МУК 4.2.1072-01 МЕТОД МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ИЗМЕРЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ КЛЕТОК МИКРООРГАНИЗМА PENICILLIUM VERMICULATUM PK-1 - ПРОДУЦЕНТ ВЕРМИКУЛЕНА В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ

ГОСУДАРСТВЕННОЕ САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОЕ
НОРМИРОВАНИЕ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ГОСУДАРСТВЕННЫЕ САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИЕ
ПРАВИЛА И НОРМАТИВЫ

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Метод микробиологического измерения концентрации клеток микроорганизма Penicillium vermiculatum PK-1 - продуцент Вермикулена в воздухе рабочей зоны

Методические указания

МУК 4.2.1072-01

Минздрав России
Москва 2002

1. Разработаны к. б. н. Бару Р. В., к. б. н. Лапчинской А. В. (Государственный научный центр по антибиотикам).

2. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации - Первым заместителем министра здравоохранения Российской Федерации 20 сентября 2001 г.

3. Введены впервые.

СОДЕРЖАНИЕ

УТВЕРЖДАЮ

Главный государственный

санитарный врач Российской

Федерации - Первый заместитель

Министра здравоохранения

Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

20 сентября 2001 г.

МУК 4.2.1072-01

Дата введения: с момента

утверждения

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Метод микробиологического измерения концентрации клеток микроорганизма Penicillium vermiculatum PK-1 - продуцент Вермикулена в воздухе рабочей зоны

Методические указания

Настоящие методические указания устанавливают методику проведения микробиологического количественного анализа концентрации клеток штамма Penicillium vermiculatum PK-1 - продуцент Вермикулена в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 100 до 3000 клеток в 1 м³ воздуха.

Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 «ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования» и ГОСТ Р 8.563-96 «Методики выполнения измерений».

Методические указания предназначены для применения в лабораториях предприятий, организаций и учреждений, аккредитованных в установленном порядке на право проведения микробиологических исследований.

Микроорганизм Penicillium vermiculatum PK-1 является продуцентом Вермикулена. Биологический препарат Вермикулен представляет собой живую культуру (споры и мицелиальная масса микроорганизма Penicillium vermiculatum PK-l).

Penicillium vermiculatum PK-1 - аэроб, растет на жидких и агаризованных средах, оптимальная температура роста 25-30 °С, оптимальная рН от 5 до 8. Наиболее интенсивный рост гриба отмечается на картофельно-сахарозном агаре и агаризованной среде Чапека. На среде Чапека-Докса при культивировании при температуре 25 °С на 2-3 сутки образуются небольшие (2-5 мм в диаметре) округлые бархатистые колонии желто-бежеватого цвета, с обратной стороной от светло- до темнооливкового. Репродуктивными органами микроорганизма являются споры (конидии и обрывки мицелия).

ПДК_р.з - 5000 кл/м³

Методика обеспечивает выполнение измерений количества клеток продуцента Вермикулена в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 100 до 30000 клетокв 1 м³ воздуха при доверительной вероятности 0,95.

Метод основан на аспирации из воздуха клеток продуцента Вермикулена на поверхность плотной питательной среды и подсчете выросших колоний по типичным морфологическим признакам.

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы.

5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы

Прибор для бактериологического анализа воздуха, модель 818 (щелевой прибор Кротова)                                                                                                     ТУ 64-12791-77

Термостаты электрические суховоздушные или водяные

Автоклав электрический                                                                          ГОСТ 9586-75

Бокс, оборудованный бактерицидными лампами

Холодильник бытовой

Весы лабораторные, аналитические типа ВЛА-200

Микроскоп биологический с иммерсионной системой типа «Биолам» Л-211

Лупа с увеличением х 10                                                                          ГОСТ 25706-83

Чашки Петри бактериологические плоскодонные стеклянные, диаметром 100 мм

Пробирки биологические, вместимостью 20 и 35 мл                           ГОСТ 10515-75

Пипетки мерные на 1, 5 и 10 мл                                                              ГОСТ 10515-75

Пипетки мерные на 1, 5 и 10 мл                                                              ГОСТ 1770-74

Колбы конические, вместимостью 250 и 500 мл                                   ГОСТ 1770-74

Секундомер                                                                                                ГОСТ 9586-75

Барометр                                                                                                     ГОСТ 24696-79

Марля медицинская                                                                                  ГОСТ 9412-77

Вата медицинская гигроскопическая                                                     ГОСТ 25556-81

5.2. Реактивы, растворы

Антибиотики группы аминогликозидов (канамицин, неомицин и др.)

Спирт этиловый ректификат                                                                   ГОСТ 5962-67

Селективная среда Чапека-Докса для штамма-продуцента: NaNO₃ - 3,0 г; MgSO₄ K₂HPO₄ - 1,0 г; KCL - 0,5 г; MgSO₄×7Н₂O - 0,5 г; FeSO₄×7Н₂O - 0,01 г; сахароза - 30 г; агар - 20 г; вода дистиллированная - до 1000 мл; рН - 6,0; стерилизация при 121 °С; 30 мин.

При выполнении измерений концентрации клеток продуцента Вермикулена в воздухе рабочей зоны соблюдают:

·         правила техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.005-88;

·         правила электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцию по эксплуатации прибора;

·         требования, изложенные в руководстве «Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности» (1980);

·         положения «Инструкций по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности» (1977).

Все виды работ с реактивами проводят только в вытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом осуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами.

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются лица с высшим или средним специальным образованием, прошедшие соответствующую подготовку и имеющие навыки работы в области микробиологических исследований.

Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20 ± 5) °С, атмосферном давлении 630-800 мм рт. ст. и влажности воздуха не более 80 %.

9.1.Условия отбора проб воздуха

Для определения продуцента Вермикулена воздух аспирируют при помощи аппарата Кротова со скоростью 10 л/мин на поверхность плотной питательной среды. Время аспирации воздуха (1-10 мин) зависит от предполагаемой концентрации клеток продуцента.

Аппарат Кротова перед каждым отбором пробы воздуха тщательно протирают спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхность подвижного диска и внутреннюю стенку прибора; наружную и внутреннюю стенку крышки. На подвижный диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо. После отбора пробы воздуха и остановки диска прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора пробы.

9.2. Выполнение анализа