МУК 4.2.1111-02 ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МЕТОДА ИЗМЕРЕНИЯ ЭЛЕКТРИЧЕСКОГО СОПРОТИВЛЕНИЯ (ИМПЕДАНСА) ДЛЯ САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ ПИТЬЕВОЙ ВОДЫ

ГОСУДАРСТВЕННОЕ САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОЕ
НОРМИРОВАНИЕ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МЕТОДА ИЗМЕРЕНИЯ
ЭЛЕКТРИЧЕСКОГО СОПРОТИВЛЕНИЯ (ИМПЕДАНСА)
ДЛЯ САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО
ИССЛЕДОВАНИЯ ПИТЬЕВОЙ ВОДЫ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
МУК 4.2.1111-02

Минздрав России

Москва 2002

1. Разработаны Федеральным центром Госсанэпиднадзора Минздрава России (Подунова Л.Г., Кривопалова Н.С., Сорокина Р.С.) при участии фирмы «SY-LAB», Австрия (М. Шинкингер, Соколов Д.М.).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Минздраве России (прот. № 12 от 14 февраля 2002 г.).

3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации - Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации 26 февраля 2002 г., введены в действие с 1 мая 2002 г.

4. С момента ввода данных методических указаний считаются утратившими силу «Методические рекомендации по проведению бактериологических исследований питьевой воды с использованием микробиологического экспресс-анализатора «Бак Трак 4100» № 01-19/82-23 от 22.05.96 и раздел 6 «Исследование питьевой воды» методических указаний МУК 4.2.590-96 «Бактериологические исследования с использованием микробиологического экспресс-анализатора «Бак Трак 4100».

5. Введены впервые.

СОДЕРЖАНИЕ

1. Область применения. 2

2. Сущность метода. 2

3. Нормативные ссылки. 3

4. Проведение анализа. 3

4.1. Определение общего числа микроорганизмов. 4

4.2. Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий. 4

4.2.1. Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий методом мембранной фильтрации (основной метод)5

4.2.2. Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий прямым методом с использованием измерительных ячеек объемом 100 мл. 6

4.2.3. Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий титрационным методом.. 7

4.3. Определение спор сульфитредуцирующих клостридий. 8

4.4. Прямой метод определения колифагов. 9

5. Основные этапы создания калибровочного файла. 10

6. Питательные среды: назначение, приготовление, использование. 13

6.1. Приготовление сред. 14

7. Методика тестирования и обработки измерительных ячеек. 14

7.1. Методика тестирования измерительных ячеек прибора «Бак Трак». 14

7.2. Методика обработки измерительных ячеек прибора «Бак Трак». 15

7.2.1. Обработка измерительных ячеек. 15

7.2.2. Стерилизация измерительных ячеек. 16

Библиографические данные. 16

ПриложениеФорма кривых импедансного сигнала при исследовании питьевой воды с использованием различных питательных сред. 17

УТВЕРЖДАЮ

Главный государственный

санитарный врач Российской Федерации,

Первый заместитель Министра

здравоохранения Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

26 февраля 2002 г.

МУК 4.1.1062-01

Дата введения 1 мая 2002 г.

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Использование метода измерения
электрического сопротивления (импеданса)
для санитарно-микробиологического
исследования питьевой воды

Методические указания

1.1. Настоящие методические указания предназначены для центров государственного санитарно-эпидемиологического надзора, осуществляющих контроль качества питьевой воды централизованных систем питьевого водоснабжения, а также для лабораторий организаций, предприятий и иных хозяйственных субъектов, обеспечивающих производственный контроль.

1.2. Методические указания устанавливают ускоренный метод качественного и количественного определения индикаторных микроорганизмов в питьевой воде в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.4.1074-01 «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества».

1.3. Настоящие методические указания разработаны для осуществления объективного, достоверного и быстрого санитарно-микробиологического анализа питьевой воды с целью контроля ее качества и для обеспечения безопасности и безвредности воды в централизованных системах питьевого водоснабжения.

Методические указания содержат описание санитарно-микробиологического исследования питьевой воды по показателям качества СанПиН 2.1.4.1074-01 «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества» с использованием микробиологического экспресс-анализатора «Бак Трак 4100»* производства австрийской фирмы «SY-LAB».

