МУК 4.2.1069-01 МЕТОД МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ИЗМЕРЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ КЛЕТОК ПЛЕСНЕВОГО ГРИБА PENICILLIUM FUNICULOSUM F-149 - ПРОДУЦЕНТА ДЕКСТРАНАЗЫ В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ

ГОСУДАРСТВЕННОЕ САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОЕ
НОРМИРОВАНИЕ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ГОСУДАРСТВЕННЫЕ САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИЕ
ПРАВИЛА И НОРМАТИВЫ

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Метод микробиологического измерения
концентрации клеток плесневого гриба
Penicillium funiculosum F-149 - продуцента
декстраназы в воздухе рабочей зоны

Методические указания

МУК 4.2.1069-01

Минздрав России
Москва 2002

1. Разработаны д. м. н. Ивановым Н. Г., к. б. н. Шеиной Н. И. (Российский государственный медицинский университет).

2. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации - Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации 20 сентября 2001 г.

3. Введены впервые.

СОДЕРЖАНИЕ

УТВЕРЖДАЮ

Главный государственный

санитарный врач Российской

Федерации - Первый заместитель

Министра здравоохранения

Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

20 сентября 2001 г.

МУК 4.2.1069-01

Дата введения: с момента

утверждения

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Метод микробиологического измерения концентрации клеток плесневого гриба Penicillium funiculosum F-149-продуцента декстраназы в воздухе рабочей зоны

Методические указания

Настоящие методические указания устанавливают методику проведения микробиологического количественного анализа концентрации клеток штамма Penicillium funiculosum F-149 - продуцента декстраназы в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 100 до 5000 клеток в 1 м³ воздуха.

Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 «ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования» и ГОСТ Р 8.563-96 «Методики выполнения измерений».

Методические указания предназначены для применения в лабораториях предприятий, организаций и учреждений, аккредитованных в установленном порядке на право проведения микробиологических исследований.

Систематическое положение микроорганизма

Класс              Fungi imperfecti

Порядок         Hyphomycetales

Семейство     Mucedinaceae

Род                 Penicillium

Секция           Biverticillata

Вид                 funiculosum

Штамм           F-149

Округлые колонии имеют 4-5 мм в диаметре, в зависимости от плотности посева могут достигать 11 мм в диаметре. Поверхность колоний слабо шероховатая, пушистая, консистенция мягкая. Воздушный мицелий имеет белоснежно-белую окраску. На 3-4 день развития желтовато-кремовый субстрат меняет свою окраску, становясь ярко-оранжевым. Продолжительность развития гриба составляет 26-30 дней. Репродуктивными органами гриба являются конидиеносцы с конидиями (споры), может также размножаться вегетативно (фрагментами мицелия).

Штамм Penicillium funiculosum F-149 получен из Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов ГНИИгенетики. Штамм является продуцентом декстраназы. Активность по методу Нельсона составляет 10-12 ед/мл культуральной жидкости. Изучаемый штамм выделен из почвы, аэроб, растет на жидких и агаризованных средах. Оптимальная температура роста 28-30 °С, оптимальный рН 6-8. Наиболее интенсивный рост наблюдается на агаризованном пивном сусле 7 °Б, для выращивания могут также использоваться картофельно-сахарозный агар, агаризованная среда Чапека, среда Чапека-Докса.

Предельно допустимая концентрация (ПДК) в воздухе рабочей зоны - 2000 кл/м³, пометка А.

Методика обеспечивает выполнение измерений количества клеток плесневого гриба в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 100 до 3000 клеток в 1 м³ воздуха при доверительной вероятности 0,95.

Метод основан на аспирации из воздуха клеток плесневого гриба на поверхность плотной питательной среды и подсчета выросших колоний по типичным морфологическим признакам и ярко-оранжевому окрашиванию субстрата на 3-4 сутки. Вопрос о корреляции между пигментной и ферментативной активностью плесневого гриба требует дополнительных исследований.

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы.

5.1.Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы

Прибор для бактериологического анализа воздуха, модель 818 (щелевой прибор Кротова)                                                                                                  ТУ 64-12791-77

Термостаты электрические суховоздушные или водяные

Автоклав электрический                                                                       ГОСТ 9586-75

Бокс, оборудованный бактерицидными лампами

Холодильник бытовой

Весы лабораторные, аналитические типа ВЛА-200

Микроскоп биологический с иммерсионной системой типа «Биолам» Л-211

Лупа с увеличением х 10                                                                       ГОСТ 25706-83

Чашки Петри бактериологические плоскодонные стеклянные, диаметром 100 мм

Пробирки биологические, вместимостью 20 и 35 мл                        ГОСТ 10515-75

Пипетки мерные на 1,5 и 10 мл                                                            ГОСТ 10515-75

Пипетки мерные на 1,5, и 10 мл                                                           ГОСТ 1770-74

Колбы конические, вместимостью 250 и 500 мл                                ГОСТ 1770-74

Секундомер                                                                                             ГОСТ 9586-75

Барометр                                                                                                  ГОСТ 24696-79

Марля медицинская                                                                               ГОСТ 9412-77

Вата медицинская гигроскопическая                                                  ГОСТ 25556-81

5.2. Реактивы, растворы

Антибиотики группы аминогликозидов: канамицин, неомицин и др.

Спирт этиловый ректификат                                                                ГОСТ 5962-67

Агаризованное пивное сусло 7 °Б для штамма-продуцента (агар - 1,8 %, рН 6,8, режим стерилизации 1,1-1,2 атм в течение 30 мин)

При выполнении измерений концентрации клеток штамма-продуцента в воздухе рабочей зоны соблюдают:

·                  правила техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.005-88;

·                  правила электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцию по эксплуатации прибора;

·                  требования, изложенные в руководстве «Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности» (1980);

·                  положения «Инструкций по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности» (1977).

Все виды работ с реактивами проводят только в вытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом осуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами.

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются лица с высшим или средним специальным образованием, прошедшие соответствующую подготовку и имеющие навыки работы в области микробиологических исследований.

Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20 ± 5) °С, атмосферном давлении 630-800 мм рт. ст. и влажности воздуха не более 80 %.

9.1. Условия отбора проб воздуха

Для определения концентрации клеток плесневого гриба воздух аспирируют при помощи аппарата Кротова со скоростью 10 л/мин на поверхность плотной питательной среды - пивное агаризованное сусло 7 °Б. Время аспирации воздуха (1-10 мин) зависит от предполагаемой концентрации клеток штамма-продуцента.

Аппарат Кротова перед каждым отбором пробы воздуха тщательно протирают спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхность подвижного диска и внутреннюю стенку прибора; наружную и внутреннюю стенку крышки. На подвижный диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо. После отбора пробы воздуха и остановки диска прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора пробы.

9.2. Выполнение анализа