Утв. и введен в действие приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 22 сентября 2011 г. N 334-ст
Национальный стандарт РФ ГОСТ Р 54414-2011
"РЫБА И ПРОДУКЦИЯ ИЗ НЕЕ. ВИДОВАЯ ИДЕНТИФИКАЦИЯ РЫБЫ МЕТОДОМ ЭЛЕКТРОФОРЕЗА С ДОДЕЦИЛСУЛЬФАТОМ НАТРИЯ В ПОЛИАКРИЛАМИДНОМ ГЕЛЕ"
Fish and products from it. Species identification of fish by electrophoresis with sodium dodecyl sulphate in polyacrylamide gel method
ОКС 67.120.30
Н29
ОКСТУ 9209
Дата введения - 1 января 2013 г.
Введен впервые
Предисловие
Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ "О техническом регулировании", а правила применения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004 "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения"
Сведения о стандарте
1 Разработан Открытым акционерным обществом "Научно-исследовательский и проектно-конструкторский институт по развитию и эксплуатации флота" (ОАО "Гипрорыбфлот")
2 Внесен Техническим комитетом по стандартизации ТК 299 "Консервы и пресервы из рыбы и нерыбных объектов, тара, методы контроля"
3 Утвержден и введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 22 сентября 2011 г. N 334-ст
4 Введен впервые
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на отварную, копченую, соленую продукцию с массовой долей поваренной соли не более 5, 5% и фаршевые изделия из рыбы, а также рыбу-сырец, охлажденную, мороженую, используемую для приготовления этой продукции, и устанавливает метод электрофореза с додецилсульфатом натрия в полиакриламидном геле (далее - SDS-электрофорез) для видовой идентификации рыбы.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ Р 51652-2000 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия
ГОСТ Р 52840-2007 Рыба и продукция из нее. Видовая идентификация рыбы методом изоэлектрофокусирования в полиакриламидном геле.
ГОСТ Р 53228-2008 Весы неавтоматического действия. Часть первая. Метрологические и технические требования.
ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования
ГОСТ 12.1.005-88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны
ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности
ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты
ГОСТ 12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание
ГОСТ 12.4.021-75 Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие требования
ГОСТ 83-79 Реактивы. Натрий углекислый. Технические условия
ГОСТ 244-76 Натрия тиосульфат кристаллический. Технические условия
ГОСТ 1277-75 Реактивы. Серебро азотнокислое. Технические условия
ГОСТ 1625-89 Формалин технический. Технические условия
ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 6259-75 Реактивы. Глицерин. Технические условия
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 9147-80 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия
ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия
ГОСТ 19814-74 Кислота уксусная синтетическая и регенерированная. Технические условия
ГОСТ 26678-85 Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия
ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования
ГОСТ 31339-2006 Рыба, нерыбные объекты и продукция из них. Правила приемки и методы отбора проб
Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Термины и определения
В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:
3.1 SDS-электрофорез: Метод электрофоретического разделения белков в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия.
|
3.2 маркерные белки: Основные белки, характерные (видоспецифичные) для каждого вида анализируемого объекта.
[ГОСТ Р 52840-2007, статья 3.2]
|
3.3 стандартные белки: Белки с известной молекулярной массой (ММ).
3.4 референс-образец: Образец продукции, используемый в качестве стандарта при оценке результатов идентификации.
4 Сущность метода
Метод основан на видовой специфичности белков мышечной ткани рыб и заключается в переводе белков исследуемого образца в раствор с помощью додецилсульфата натрия и дальнейшем разделении белковых молекул в соответствии с их молекулярной массой в градиентном полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия. Идентификацию проводят путем сравнения картин электрофоретического распределения белковых фракций анализируемого образца с соответствующим референс-образцом.
