МУК 4.2.1772-03 МЕТОД МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ИЗМЕРЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ КЛЕТОК МИКРООРГАНИЗМА BACILLUS LICHENIFORMIS 1001 - ПРОДУЦЕНТА БАЦИТРАЦИНА В АТМОСФЕРНОМ ВОЗДУХЕ НАСЕЛЕННЫХ МЕСТ

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Настоящие методические указания устанавливают методику проведения микробиологического количественного анализа концентрации клеток штамма В. lichenifofmis 1001 - продуцента бацитрацина в атмосферном воздухе населенных мест в диапазоне концентраций от 50 до 50000 клеток в 1 м³ воздуха.

Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ 17.2.4.02-81 «Охрана природы. Атмосфера. Общие требования к методам определения загрязняющих веществ» и Р 8.563-96 «Методики выполнения измерений».

Методические указания предназначены для применения в лабораториях предприятий, организаций и учреждений, аккредитованных в установленном порядке на право проведения микробиологических исследований.

Методические указания одобрены и рекомендованы секцией «Гигиенические аспекты биотехнологии и микробного загрязнения окружающей среды» Проблемной комиссии «Научные основы гигиены окружающей среды».

На МПА штамм образует большие округлые колонии, максимальный диаметр которых составляет 0,8-1,1 см. В центре колонии наблюдается плотное матовое желтоватого цвета уплотнение, максимальный диаметр которого может составлять 0,3-0,5 см. Вокруг него располагается прозрачная складчатая кайма, края которой сильно изрезаны. Колонии гладкие, плоские, матовые. Не врастают в агар и легко отделяются от него. Цвет белесый с желтоватым оттенком.

Морфологически штамм представлен подвижными мелкими толстыми короткими палочками, образующими центрально расположенные эндоспоры, располагаются поодиночке или небольшими конгломератами, редко образуют цепочки. Палочки снабжены жгутиками, расположенными перитрихиально.

В. licheniformis аэроб, сапрофит, мезофил, грамположителен. Чувствителен к целому ряду антибиотиков, умеренно чувствителен к бензил - пенцилину..

Штамм-продуцент растет на жидких и агаризованных средах. Оптимальная температура роста 36-38 °С, оптимальная рН 7,0- 8,0, культивирование 7 суток. Для размножения используется мясопептонная агаризованная среда (МПА).

Предельно допустимая концентрация (ПДК) в атмосферном воздухе населенных мест - 5 000 кл/м³, пометка А.

Методика обеспечивает выполнения измерений количества клеток микроорганизма в атмосферном воздухе населенных мест в диапазоне концентраций от 50 до 50000 клеток в 1 м³ воздуха при доверительной вероятности 0,95.

Прямой метод основан на аспирации из воздуха клеток микроорганизма на агаризованную среду МПЛ и подсчета количества выросших колоний по типичным культурально-морфологическим признакам.

Косвенный метод основан на аспирации из воздуха клеток микроорганизма на поверхность плотной питательной среды (МПА) и подсчета зон задержки роста тест культуры Micrococcus flaws ATCC 10240 через 24-48 ч. При данном методе на одной чашке Петри после забора пробы может быть учтено не более 50 колоний на чашке, т. к. большее количество колоний на чашке образуют сливающиеся зоны задержки роста тест культуры под действием антибиотика бацитрацина.

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы.

При выполнении измерений концентрации клеток штамма-продуцента в атмосферном воздухе соблюдают следующие требования:

6.1. Правила техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.005-88..

6.2. Электробезопасность при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.005-88.и инструкции по эксплуатации прибора.

6.3. «Инструкции по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности» (1977).

6.4. Все виды работ с реактивами проводят только в вытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом осуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами.

К выполнению измерений и обработке их результатов допускают лиц с высшим или средним специальным образованием, прошедших соответствующую подготовку и имеющих навыки работы в области микробиологических исследований.

Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха

(20 ± 5 °С), атмосферном давлении 630-800 мм рт. ст. и влажности воздуха не более 80 %.

9.1. Условия отбора проб воздуха

Для определения концентрации клеток микроорганизма воздух аспирируют при помощи аппарата Кротова со скоростью Юл/мин на поверхность плотной питательной агаризованной среды МПА. Время аспирации воздуха (5-20 мин) зависит от предполагаемой концентрации клеток штамма-продуцента.

Аппарат Кротова перед каждым отбором пробы воздуха тщательно протирают спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхность подвижного диска и внутреннюю стенку прибора; наружную и внутреннюю стенку крышки. На подвижной диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо. После отбора пробы воздуха и остановки диска, прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора пробы.

9.2. Выполнение анализа