* Далее «Бак Трак»

Предлагаемый анализатор является автоматизированной системой, созданной на основе импедансной технологии и предназначенной для ускоренной количественной и качественной оценки степени микробного загрязнения исследуемой пробы.

Импеданс - это сопротивление потоку переменного тока через проводящий материал. Импедансная технология в микробиологии является непрямым культуральным методом для определения микроорганизмов с использованием измерения электрического сопротивления. Изменения импеданса происходят в питательной среде по мере того, как ее химический состав преобразуется в результате роста и метаболической активности микроорганизмов. Под действием микроорганизмов заряженные конечные продукты метаболизма выделяются в ростовую среду.

В основном незаряженные или слабозаряженные субстраты превращаются в сильнозаряженные конечные продукты: белки утилизируются до аминокислот, углеводы и жиры - до органических кислот и т.д. Образующиеся метаболиты имеют меньший размер и, таким образом, более подвижны. Эти электрохимические процессы приводят к существенным изменениям импеданса. Когда количество микроорганизмов достигает порога около 10⁶ - 10⁷ клеток/мл, наблюдаются экспоненциальные изменения импедансного сигнала. Время, необходимое для достижения значимого изменения импеданса, называется временем определения импеданса (IDT). Значение IDT обратно пропорционально начальной концентрации микроорганизмов в исследуемой пробе. Ход кривых импедансного сигнала соответствует и отражает кривую роста микроорганизмов в исследуемой пробе.

Селективные питательные среды, специально разработанные для измерения импеданса в системе «Бак Трак 4100», позволяют определять микробиологические показатели качества питьевой воды в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.4.1074-01 и сокращают сроки получения результатов.

3.1. Федеральный закон «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения» от 30 марта 1999 г. № 52-ФЗ.

3.2. «Основы законодательства Российской Федерации об охране здоровья граждан» от 22.07.93 № 5487-1.

3.3. Санитарные правила и нормы «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества». СанПиН 2.1.4.1074-01.

3.4. Методические указания «Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды». МУК 4.2.1018-01.

3.5. Методические указания «Бактериологические исследования с использованием микробиологического экспресс-анализатора «Бак Трак 4100». МУК 4.2.590-96.

Исследование проводится по микробиологическим показателям качества питьевой воды, регламентированным СанПиН 2.1.4.1074-01 «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества».

Определяемые показатели:

1. Общее число микроорганизмов в 1 мл.

2. Общие колиформные бактерии в 100 мл.

3. Термотолерантные колиформные бактерии в 100 мл.

4. Споры сульфитредуцирующих клостридий в 20 мл.

5. Колифаги в 100 мл.

Отбор, хранение и транспортирование проб для исследования, а также подготовка их к анализу и методика работы при использовании мембранных фильтров проводятся в соответствии с требованиями МУК 4.2.1018-01 «Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды».

1. Питательная среда: BiMedia 001А, приготовленная в соответствии с требованиями инструкции изготовителя.

2. Протокол измерения.

2.1. Установить температуру 37 °С на приборе «Бак Трак».

2.2. Установить в основном меню программы прибора параметры. Параметры для инкубаторного блока (Adjust parameters):

Время исследования (Duration) - 24 ч

Масштаб измерений (Scale):

• М-параметр                                                0 - 50 %

• Е-параметр                                                 0 - 50 %

• Время задержки (Delay)                            1 ч

3. Установка пороговых значений (Thresholds):

3.1.В случае использования калибровочного файла для исследования питьевой воды параметры пороговых значений вносятся автоматически (имеется коммерческий калибровочный файл для исследования питьевой воды - WATER.COR).

3.2. При отсутствии калибровочного файла одновременно с посевом исследуемого образца воды на среду BiMedia 001А производится определение общего количества бактерий классическим методом на чашках Петри в соответствии с требованиями МУК 4.2.1018-01 «Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды».

Наименования рекомендуемых для использования в данном случае питательных сред приведены в разделе 6 данных методических указаний.

Результаты, полученные при классическом методе исследования (KOE/CFU в 1 мл), вносят в соответствующий файл (MAIN MENU / DATA FUNCTION / ENTER VALUES). Основные этапы создания калибровочного файла рассмотрены в разделе 5 данных указаний.

4. Добавить в каждую измерительную ячейку по 9 мл среды BiMedia 001А.

5. Внести 1 мл исследуемого образца воды в измерительную ячейку с 9 мл питательной среды.