5 Требования к оборудованию, материалам и реактивам
Для проведения анализа используют следующее оборудование, материалы и реактивы:
- универсальную модульную автоматизированную систему для разделения белков с использованием готовых гелевых сред в программируемом режиме и автоматической обработкой гелей (фиксация, окрашивание, отмывка), с контролем условий разделения (температуры, параметров тока) со следующими программными параметрами: напряжение от 10 до 2000 В, сила тока от 0, 1 до 50, 0 мА, мощность 7, 0 Вт, температура от 0°С до 70°С или иное электрофоретическое оборудование для разделения белков методом SDS-электрофореза (далее - система);
- центрифугу рефрижераторную с частотой вращения не менее 12000 мин-1;
- рН-метр - милливольтметр лабораторный рН - 673 М;
- пробирки центрифужные вместимостью 10 см3;
- аппликатор с капиллярными отверстиями объемом 1 мкл для внесения образцов в гель;
- микродозатор с переменным объемом дозирования: от 0, 5 до 10, 0 мм3 (шаг - 0, 1 мм3, точность ± (1, 5-5, 0)%, воспроизводимость от 1, 0% до 5, 0%);
- наконечники для микродозаторов (микропипеток) с переменным объемом дозирования жидкостей;
- ступку фарфоровую по ГОСТ 9147;
- штамп для образца с лунками вместимостью не менее 1, 5 мкл;
- весы неавтоматического действия II класса точности с допускаемой погрешностью взвешивания не более ±0, 001 г по ГОСТ Р 53228;
- холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда по ГОСТ 26678;
- колбы стеклянные мерные 2-50-2, 2-100-2 и 2-1000-2 по ГОСТ 1770;
- цилиндры стеклянные мерные лабораторные 1-50-2, 1-100-2 по ГОСТ 1770;
- пипетки стеклянные 1-1-2-5, 1-1-2-10 по ГОСТ 29227;
- полоски буферные из агарозы;
- гели градиентные полиакриламидные с додецилсульфатом натрия, 10%-15%;
- пленку парафиновую;
- бумагу фильтровальную лабораторную по ГОСТ 12026;
- кислоту уксусную по ГОСТ 19814, х.ч, ;
- спирт этиловый ректификованный по ГОСТ Р 51652, х.ч.;
- глицерин по ГОСТ 6259, ч.д.а.;
- 2-меркаптоэтанол, ч.д.а;
- додецилсульфат натрия, х.ч.;
- краситель бромфеноловый синий, ч.д.а;
- краситель кумасси R 250, ч.д.а;
- трис (гидроксиметил) аминометан гидрохлорид, х.ч.;
- трис (гидроксиметил) аминометан, х.ч.;
- воду дистиллированную по ГОСТ 6709;
- альдегид глутаровый с содержанием основного компонента не менее 25%;
- серебро азотнокислое по ГОСТ 1277;
- натрий углекислый 12, 5%-ный;
- натрия тиосульфат кристаллический по ГОСТ 244;
- формальдегид 37%-ный по ГОСТ 1625;
- набор стандартных белков для градуировки с известными молекулярными массами в диапазоне от 14400 до 97000 а.е.м.
Допускается использование других средств измерений и вспомогательного оборудования по метрологическим, техническим характеристикам и качеству не ниже указанных в настоящем стандарте.
Допускается использование других реактивов, в том числе импортных, по качеству и чистоте не ниже вышеуказанных.
6 Отбор проб
Отбор проб проводят по ГОСТ 31339.
7 Приготовление растворов
7.1 Экстрагирующий раствор
В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 2 г додецилсульфата натрия и доводят объем до метки дистиллированной водой.
7.2 Буферный раствор
В мерную колбу вместимостью 50 см3 вносят 5 см3 водного раствора трис-буфера по 7.2.1, добавляют 4 см3 глицерина, 8 см3 10%-ного водного раствора додецилсульфата натрия, 2 см3 2-меркаптоэтанола и 2 см3 0, 1%-ного водного раствора бромфенолового синего.
7.2.1 Приготовление водного раствора трис-буфера: в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 3 см3 раствора трис (гидроксиметил) аминометана молярной концентрацией 0, 5 моль/дм3 и доводят объем до метки водным раствором трис (гидроксиметил) аминометан гидрохлорида молярной концентрацией 0, 5 моль/дм3. Значение рН водного раствора трис-буфера должно составлять 6, 8±0, 01.
