Метод микробиологического измерения концентрации клеток микроорганизма Pseudomonas fluorescens (denitrificans) В 99 - продуцента витамина B12 в воздухе рабочей зоны: Методические указания. - М.: Федеральный центр госсанэпиднадзора Минздрава России, 2001.
1. Разработаны канд. биол. наук Бару Р.В., канд. биол. наук Лапчинской А.В. (Государственный научный центр по антибиотикам).
2. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации - Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации 21 декабря 2000 г.
3. Введены впервые.
Г.Г. Онищенко
21 декабря 2000 г.
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Методические указания
МУК 4.2.1008-00
1. Общие положения и область применения
Настоящие методические указания устанавливают методику проведения микробиологического количественного анализа концентрации клеток штамма Pseudomonas fluorescens (denitrificans) В99 - продуцента витамина В12 в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 100 до 3000 клеток в 1 м3 воздуха.
Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 «ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования» и ГОСТ 8.563-96 «Методики выполнения измерений».
Методические указания предназначены для применения в лабораториях предприятий, организаций и учреждений, аккредитованных в установленном порядке на право проведения микробиологических исследований.
Методические указания одобрены и рекомендованы секцией «Гигиенические аспекты биотехнологии и микробного загрязнения окружающей среды» Проблемной комиссии «Научные основы гигиены окружающей среды».
2. Характеристика штамма-продуцента витамина В12
Микроорганизм Pseudomonas fluorescens (denitrificans) В99 является продуцентом витамина В12. Штамм растет на агаризованных средах на основе мелассы при температуре 28°С. В течение 3-х суток образует округлые колонии 1 - 2 мм белого цвета. Морфологически представляет собой грамотрицательные подвижные палочки размером 0,45 - 0,85´0,6 мкм. Штамм устойчив к следующим антибиотикам: левомицину, линкомицину, полимиксину М, ристомицину, цефалотину и эритромицину.
Предельно допустимая концентрация (ПДК) в воздухе рабочей зоны - 2000 кл/м3.
3. Пределы измерений
Методика обеспечивает выполнение измерений количества клеток продуцента витамина В12 в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 100 до 3000 клеток в 1 м3 воздуха при доверительной вероятности 0,95.
4. Метод измерений
Метод основан на аспирации из воздуха клеток продуцента витамина В12 на поверхность плотной питательной среды и подсчете высохших колоний по типичным морфологическим признакам.
5. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы
При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы.
5.1 . Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы
|
Прибор для бактериологического анализа воздуха, модель 818 (щелевой прибор Кротова)
|
ТУ 64-12791-77
|
|
Термостаты электрические суховоздушные или водяные
|
ГОСТ 9586-75
|
|
Автоклав электрический
|
|
Бокс, оборудованный бактериальными лампами
|
|
Холодильник бытовой
|
|
Весы лабораторные, аналитические типа ВЛА-200
|
|
Микроскоп биологический с иммерсионной системой типа «Биолам» Л-211
|
|
Лупа увеличением ´10
|
ГОСТ 25706-83
|
|
Чашки Петри бактериологические плоскодонные, стеклянные, диаметром 100 мм
|
|
Пробирки биологические вместимостью 20 и 35 мл
|
ГОСТ 10515-75
|
|
Пипетки мерные на 1,5 и 10 мл
|
ГОСТ 10515-75
|
|
Пипетки мерные на 1, 5, и 10 мл
|
ГОСТ 1770-74
|
|
Колбы конические вместимостью 250 и 500 мл
|
ГОСТ 1770-74
|
|
Секундомер
|
ГОСТ 9586-75
|
|
Барометр
|
ГОСТ 24696-79
|
|
Марля медицинская
|
ГОСТ 9412-77
|
|
Вата медицинская гигроскопическая
|
ГОСТ 25556-81
|
5.2 . Реактивы, растворы
Антибиотики: левомицетин, линкомицин, полимиксин М, цефалотин, эритромицин.
Спирт этиловый ректификат ГОСТ 5962-67
Селективная среда для штамма-продуцента.
Среда: меласса - 100 - 150 г; (NН4)2НРО4 - 1,3 г; MgSО47H2О - 1,0 г; (NН4)2SО4 - 0,5 г; MnSO4H2O - 0,1 г; ZnSO47H2O - 0,1 г; агар Difco - 20 г; вода дистиллированная - до 1000 мл; рН - 6,8 - 7,0; стерилизация 121°С, 30 минут.
6. Требования безопасности
При выполнении измерений концентрации клеток продуцента витамина В12 в воздухе рабочей зоны соблюдают следующие требования.
6.1. Правила техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.005-88.
6.2. Электробезопасность при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора.
6.3. Руководство «Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности» (1980), «Инструкция по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности» (1977).
6.4. Все виды работ с реактивами проводят только в вытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическими материалами осуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами.
7. Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений и обработке их результатов допускают лиц с высшим и средним специальным образованием, прошедших соответствующую подготовку и имеющих навыки работы в области микробиологических исследований.
8. Условия измерений
Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха 20±5°С, атмосферном давлении 630 - 800 мм рт. ст. и влажности воздуха не более 80%.
9. Проведение измерения
9.1 . Условия отбора проб воздуха
Для определения продуцента витамина B12 в воздух аспирируют при помощи аппарата Кротова со скоростью 10 л/мин на поверхность плотной питательной среды. Время аспирации воздуха (1 - 10 мин) зависит от предполагаемой концентрации клеток продуцента.
Аппарат Кротова перед каждым отбором воздуха тщательно протирают спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхность подвижного диска и внутреннюю стенку прибора; наружную и внутреннюю стенку крышки. На подвижной диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо. После отбора пробы воздуха и остановки диска прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора пробы.
9.2 . Выполнение анализа
Администратор
04.10.2013
