Государственная система
санитарно-эпидемиологического нормирования Российской Федерации
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Фотометрическое измерение
концентраций глюкозооксидазы в воздухе рабочей зоны
МУК 4.1.0.358-96
Минздрав России
Москва · 1999
1. Методические указания
разработаны с целью обеспечения контроля соответствия фактических концентраций
вредных веществ их предельно допустимым концентрациям (ПДК) и ориентировочно
безопасным уровням воздействия (ОБУВ) - санитарно-гигиеническим нормативам и
являются обязательными при осуществлении санитарного контроля.
2. Методические указания по измерению концентраций вредных веществ в
воздухе рабочей зоны (выпуск 32) утверждены и. о. Председателя
Госкомсанэпиднадзора России - заместителем Главного государственного
санитарного врача Российской Федерации 8 июня 1996 г.
3. Введены впервые.
4. Включенные в данный выпуск методики контроля разработаны и
подготовлены в соответствии с требованиями ГОСТа
12.1.005-88 ССБТ «Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические
требования», ГОСТа
12.1.016-79 ССБТ «Воздух рабочей зоны. Требования к методикам измерения
концентраций вредных веществ», ГОСТа Р 1.5-92 п. 7.3,
ГОСТа 8.101-90 «Государственная система обеспечения единства измерений.
Методики выполнения измерений». Методические указания одобрены комиссией по
государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию
Госкомсанэпиднадзора России и Проблемной комиссией «Научные основы гигиены
труда и профпатологии».
Методические указания по измерению концентраций вредных веществ в
воздухе рабочей зоны (выпуск 32) предназначены для центров Госсанэпиднадзора,
санитарных лабораторий промышленных предприятий при осуществлении контроля за
содержанием вредных веществ в воздухе рабочей зоны, а также заинтересованных
министерств и ведомств.
Ответственный исполнитель: Г.А. Дьякова
Исполнители: Г.А. Дьякова, Л.Г. Макеева, Е.М. Малинина, С.М. Попова,
Н.С. Горячев, М.И. Аржанова, Т.В. Рязанцева, Е.Н. Грицун.
УТВЕРЖДЕНО
И. о. Председателя Госкомсанэпиднадзора
России - заместителем Главного
государственного санитарного врача
Российской Федерации
Г.Г.
Онищенко
8 июня 1996 г.
МУК 4.1.0.358-96
Дата введения: с момента
утверждения
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.
ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Фотометрическое измерение концентраций
глюкозооксидазы в воздухе рабочей зоны
Ферментный препарат
глюкозооксидазы
(К. Ф.
1.1.3.4. b,
a-глюкоза:
О2-оксидо-редуктаза) М.
м. 154000
Глюкозооксидаза представляет
собой желтый кристаллический порошок. Оптимальные условия проявления
ферментативной активности. Т - 30 - 35 °С; рН - 5,8 - 6,0. Хорошо растворим в
воде.
В воздухе находится в виде
аэрозоля.
Является малоопасным веществом,
обладает умеренным кумулятивным и слабым раздражающим действием.
ПДК в воздухе - 2,0 мг/м3.
Характеристика
метода
Метод основан на реакции
взаимодействия остаточных количеств пероксида водорода (после воздействия
фермента на глюкозу) с молибдатом аммония и последующим фотометрическим
измерением окрашенного продукта реакции при длине волны l = 415 нм. Отбор проб
проводят с концентрированием на фильтр.
Нижний предел измерения в
анализируемом объеме - 0,5 мкг.
Нижний предел измерения в
воздухе - 0,2 мг/м3 (при отборе 2,5 л воздуха).
Диапазон измеряемых концентраций
от 0,2 до 20 мг/м3.
Измерению мешают: неорганические
вещества, содержащие фосфор, а также азид, гидроксиламин, цианистый водород.
Суммарная погрешность измерения
не превышает ± 10 %.
Время выполнения измерения,
включая отбор проб - 50 мин.
Приборы,
аппаратура, посуда
Фотоэлектроколориметр
или спектрофотометр
Весы лабораторные
аналитические
Фильтры «синяя
лента»
Фильтродержатели ТУ
95-72-05-77
Аспирационное
устройство
Пробирки,
вместимостью 15 мл, с пришлифованной пробкой ГОСТ
10515-75
Пипетки,
вместимостью 1, 2 и 5 мл ГОСТ
20292-74
Колбы мерные,
вместимостью 50 и 100 мл ГОСТ
1770-74
Цилиндр
измерительный, вместимостью 10 мл ГОСТ
23932-79
Бюксы ГОСТ
7148-70
Секундомер
Реактивы,
растворы, материалы
Стандартный раствор
глюкозооксидазы. 10 мг каждого стандартного образца препарата с различной
активностью растворяют в 100 мл дистиллированной воды. При отсутствии набора
стандартов глюкозооксидазы различной активности стандартные растворы
соответствующей активности готовят из раствора фермента в 1000 единиц
активности, разводя этот раствор в 200; 40; 20; 10; 5; 2,5; 2,0 раза. Для
анализа берут по 0,1 мл каждого раствора, что соответствует 0,5; 2,5; 5,0; 10;
20; 40 и 50 ед. активности.