7.2.1.1 Приготовление водного раствора трис (гидроксиметил) аминометан гидрохлорида молярной концентрацией 0, 5 моль/дм3: в мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят 78, 5 г трис (гидроксиметил) аминометан гидрохлорида и доводят объем до метки дистиллированной водой.
7.2.1.2 Приготовление водного раствора трис (гидроксиметил) аминометана молярной концентрацией 0, 5 моль/дм3: в мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят 60, 5 трис (гидроксиметил) аминометана и доводят объем до метки дистиллированной водой.
7.2.2 Приготовление 10%-ного водного раствора додецилсульфата натрия: в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 10 г додецилсульфата натрия и доводят объем до метки дистиллированной водой.
7.2.3 Приготовление 0, 1%-ного водного раствора бромфенолового синего: в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 0, 1 г бромфенолового синего и доводят объем до метки дистиллированной водой.
7.3 Растворы для обработки гелей при окрашивании раствором кумасси
7.3.1 Приготовление промывного раствора: в мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят 300 см3 96%-ного этилового спирта, добавляют 600 см3 дистиллированной воды и 100 см3 уксусной кислоты.
7.3.2 Окрашивающий раствор состоит из основного и рабочего.
7.3.2.1 Приготовление основного раствора: в мерную колбу вместимостью 300 см3 помещают 0, 4 г кумасси, добавляют 80 см3 дистиллированной воды и перемешивают в течение 5-10 мин. Добавляют 120 см3 96%-ного этилового спирта и перемешивают еще 2 мин.
7.3.2.2 Приготовление рабочего раствора: в мерной колбе вместимостью не менее 100 см3 смешивают 50 см3 основного раствора с 50 см3 раствора 20%-ной уксусной кислоты.
7.3.2.3 Приготовление раствора 20%-ной уксусной кислоты: 20 см3 уксусной кислоты растворяют в дистиллированной воде в мерной колбе вместимостью 100 см3 и доводят до метки.
7.3.3 Приготовление консервирующего раствора: в мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят 40 см3 глицерина, 40 см3 уксусной кислоты и доводят объем до метки дистиллированной водой.
7.4 Растворы для обработки гелей при окрашивании серебром
7.4.1 Приготовление промывного раствора: в мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят 100 см3 96%-ного этилового спирта, добавляют 850 см3 дистиллированной воды и 50 см3 уксусной кислоты.
7.4.2 Приготовление окрашивающего раствора: в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят (0, 15±0, 001) г азотнокислого серебра и доводят объем дистиллированной водой до метки.
7.4.3 Приготовление раствора, усиливающего окраску: в мерной колбе вместимостью 100 см3 смешивают 30 см3 25%-ного глутарового альдегида и 60 см3 дистиллированной воды.
7.4.4 Приготовление раствора, развивающего окраску: в мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят 200 см3 12, 5%-ного раствора углекислого натрия, 800 см3 дистиллированной воды и 0, 4 см3 37%-ного формальдегида.
7.4.5 Приготовление раствора, останавливающего окраску: в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят (1, 60±0, 01) г тиосульфата натрия и (3, 70±0, 01) г трис (гидроксиметил) аминометан гидрохлорида и доводят объем дистиллированной водой до метки.
7.4.6 Приготовление консервирующего раствора: в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 10 см3 глицерина и доводят объем до метки дистиллированной водой.
7.5 Растворы могут храниться в течение месяца при комнатной температуре. Рабочий раствор готовят в день использования.
8 Референс-образцы
В качестве референс-образца для видовой идентификации рыбы, в том числе в составе рыбной продукции, в соответствии с областью применения настоящего стандарта могут быть использованы: соответствующий образец рыбы-сырца (для однокомпонентных продуктов) или образец, приготовленный по технологии аналогичной технологии изготовления анализируемого образца (для одно- и многокомпонентных продуктов).