6. Тщательно перемешать содержимое, вращая ячейку между ладонями (не переворачивать ячейку!).

7. Для контроля среды используют одну измерительную ячейку с 10 мл среды BiMedia 001А (без инокулята).

8. Выбрать в основном меню программы ЗАПУСК ИЗМЕРЕНИЙ (START MEASUREMENT) и начать измерение.

9. После того, как каждая позиция блока будет отмаркирована как свободная на экране монитора, поместить измерительные ячейки в прибор «Бак Трак».

Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки ячеек в прибор. Рост микроорганизмов и время определения изменения импеданса (IDT) будут записаны автоматически.

При пересечении порогового значения происходит автоматический подсчет численности микроорганизмов в исследуемом образце воды.

Результат определения КОЕ (CFU) выдается автоматически в виде количества микроорганизмов в 1 мл исследуемого образца воды.

Учет результатов проводится по М-параметру.

Исследование может проводиться одним из трех методов:

1) мембранной фильтрации с последующим тестированием на микробиологическом экспресс-анализаторе «Бак Трак»;

2) титрационным с предварительным этапом накопления бактерий в жидкой питательной среде;

3) прямого измерения с использованием измерительных ячеек прибора «Бак Трак» объемом 100 мл.

Сущность метода заключается в концентрировании бактерий из установленного объема анализируемой пробы воды и дальнейшем определении показателя на приборе «Бак Трак». Используется метод мембранных фильтров в соответствии с МУК 4.2.1018-01 «Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды».

1. Среда BiMedia 160B* приготовленная в соответствии с требованиями инструкции изготовителя.

* Возможно использование питательной среды BiMedia 160С при необходимости определения индолообразования.

2. Протокол измерения.

2.1. Установить температуру 37 °С на приборе «Бак Трак».

2.2. Установить в основном меню программы прибора параметры.

Время исследования (Duration) - 24 ч

Масштаб измерений (Scale)

• М-параметр                                                0 - 50 %

• Е-параметр                                                 0 - 50 %

• Время задержки (Delay)                            1 ч

3. Установка пороговых значений (Thresholds):

3.1. В случае использования калибровочного файла для исследования питьевой воды параметры пороговых значений вносятся автоматически (имеется коммерческий калибровочный файл для исследования питьевой воды на колиформные бактерии - COLI.COR).

3.2. В отсутствие калибровочного файла одновременно с посевом исследуемого образца воды на среду BiMedia 160В производится определение наличия колиформных бактерий классическим методом мембранных фильтров в соответствии с МУК 4.2.1018-01.

Результаты, полученные при классическом методе исследования, вносят в соответствующий файл (MAIN MENU / DATA FUNCTION / ENTER VALUES). Основные этапы создания калибровочного файла рассмотрены в разделе 5 данных указаний.

4. Добавить в каждую измерительную ячейку по 10 мл среды BiMedia 160B.

5. Поместить мембранный фильтр исследуемого образца воды в измерительную ячейку с 10 мл среды.

6. Для контроля среды используют измерительную ячейку с 10 мл среды BiMedia 160В.

7. Выбрать в основном меню программы ЗАПУСК ИЗМЕРЕНИЙ (START MEASUREMENT) и начать измерение.

8. После того, как каждая позиция в блоке будет отмаркирована как свободная на экране монитора, поместить измерительные ячейки в прибор «Бак Трак».

Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки ячеек в прибор. Рост микроорганизмов и время определения изменения импеданса (IDT) будут записаны автоматически.

При наличии в исследуемом образце воды единичных клеток колиформных бактерий изменение сигнала импеданса превышает 5 %-ное пороговое значение по М-параметру за период времени менее 16 часов.

При положительном результате наблюдается также изменение цвета питательной среды: исходный пурпурный цвет среды меняется на желтый.

При использовании калибровочного файла результат исследования выдается автоматически в виде количества колиформных бактерий в исследуемом объеме воды.

Для постановки оксидазного теста и определения ферментации лактозы при (44 ± 0,5) °С с целью подтверждения наличия или отсутствия термотолерантных колиформных бактерий в исследуемой пробе из ячеек с признаками роста колиформных бактерий делают высев петлей на чашки Петри со средой Эндо. Посевы инкубируют при температуре (37 ± 1) °С в течение 24 ± 2 часов.

Постановка тестов проводится в соответствии с требованиями МУК 4.2.1018-01 «Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды».