрифугирования вместимостью 2, 10 и 20 см³.

4.9 Вода глубокой очистки или вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

4.10 Фильтры мембранные с размером пор 0, 45 и 0, 20 мкм.

4.11 Виалы стеклянные вместимостью 2 см³.

4.12 Микрошприц вместимостью 250 мм³ (для ручного ввода пробы).

4.13 Шприц медицинский вместимостью 5 см³ многократного применения по ГОСТ 22967 или однократного применения по ГОСТ ISO 7886-1.

4.14 Центрифуга, обеспечивающая фактор разделения (g-фактор) не менее 1000.

4.15 Колонка хроматографическая (250 х 4, 6 мм), заполненная обращенно-фазовым сорбентом С8 с дополнительно привитыми изопропиловыми группами (-С₃Н₇), снабженная защитной предколонкой.

Примечание - Допускается использование хроматографических колонок других типоразмеров, обеспечивающих разделение определяемых консервантов в соответствии с критериями, приведенными в приложении А.

4.16 Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.

4.17 Кислота сорбиновая с массовой долей основного вещества не менее 99 % или калий сорбиновокислый с массовой долей основного вещества не менее 99 %.

4.18 Кислота бензойная по ГОСТ 10521, ч. или бензоат натрия с массовой долей основного вещества не менее 99 %.

4.19 Кислота 4-гидроксибензойная с массовой долей основного вещества не менее 99 %.

4.20 Метил-4-гидроксибензоат с массовой долей основного вещества не менее 99 %.

4.21 Этил-4-гидроксибензоат с массовой долей основного вещества не менее 99 %.

4.22 н-пропил-4-гидроксибензоат с массовой долей основного вещества не менее 99 %.

4.23 н-бутил-4-гидроксибензоат с массовой долей основного вещества не менее 99 %.

4.24 Ацетонитрил для высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), оптической плотностью при 200 нм не более 0, 012 е. о. п./см.

4.25 Кислота уксусная ледяная по ГОСТ 61, х. ч.

4.26 Аммоний уксуснокислый по ГОСТ 3117, х. ч.

4.27 Иономер (рН-метр) с пределом абсолютной погрешности измерений ± 0, 1 ед. рН.

Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками не ниже вышеуказанных, вспомогательного оборудования, посуды, материалов с техническими характеристиками не ниже вышеуказанных и химических реактивов аналогичной или более высокой квалификации.

Отбор проб соковой продукции проводят по ГОСТ 26313.

6.1 Общие положения

Разделение группы консервантов происходит при температуре окружающей среды в градиентном режиме с использованием следующих подвижных фаз:

- раствор уксуснокислого аммония молярной концентрации 0, 01 моль/дм³ (рН = 4, 2 ед. рН);

- ацетонитрил.

Для продления срока службы и более эффективной работы колонки используют систему защиты [in-line-фильтры на выходе из насоса и предколонку, периодическую промывку (не реже одного-двух раз в неделю) колонки смесью ацетонитрил - вода глубокой очистки (объемное соотношение 4:1) или ацетонитрилом (в зависимости от числа проведенных измерений и концентрации органических веществ, прошедших через колонку) в течение 1-3 ч с предварительной промывкой всей системы водой. Операции заполнения системы растворителями и промывка отдельных частей и системы в целом выполняют в соответствии с руководствами по эксплуатации оборудования.

6.2 Приготовление рабочих растворов

6.2.1 Приготовление раствора уксуснокислого аммония молярной концентрации 0, 01 моль/дм³ с рН 4, 2 (Подвижная фаза А)

(0, 770 ± 0, 001) г уксуснокислого аммония взвешивают в стакане вместимостью 100 см³, растворяют в приблизительно 80 см³ воды глубокой очистки, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см³, доводят водой до метки и перемешивают. Раствор переносят в мерный стакан вместимостью 1000 см³ и доводят рН до значения 4, 2 ед. рН ледяной уксусной кислотой, регистрируя показания иономером. Полученный раствор дегазируют под вакуумом в течение 15 мин с одновременной фильтрацией через фильтр с диаметром пор 0, 45 мкм (см. 4.10).

Раствор используют в течение трех дней при условии визуального отсутствия нерастворимых веществ. Перед использованием элюента в последующие дни его предварительно дегазируют под вакуумом в течение 15 мин с одновременной фильтрацией через фильтр с диаметром пор 0, 20 мкм (см. 4.10).

Подвижную фазу приготавливают в объеме, необходимом для проведения серии измерений.

6.3 Приготовление градуировочных растворов

Градуировочные растворы консервантов готовят в соответствии с таблицей 4.

Таблица 4

N градуировочного раствора	Компонент	Вместимость мерной колбы, см3	Способ приготовления	Массовая концентрация, мг/дм3
6	4-гидроксибензойная кислота	100	Взвешивают (0, 0320 ± 0, 0001) г каждого из реактивов в стакане вместимостью 100 см3, растворяют в 50 см3 ацетонитрила, количественно переносят в мерную колбу и доводят до 100 см3 водой	320
	Бензойная кислота
	Сорбиновая кислота
	Метил-4-гидроксибензоат
	Этил-4-гидроксибензоат
	н-Пропил-4-гидроксибензоат
	н-Бутил-4-гидроксибензоат
5	4-гидроксибензойная кислота	50	В мерную колбу приливают 25 см3 раствора N 6, доводят до метки водой и перемешивают	160
	Бензойная кислота
	Сорбиновая кислота
	Метил-4-гидроксибензоат
	Этил-4-гидроксибензоат
	н-Пропил-4-гидроксибензоат
	н-Бутил-4-гидроксибензоат
4	4-гидроксибензойная кислота	50	В мерную колбу приливают 12, 5 см3 раствора N 6, доводят до метки водой и перемешивают	80
	Бензойная кислота
	Сорбиновая кислота
	Метил-4-гидроксибензоат
	Этил-4-гидроксибензоат
	н-Пропил-4-гидроксибензоат
	н-Бутил-4-гидроксибензоат
3	4-гидроксибензойная кислота	50	В мерную колбу приливают 6, 25 см3 раствора N 6, доводят до метки водой и перемешивают	40
	Бензойная кислота
	Сорбиновая кислота
	Метил-4-гидроксибензоат
	Этил-4-гидроксибензоат
	н-Пропил-4-гидроксибензоат
	н-Бутил-4-гидроксибензоат
2	4-гидроксибензойная кислота	50	В мерную колбу приливают 3, 12 см3 раствора N 6, доводят до метки водой и перемешивают	20
	Бензойная кислота
	Сорбиновая кислота
	Метил-4-гидроксибензоат
	Этил-4-гидроксибензоат
	н-Пропил-4-гидроксибензоат
	н-Бутил-4-гидроксибензоат
1	4-гидроксибензойная кислота	25	В мерную колбу приливают 3, 12 см3 раствора N 4, доводят до метки водой и перемешивают	10
	Бензойная кислота
	Сорбиновая кислота
	Метил-4-гидроксибензоат
	Этил-4-гидроксибензоат
	н-Пропил-4-гидроксибензоат
	н-Бутил-4-гидроксибензоат

Раствор N 4 рекомендуется использовать в качестве одного из контрольных растворов при ежедневных измерениях.

Срок хранения раствора N 4 - не более трех дней при температуре (20 ± 5) °С или не более 1 мес при температуре от 2 до 6 °С.

Растворы N 1, 2, 3, 5 и 6 используют свежеприготовленными.

6.4 Подготовка хроматографа к работе

Включение и подготовку хроматографа к работе, а также выключение хроматографа по окончании работы осуществляют в соответствии с руководством по эксплуатации.

6.5 Условия хроматографического анализа

При проведении хроматографического анализа создают и поддерживают следующие условия:

- температура колонки - температура окружающей среды;

- рабочая длина волны спектрофотометрического детектора - 235 нм или диапазон длин волн для диодно-матричного детектора - 190-600 нм;

- объем вводимой пробы - от 5 до 20 мм³;

- режим элюирования - градиентный, скорость потока - 1, 0 см³/мин (см. таблицу 5).

Время, мин	Объемная доля элюента А (см. 6.2.1), %	Объемная доля элюента В (ацетонитрил), %
0	75	25
8, 5	75	25
9	65	35
16	65	35
17	55	45
26	55	45
27	75	25
32	75	25

Мониторинг состояния хроматографической колонки проводят в соответствии с приложением А. Допускается изменение скорости потока и параметров градиентного режима в соответствии с указаниями изготовителя колонки при условии выполнения критериев, приведенных в приложении А.

6.6 Градуировка хроматографа

Градуировку хроматографа проводят в соответствии с руководством по эксплуатации и руководством пользователя программного обеспечения с использованием градуировочных растворов (см. 6.3). Регистрируют по две хроматограммы каждого градуировочного раствора, определяют площадь пиков определяемых компонентов на хроматограммах градуировочных растворов и устанавливают градуировочную характеристику в виде линейной зависимости площади пика соответствующего компонента S, е. о. п. · с* и его массовой концентрации с, мг/дм³

c=k·S,

(1)

где k - градуировочный коэффициент, мг/дм³ (е. о. п. · с)^-1.

──────────────────────────────

* е. о. п. - единицы оптической плотности.

Градуировочный коэффициент k, мг/дм³, вычисляют с использованием программного обеспечения к хроматографу или по методу наименьших квадратов, принимая свободный член в уравнении регрессии равным нулю, по формуле

,

(2)

где S_i - площадь пика соответствующего консерванта при измерении i-го градуировочного раствора, е. о. п. · с;

c_i - массовая концентрация консерванта при измерении i-го градуировочного раствора, мг/дм³.

Градуировку проводят при смене оборудования, колонок, условий хроматографического анализа или при выявлении несоответствий при оперативном контроле качества измерений или при внутреннем аудите.

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят, используя градуировочные растворы N 4 и 6 перед проведением измерений.

Результаты контроля стабильности градуировочной характеристики признаются удовлетворительными при выполнении условия

|X_изм-C_ст|≤0, 01·G·C_ст,

(3)

где X_изм - результат измерения массовой концентрации консерванта в контрольных растворах, мг/дм³;

C_ст - фактическое значение массовой концентрации консерванта в контрольных растворах, мг/дм³;

G - норматив контроля стабильности градуировочной характеристики, %.

Во всем диапазоне градуировочной характеристики G = 4, 5 %. Если условие (3) не выполняется, градуировочную характеристику устанавливают заново во всем диапазоне измерений.

7.1 Подготовка проб для измерений

7.1.1 Осветленные соки, нектары и сокосодержащие напитки, не содержащие нерастворимых в воде веществ, анализируют при двукратном разбавлении подвижной фазой А (см. 6.2.1). Для этого пипеткой отбирают 25 см³ пробы, помещают в мерную колбу вместимостью 50 см³ и доводят до метки подвижной фазой. Приготовленный раствор перемешивают, после чего через иглу отбирают в медицинский шприц аликвоту раствора, заменяют иглу на дисковый фильтр с размером пор 0, 20 мкм и отфильтровывают в виалу 1-1, 5 см³ приготовленного раствора.

Приготовленный раствор используют для хроматографического анализа (см. 7.2.3).

7.1.2 Соки, нектары и сокосодержащие напитки с мякотью или содержащие нерастворимые в воде вещества разбавляют подвижной фазой А (см. 6.2.1) в два раза, для этого пипеткой отбирают 25 см³ пробы, помещают в мерную колбу вместимостью 50 см³ и доводят до метки подвижной фазой А. Затем пробу центрифугируют со скоростью 9000 об/мин в течение 5 мин или не менее 3000 об/мин в течение 15 мин. После этого аккуратно отбирают в медицинский шприц через иглу ориентировочно 2 см³ полученного раствора, заменяют иглу на дисковый фильтр с размером пор 0, 45 мкм и отфильтровывают в виалу 1 см³ этого раствора.

Приготовленный раствор используют для хроматографического анализа (см. 7.2.3).

7.1.3 Концентрированные соки и пюре различных фруктов, ягод и овощей разбавляют раствором элюента в пять раз весовым методом. Для этого в стакане вместимостью 50 см³ взвешивают 5 г пробы концентрированного сока с погрешностью ± 0, 001 г и добавляют приблизительно 20 г элюента также с погрешностью ± 0, 001 г, тщательно перемешивают. Затем пробу центрифугируют со скоростью 9000 об/мин в течение 5 мин или не менее 3000 об/мин в течение 15 мин. После этого аккуратно отбирают в медицинский шприц через иглу примерно 2 см³ полученного раствора, заменяют иглу на дисковый фильтр с размером пор 0, 45 мкм и отфильтровывают в виалу 1 см³ этого раствора.

Приготовленный раствор используют для хроматографического анализа (см. 7.2.3).

7.1.4 При подготовке пробы по 7.1.3 результат измерений выражают в единицах массовой доли (млн^-1), а при подготовке пробы по 7.1.1, 7.1.2 - в единицах массовой концентрации (мг/дм³).

7.2 Порядок проведения измерений

7.2.1 Включение и вывод хроматографической системы на рабочий режим, включая кондиционирование колонки, проводят в соответствии с руководствами по эксплуатации оборудования, колонки - с учетом 6.1 и 6.5.

7.2.2 Выключение хроматографической системы после выполнения измерений проводят в соответствии с руководством по эксплуатации оборудования и руководством пользователя программно-аппаратным комплексом сбора и обработки данных.

Примеры хроматограмм градуировочных растворов и проб приведены в приложении Б.

7.2.3 Подготовленную по 7.1.1-7.1.3 пробу дозируют в хроматограф и регистрируют хроматограмму в тех же условиях, в которых были зарегистрированы хроматограммы градуировочных растворов (см. 6.5, 6.6). На полученных хроматограммах идентифицируют пики определяемых компонентов по спектрам поглощения (см. таблицу 1) и совпадению времен удерживания в градуировочных растворах и пробах при ширине окна идентификации 5 %. Используя значения площадей пиков, вычисляют значения массовой концентрации идентифицированных консервантов, используя градуировочные характеристики, установленные по 6.6.

8.1 Если подготовку пробы проводили по 7.1.1 или 7.1.2, то массовую концентрацию консервантов в пробе С, мг/дм³, вычисляют по формуле

,

(4)

где c_изм - измеренное (см. 7.2.3) значение массовой концентрации соответствующего консерванта в пробе, подготовленной по 7.1.1 или 7.1.2, мг/дм³;

V₂ - объем мерной колбы, взятой для разбавления пробы, см³;

V₁ - объем пробы, отобранный для анализа см³.

За результат измерений массовой концентрации консерванта в пробе принимают среднеарифметическое значение C̅, мг/дм³, результатов двух параллельных определений С₁ и С₂, мг/дм³, при выполнении условия

,

(5)

где r_отн - предел повторяемости (см. таблицу 6), %.

8.2 Если подготовку пробы проводили по 7.1.3, то массовую долю консервантов в пробе X, млн^-1, вычисляют по формуле

,

(6)

где X_изм - значение массовой доли соответствующего консерванта в растворе, подготовленном по 7.1.3, принимаемое численно равным измеренному по 7.2.3 значению массовой концентрации, млн^-1;

m_общ - масса навески анализируемой пробы с добавкой подвижной фазы (см. 7.1.3), г;

m_X - масса анализируемой пробы, г.

За результат измерений массовой доли консервантов в пробе принимают среднеарифметическое значение X̅, млн^-1, результатов двух параллельных измерений Х₁ и Х₂, млн^-1, при выполнении условия

,

(7)

где r_отн - предел повторяемости (см. таблицу 6), %.

При невыполнении условий (5) и (7) получают еще два результата измерений в соответствии с разделом 7 и затем используют методы проверки приемлемости четырех результатов параллельных измерении и установления результата измерений согласно ГОСТ ИСО 5725-6 (подраздел 5.2).

8.3 При получении результатов измерений в двух лабораториях за результат измерений принимают среднеарифметическое значение результатов измерений, полученных в этих лабораториях C̅_1лаб и C̅_2лаб, мг/дм³, или X̅_1лаб и X̅_2лаб, млн^-1, при выполнении условий

200·|C̅_1лаб-C̅_2лаб|≤CD_{0, 95}·(C̅_1лаб+C̅_2лаб),

(8)

или

200·|X̅_1лаб-X̅_2лаб|≤CD_{0, 95}·(X̅_1лаб+X̅_2лаб),

(9)

где CD_{0, 95} - значение предела воспроизводимости.

Значение CD_{0, 95} вычисляют с использованием пределов повторяемости (r_отн, %) и воспроизводимости (R_отн, %), приведенных в таблице 6, по формуле

,

(10)

где n₁ и n₂ - число параллельных измерений, выполненных в первой и второй лабораториях соответственно.

При невыполнении условия (8) или (9) для проверки приемлемости в условиях воспроизводимости каждая лаборатория должна выполнить процедуры согласно ГОСТ ИСО 5725-6 (пункты 5.3.3, 5.3.4).

Определяемый консервант	Диапазон измерения массовой концентрации (массовой доли), мг/дм3 (млн-1)	Предел повторяемости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами параллельных измерений) rотн, %	Предел воспроизводимости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами единичных измерений, полученных в двух лабораториях) Rотн, %
4-гидроксибензойная кислота	10-320	5	10
Бензойная кислота
Сорбиновая кислота
Метил-4-гидроксибензоата
Этил-4-гидроксибензоата
н-пропил-4-гидроксибензоата
н-бутил-4-гидроксибензоата

8.4 Результаты измерений регистрируют в протоколе испытаний, который оформляют в соответствии с требованиями ГОСТ ИСО/МЭК 17025. При этом протокол испытаний должен содержать ссылку на настоящий стандарт с указанием метода подготовки пробы.

Результаты измерений массовой концентрации консервантов представляют в виде

C̅±Δ_C,

(11)

где C̅ - результат измерений массовой концентрации консервантов (см. 8.1), мг/дм³;

Δ_C - границы абсолютной погрешности измерений массовой концентрации консервантов при доверительной вероятности Р = 0, 95, мг/дм³, вычисляемые по формуле

Δ_C=0, 01·δ·C̅,

(12)

где δ - границы относительной погрешности измерений массовой концентрации консервантов (см. таблицу 7), %.

Результаты измерений массовой доли консервантов представляют в виде

X̅±Δ_X,

(13)

где X̅ - результат измерений массовой доли консервантов (см. 8.2), млн^-1;

Δ_X - границы абсолютной погрешности измерений массовой доли консервантов при доверительной вероятности Р = 0, 95, млн^-1, вычисляемые по формуле

Δ_X=0, 01·δ·X̅,

(14)

где δ - границы относительной погрешности измерений массовой доли консервантов (см. таблицу 7), %.

Численное значение результата измерений должно оканчиваться цифрой того же разряда, что и абсолютное значение показателя точности измерений, вычисленное по формуле (12) или (14). Абсолютное значение показателя точности измерений представляют двумя значащими цифрами, если первая цифра не превышает трех. В остальных случаях оставляют одну значащую цифру.

Определяемый консервант	Диапазон измерения массовой концентрации, (массовой доли), мг/дм3 (млн-1)	Относительное стандартное отклонение сходимости (повторяемости) σr, %	Относительное стандартное отклонение воспроизводимости σR, %	Показатель точности измерений (границы относительной погрешности измерений при доверительной вероятности Р = 0, 95*) ±δ, %
4-гидроксибензойная кислота	10-320	2	4	9
Бензойная кислота
Сорбиновая кислота
Метил-4-гидроксибензоата
Этил-4-гидроксибензоата
н-пропил-4-гидроксибензоата
н-бутил-4-гидроксибензоата
* Численные значения границ относительной погрешности соответствуют численным значениям расширенной неопределенности (в относительных единицах) Uотн при коэффициенте охвата k = 2.

Контроль качества результатов измерений в лаборатории предусматривает проведение контроля стабильности результатов измерений с учетом требований ГОСТ ИСО 5725-6 (раздел 6).

Периодичность контроля и процедуры контроля стабильности результатов измерений регламентируют в руководстве по качеству лаборатории в соответствии с ГОСТ ИСО/МЭК 17025 (пункт 4.2).

10.1 Условия безопасного проведения работ

При проведении измерений следует соблюдать требования:

- пожарной безопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004;

- безопасности при работе с вредными веществами в соответствии с ГОСТ 12.1.007;

- электробезопасности - по ГОСТ 12.1.019 и в соответствии с руководствами по эксплуатации используемого оборудования.

10.2 Требования к квалификации операторов

К выполнению испытаний и обработке результатов допускаются специалисты, имеющие высшее или специальное образование, опыт работы в химической лаборатории и изучившие инструкцию по эксплуатации жидкостного хроматографа. Первое применение метода в лаборатории должно проводиться под руководством специалиста, владеющего теорией высокоэффективной жидкостной хроматографии и имеющего практические навыки в этой области.

Приложение А
(справочное)

А.1 Проверку оптимальности хроматографических условий (хроматографических характеристик колонки) проводят по хроматограмме градуировочного раствора N 4 с помощью программного обеспечения или вручную по показателям в соответствии с таблицами А.1 и А.2.

Компонент	Время удерживания, мин	Число теоретических тарелок N	Коэффициент асимметрии As
4-гидроксибензойная кислота	4, 22 ± 0, 30	12 638	1, 88
Бензойная кислота	5, 36 ± 0, 25	19 080	1, 91
Сорбиновая кислота	6, 04 ± 0, 25	17 358	1, 74
Метил-4-гидроксибензоата	8, 07 ± 0, 25	15471	1, 55
Этил-4-гидроксибензоата	11, 45 ± 0, 20	14 071	1, 41
н-пропил-4-гидроксибензоата	18, 12 ± 0, 30	12 829	1, 28
н-бутил-4-гидроксибензоата	30, 81 ± 0, 45	12 520	1, 25

* Значения получены при использовании хроматографической колонки Zorbax SB С 8 фирмы Agilent. Информация является рекомендуемой, приведена для удобства пользователей настоящего стандарта.

Компоненты	Разрешение Rs
4-гидроксибензойная кислота/бензойная кислота	6, 36
Бензойная кислота/сорбиновая кислота	3, 33
Сорбиновая кислота/метил-4-гидроксибензоат	3, 45
Метил-4-гидроксибензоат/этил-4-гидроксибензоат	9, 88
Этил-4-гидроксибензоат/н-пропил-4-гидроксибензоата	1, 28
н-пропил-4-гидроксибензоата/н-бутил-4-гидроксибензоат	1, 44

А.2 Время удерживания соответствующего компонента определяют непосредственно из хроматограмм двух параллельных измерений одной пробы. В случае обнаружения отклонения времен удерживания более чем на 5 % от ранее установленного для любого консерванта проводят контроль стабильности градуировочной характеристики согласно 6.6.

В случае невыполнения условий неравенства (3) заново устанавливают градуировочную характеристику во всем диапазоне измерений. В случае выполнения условий неравенства (3) допускается программное изменение времен удерживания консервантов.

А.3 Число теоретических тарелок рассчитывают по формуле

,

(А.1)

где 16 и 5, 545 - множители, вытекающие из свойств кривой нормального распределения;

t_R - время удерживания пика, мин;

W_b - ширина пика у основания, мин;

W_h - ширина пика на его полувысоте, мин.

Колонка считается удовлетворительной, если найденное число теоретических тарелок составляет не менее 90 % от приведенного в таблице А.1.

А.4 Разрешение R_s вычисляют по формуле

,

(А.2)

где t_R2, t_R1 - времена удерживания разделяемых полностью или критически (не полностью) компонентов, мин;

W_b1, W_b2 - ширина пиков у основания, мин.

По результатам двух параллельных измерений вычисляют средние значения R_s для пары разделяемых полностью или критически (не полностью) компонентов (n, n + 1). Колонка считается удовлетворительной при значениях R_s n, n + 1 ≥ 1, 0.

А.5 Коэффициент асимметрии A_s вычисляют по формуле

,

(А.3)

где А - "левый" отрезок, образованный на горизонтальной линии, проведенной на высоте 10 % от основания пика и разделенной вертикалью, опущенной из вершины пика, мин;

В - "правый" отрезок, образованный на горизонтальной линии, проведенной на высоте 10 % от основания пика и разделенной вертикалью, опущенной из вершины пика, мин.

А.6 Колонку считают удовлетворительной при значении коэффициента асимметрии, не превышающем 2, 5.

А.7 Контроль стабильности хроматографической колонки в процессе эксплуатации проводят не реже одного раза в две недели.

Приложение Б
(справочное)

Б.1 Примеры хроматограмм приведены на рисунках Б.1-Б.3.

1 - 4-гидроксибензойная кислота; 2 - бензойная кислота; 3 - сорбиновая кислота; 4 - метил-4-гидроксибензоат; 5 - этил-4-гидроксибензоат; 6 - н-пропил-4-гидроксибензоат; 7 - н-бутил-4-гидроксибензоат

Рисунок Б.1 - Хроматограмма градуировочного раствора консервантов (массовая доля каждого консерванта 40 мг/дм³)

Рисунок Б.2 - Хроматограмма концентрированного яблочного пюре

1 - 4-гидроксибензойная кислота; 2 - бензойная кислота; 3 - сорбиновая кислота; 4 - метил-4-гидроксибензоат; 5 - этил-4-гидроксибензоат; 6 - н-пропил-4-гидроксибензоат; 7 - н-бутил-4-гидроксибензоат

Рисунок Б.3 - Хроматограмма концентрированного яблочного пюре с добавкой смеси консервантов (массовая доля каждого консерванта 40 мг/кг)