9 Проведение анализа
9.1 Подготовка образцов к анализу
Пробы анализируемого образца и референс-образца готовят в идентичных условиях.
9.1.1 Мышечную ткань анализируемого образца массой не менее 1 г измельчают в ступке.
9.1.2 Пробу анализируемую образца по 9.1.1 отбирают массой (0, 50±0, 01) г в центрифужные пробирки вместимостью 10 см3 и заливают 2 см3 2%-ного водного раствора додецилсульфата натрия по 7.1, смесь периодически перемешивают в течение 30 мин.
9.1.3 Смесь, полученную по 9.1.2, центрифугируют при частоте вращения 12000 мин-1 при температуре 20°С в течение 15 мин.
9.1.4 Надосадочную жидкость, полученную по 9.1.3, фильтруют через бумажный фильтр и отбирают в стеклянные пробирки вместимостью 10 см3 по 0, 25 см3 фильтрата.
9.1.5 К раствору, полученному по 9.1.4, добавляют 1, 5 см3 буферного раствора, приготовленного по 7.2, и нагревают на кипящей водяной бане в течение 5 мин. Полученный раствор охлаждают до комнатной температуры, при необходимости фильтруют и используют для проведения электрофореза.
9.2 Приготовление раствора стандартных белков
9.2.1 Набор стандартных белков для градуировки с известной молекулярной массой растворяют в 1, 5 см3 буферного раствора, приготовленного по 7.2, и нагревают на кипящей водяной бане в течение 5 мин. Полученный раствор охлаждают до комнатной температуры и используют для проведения электрофореза.
9.2.1.1 Для видовой идентификации рыбы методом SDS-электрофореза используется набор стандартных белков для градуировки с молекулярной массой от 14400 до 97000 а.е.м. промышленного производства в виде сухой замороженной смеси.
9.2.1.2 Для автоматизированной разделительной системы используется набор белков с общей массой 100 мкг:
- фосфорилаза Б с молекулярной массой 97000 а.е.м.;
- альбумин с молекулярной массой 66000 а.е.м.;
- овальбумин с молекулярной массой 45000 а.е.м.;
- карбоангидраза с молекулярной массой 30000 а.е.м.;
- ингибитор трипсина с молекулярной массой 20100 а.е.м.;
- альфа-лактальбумин с молекулярной массой 14400 а.е.м.
9.3 Проведение SDS-электрофореза
9.3.1 Полиакриламидный гель помещают в систему в соответствии с инструкцией по эксплуатации.
9.3.2 Вставляют буферные полоски в отделения держателя буферных полосок: одну - в отделение катода и одну - в отделение анода.
9.3.3 Электроды устанавливают в верхнем положении.
9.3.4 Формируют лунки в парафиновой пленке с помощью штампа: штамп с лунками, обращенными вверх, кладут на стол, накрывают парафиновой пленкой защитным слоем вверх (по направлению линий отверстий), в парафиновой пленке, двигаясь вдоль линии лунок, делают углубления при помощи стеклянной палочки, а затем снимают защитный слой.
9.3.5 Растворы, т.е. раствор анализируемого образца и аналогично приготовленный раствор референс-образца, полученные по 9.1.5, а также раствор стандартных белков для градуировки с известной молекулярной массой, приготовленный по 9.2, вносят микродозатором в каждую лунку 1, 5 мкл.
9.3.6 Аппликатор опускают на поверхность растворов (стандартных белков для градуировки, анализируемого образца и референс-образцов), помещенных в лунки по 9.3.5, сформированные в парафиновой пленке с помощью штампа по 9.3.4, нарушая поверхность капель для заполнения капилляров.
9.3.7 Аппликатор, наполненный образцами по 9.3.6, помещают в систему со стороны катода и проводят электрофорез в автоматическом режиме в соответствии с инструкцией к системе.
Условия разделения: напряжение 220 В, ток 10 мА, мощность 2, 5 Вт, температура 15°С. Когда разделение закончено, гель вынимают и переносят в камеру окрашивания. Окончанием разделения служит звуковой сигнал, подаваемый системой.
9.4 Проведение окрашивания
Полиакриламидные гели окрашивают в автоматическом режиме с применением кумасси в соответствии с таблицей 1 или азотнокислого серебра в соответствии с таблицей 2.
Таблица 1 - Программа окрашивания полиакриламидных гелей с помощью раствора кумасси
|
Номер этапа
|
Наименование раствора
|
Время, мин
|
Температура, °С
|
|
1
|
Окрашивающий
|
8
|
50
|
|
2
|
Промывной
|
5
|
|
3
|
Промывной
|
8
|
|
4
|
Промывной
|
10
|
|
5
|
Консервирующий
|
5
|
Таблица 2 - Программа окрашивания полиакриламидных гелей с помощью раствора азотнокислого серебра
|
Номер этапа
|
Наименование
|
Время, мин
|
Температура, °С
|
|
1
|
Промывной раствор
|
2, 0
|
50
|
|
2
|
Промывной раствор
|
4, 0
|
|
3
|
Усиливающий окраску раствор
|
6, 0
|
|
4
|
Промывной раствор
|
3, 0
|
|
5
|
Промывной раствор
|
5, 0
|
|
6
|
Дистиллированная вода
|
2, 0
|
|
7
|
Дистиллированная вода
|
2, 0
|
|
8
|
Окрашивающий раствор
|
13
|
40
|
|
9
|
Дистиллированная вода
|
0, 5
|
30
|
|
10
|
Дистиллированная вода
|
0, 5
|
|
11
|
Развивающий окраску раствор
|
0, 5
|
|
12
|
Развивающий окраску раствор
|
4, 0
|
|
13
|
Останавливающий окраску раствор
|
2, 0
|
50
|
|
14
|
Консервирующий раствор
|
5, 0
|
Процесс окрашивания занимает от 30 до 50 мин. Затем полиакриламидные гели вынимают из системы и высушивают при температуре от 20°С до 25°С в течение 4 ч.
10 Обработка результатов анализа
10.1 Полученную картину электрофоретического распределения белковых фракций анализируемой пробы сравнивают с картиной распределения белковых фракций референс-образца.
10.2 Строят графическую зависимость значений молекулярных масс стандартных белков от расстояния каждой белковой фракции до катода.
10.3 Измеряют расстояние от катода до локализации белков анализируемого образца и референс-образца и с помощью калибровочного графика, построенного по 10.2, находят соответствующие значения молекулярных масс белков. Графическое построение и определение молекулярных масс может осуществляться или с помощью компьютерной программы после переноса изображения распределения белковых фракций с полиакриламидного геля на монитор компьютера с использованием систем видеодокументирования, или ручным способом путем измерений расстояний с помощью линейки от катода до каждой белковой фракции.
10.4 Совпадение картин распределения белковых фракций и совпадение значений молекулярных масс маркерных белков анализируемого образца и референс-образцов свидетельствует об их идентичности и подтверждает правильность заявленного наименования анализируемого образца. Примеры результатов анализа и их компьютерной обработки для разных видов анализируемых объектов приведены в приложениях А и Б.
10.5 Для подтверждения результатов идентификации проводят параллельное разделение белков как из одной пробы, так и из идентичных проб, полученных из двух-трех образцов анализируемого объекта.
10.6 Результаты анализа оформляют в виде протокола. Образец протокола приведен в приложении В.
11 Условия проведения измерений
При выполнении измерений в лаборатории должны быть соблюдены следующие условия:
- температура окружающего воздуха (22±5)°С;
- атмосферное давление от 84, 0 до 106, 7 кПа;
- влажность воздуха не более 80% при 25°С;
- напряжение в сети (220±10) В;
- частота переменного тока в сети питания (50±1) Гц.
12 Требования безопасности
12.1 При выполнении работ с химическими реактивами необходимо соблюдать требования техники безопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.007.
12.2 Помещение, в котором проводятся работы, должно быть оборудовано общей приточно-вытяжной вентиляцией по ГОСТ 12.4.021. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать норм, установленных ГОСТ 12.1.005.