Натрий-ацетатный буферный
раствор готовят смешиванием 0,5 мл 1 н уксусной кислоты и 9,5 мл ацетата
натрия - 1 г в 100 мл.
Вода
дистиллированная ГОСТ 6709-72
Глюкоза, 33 %-ный
раствор ГОСТ
6038-51
Кислота серная, 10
н раствор ГОСТ 4204-77
Молибдат аммония,
0,02 М раствор ГОСТ 3765-78
Фильтры «синяя
лента» ТУ
6-09-1678-77
Отбор
проб воздуха
Воздух с объемным расходом 1
л/мин аспирируют через фильтр «синяя лента», закрепленный в фильтродержателе.
Для измерения 1/2 ПДК достаточно отобрать 2,5 л воздуха.
Пробы могут сохраняться в
течение 7 дней в холодильнике.
Подготовка
к измерению
Градуировочные растворы
(устойчивы 2 часа) готовят согласно таблице.
Таблица
Шкала градуировочных растворов
Номер стандарта | Стандартный* раствор глюкозооксидазы, мл | Ацетатный буферный раствор, мл | Раствор глюкозы 33 %-ный, мл | Содержание глюкозооксидазы, мкг |
1 | 0 | 5,0 | 1,0 | 0 |
2 | 0,1 (0,5 ед.) | 4,9 | 1,0 | 0,5 |
3 | 0,1 (2,5 ед.) | 4,9 | 1,0 | 2,5 |
4 | 0,1 (5,0 ед.) | 4,9 | 1,0 | 5,0 |
5 | 0,1 (10 ед.) | 4,9 | 1,0 | 10 |
6 | 0,1 (20 ед.) | 4,9 | 1,0 | 20 |
7 | 0,1 (40 ед.) | 4,9 | 1,0 | 40 |
8 | 0,1 (50 ед.) | 4,9 | 1,0 | 50 |
* Приготовление стандартных растворов см. разд.
Реактивы, растворы, материалы. |
Для построения градуировочного
графика исходные растворы смешивают и прогревают 1 мин при 30 °С, затем
добавляют 1 мл 33 %-ного раствора глюкозы и инкубируют 3 - 5 мин при 30 °С (рН
5,8). Реакцию останавливают внесением 1,0 мл 10 н серной кислоты, затем
добавляют 1,0 мл 0,02 М раствора молибдата аммония. После каждого добавления
растворы перемешивают. Через 20 мин измеряют оптическую плотность на
фотоэлектроколориметре при длине волны 415 нм. Измерение оптической плотности
растворов проводят в кюветах с толщиной поглощающего слоя 10 мм по отношению к
раствору сравнения не содержащего глюкозооксидазу.
Строят градуировочный график: на
ось ординат наносят значения оптических плотностей градуировочных растворов, на
ось абсцисс - соответствующие им концентрации препарата (в мкг) с известной
активностью.
Проверку градуировочного графика
проводят 1 раз в месяц или в случае использования новой партии реактивов.
Проведение
измерения
Фильтр с отобранной пробой
переносят в бюкс, заливают 5 мл дистиллированной воды и оставляют на 10 мин,
периодически перемешивая. Отжимают фильтр стеклянной палочкой, фильтрат
переносят в пробирку, доводят объем до 5 мл.
Полученный раствор прогревают
при 30 °С в течение 1 мин. Затем добавляют 1 мл 33 %-ного раствора глюкозы и
инкубируют 3 - 5 мин при 30 °С (рН 5,8). Останавливают реакцию внесением 1,0 мл
10 н серной кислоты. Затем добавляют 1,0 мл 0,02 М раствора молибдата аммония.
После каждого добавления реактива следует хорошо перемешать смесь. Через 20 мин
измеряют оптическую плотность полученного анализируемого раствора, по сравнению
с контрольным раствором, которым является вытяжка с чистого фильтра,
обработанная одновременно и аналогично пробе.
Количественное определение
концентрации глюкозооксидазы в анализируемой пробе проводят по предварительно
построенному градуировочному графику.
При определении активности
глюкозооксидазы в присутствии каталазы, последнюю инактивируют. Для этого к 4,5
см3 испытуемого комплексного ферментного раствора, содержащего не
более 50 ед/см3 каталазы, прибавляют 0,5 см3 1 н раствора муравьиной
кислоты (в конечной концентрации 0,1 н) и определяют активность глюкозооксидазы
описанным выше методом.
Расчет
концентрации
Концентрацию вещества (С)
в воздухе (мг/м3) вычисляют по формуле:
Администратор
04.10.2013