12.3 При работе с электроустановками электробезопасность должна соответствовать требованиям ГОСТ 12.1.019. Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности ГОСТ 12.1.004 и быть оснащено средствами пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.
Приложение А
(рекомендуемое)
Результаты проведения анализа и компьютерной обработки полученных данных при определении вида рыбы в образце рыбных палочек
А.1 Пример картины распределения белковых фракций на электрофореграмме приведен на рисунке А.1 (разделение и окрашивание белков на геле было проведено на системе PhastSystem, перенос изображения на компьютер и обработка данных были проведены с помощью системы видеодокументирования ImageMaster VDS и компьютерной программы ImageMaster 1D).
Рисунок А.1
А.2 График, полученный в результате компьютерной обработки электрофореграммы набора стандартных белков для градиентного геля 10%-15%, приведен на рисунке А.2.
Рисунок А.2
А.3 Пример компьютерной обработки электрофореграмм при анализе значений молекулярных масс белков анализируемого образца и референс-образцов приведен в таблице А.1.
Таблица А.1 - Молекулярная масса ММ маркерных белков анализируемого образца и референс-образцов
В а.е.м.
|
Молекулярная масса анализируемого образца
|
Молекулярная масса референс-образцов рыбных палочек
|
|
1-я проба
|
2-я проба
|
Среднее значение ММ
|
из налима
|
из камбалы
|
из путассу
|
|
247, 5
|
247, 3
|
247, 4±0, 01
|
643, 3
|
239, 0
|
249, 8
|
|
141, 1
|
141, 1
|
141, 1
|
149, 4
|
138, 1
|
141, 1
|
|
82, 6
|
82, 8
|
82, 7±0, 01
|
87, 1
|
90, 4
|
86, 4
|
|
50, 0
|
49, 5
|
49, 7±0, 03
|
48, 7
|
55, 1
|
49, 7
|
|
39, 9
|
39, 9
|
39, 9
|
40, 9
|
47, 0
|
39, 9
|
|
33, 5
|
33, 9
|
33, 7±0, 02
|
34, 0
|
34, 2
|
33, 7
|
|
27, 9
|
27, 6
|
27, 7±0, 02
|
28, 2
|
28, 9
|
27, 9
|
|
22, 5
|
22, 9
|
22, 7±0, 02
|
23, 25
|
25, 1
|
22, 1
|
|
19, 4
|
19, 4
|
19, 4
|
-
|
23, 1
|
19, 3
|
|
17, 0
|
17, 2
|
17, 1±0, 01
|
16, 0
|
14, 5
|
17, 2
|
А.4 Обобщение результатов анализа для определения вида рыбы в анализируемом образце рыбных палочек - по рисункам А.1, А.2 и таблице А.1.
А.4.1 В результате SDS-электрофореза выделенных белков мышечной ткани референс-образцов из разных видов рыб получены отличающиеся друг от друга картины распределения белковых фракций.
А.4.2 У анализируемого образца распределение маркерных белков и значения молекулярных масс совпадают с локализацией основных белков референс-образца из путассу и их значениями ММ. Таким образом, можно сделать вывод, что анализируемый образец рыбных палочек приготовлен из путассу.
Приложение Б
(рекомендуемое)
Результаты проведения анализа и компьютерной обработки полученных данных при определении вида рыбы в анализируемом образце
Б.1 Пример картины распределения белковых фракций на электрофореграмме приведен на рисунке Б.1 (разделение и окрашивание белков на геле было проведено на системе PhastSystem, перенос изображения на компьютер и обработка были проведены с помощью системы видеодокументирования ImageMaster VDS и компьютерной программы ImageMaster).
Рисунок Б.1
Б.2 График, полученный в результате компьютерной обработки электрофореграммы набора стандартных белков для градиентного геля 10%-15%, приведен на рисунке Б.2.
Рисунок Б.2
Б.3 Пример компьютерной обработки электрофореграмм при анализе значений молекулярных масс белков анализируемого образца и референс-образцов приведен в таблице Б.1.
Таблица Б.1 - Молекулярная масса ММ маркерных белков анализируемого образца и референс-образцов
В а.е.м.
|
Анализируемый образец
|
Референс-образцы
|
|
1-я проба
|
2-я проба
|
Среднее значение ММ
|
из семги
|
из горбуши
|
|
отварной
|
сырца
|
отварной
|
сырца
|
|
-
|
-
|
-
|
-
|
-
|
50, 53
|
51, 60
|
|
41, 39
|
41, 29
|
41, 34
|
41, 54
|
41, 83
|
44, 08
|
44, 39
|
|
38, 08
|
38, 00
|
38, 04
|
37, 29
|
38, 03
|
36, 14
|
36, 68
|
|
34, 67
|
34, 70
|
34, 69
|
33, 96
|
34, 67
|
-
|
-
|
|
22, 07
|
22, 20
|
22, 14
|
22, 07
|
22, 29
|
24, 93
|
25, 19
|
|
-
|
-
|
-
|
-
|
-
|
13, 43
|
13, 69
|
Б.4 Обобщение результатов анализа для определения вида анализируемого образца - по рисункам Б.1, Б.2 и таблице Б.1.
Б.4.1 В результате SDS-электрофореза выделенных белков мышечной ткани референс-образцов из двух видов рыб видно, что у горбуши (так же, как и у семги) локализация маркерных белков и значение их молекулярных масс для рыбы-сырца и отварного образца совпадают.
Б.4.2 У анализируемого образца распределение маркерных белков и значения их молекулярных масс полностью совпадают с локализацией основных белков и значениями их молекулярных масс референс-образцов из горбуши-сырца и в отварном виде. Таким образом, можно сделать вывод, что анализируемый образец отварной рыбы приготовлен из горбуши.
В качестве референс-образца могут быть использованы как рыба-сырец, так и отварная рыба.
Приложение В
(рекомендуемое)
Форма протокола испытаний
Наименование организации (испытательной лаборатории)
Протокол испытаний
N _____ от "__" _________ 20__ г.
Даты: поступления на испытание: "__" ________ 20__ г.
конца испытаний: "__" ________ 20__ г.
Продукция __________________________________________________________
Производитель сырья или продукции __________________________________
Предъявитель сырья или продукции ___________________________________
Отбор образцов проведен ____________________________________________
Акт отбора образцов и техническое задание на испытания N ___ от "__"
___________ 20__ г.
Испытания проведены на основании требований ________________________
Номер образца ______________________________________________________
Характеристика анализируемого образца (вид и состояние упаковки,
этикетки, штриховка) ____________________________________________________
Маркировка _________________________________________________________
Годен до ________________________ Штриховой код ____________________
Результаты анализа: установлено, что _______________________________
наименование анализируемого
образца продукции
_______________________ идентичен/неидентичен ___________________________
наименование вида
Исполнители:
________________________________________ ______________________________
инициалы, фамилия подпись
________________________________________ ______________________________
инициалы, фамилия подпись
Руководитель испытательной лаборатории
________________________________________ ______________________________
инициалы, фамилия подпись
МП
Заключение распространяется на образец, представленный на испытания.
— Все документы — ГОСТы — ГОСТ Р 54414-2011 РЫБА И ПРОДУКЦИЯ ИЗ НЕЕ. ВИДОВАЯ ИДЕНТИФИКАЦИЯ РЫБЫ МЕТОДОМ ЭЛЕКТРОФОРЕЗА С ДОДЕЦИЛСУЛЬФАТОМ НАТРИЯ В ПОЛИАКРИЛАМИДНОМ ГЕЛЕ
Правительство России дополнительно выделило десятки миллиардов рублей на ипотеку
Группа депутатов от ЛДПР, а также несколько сенаторов предложили отменить налог с продажи одного вида жилья — объектов, полученных в наследство
Ожидание россиян в очереди на жилье может сократиться
На рынке аренды недвижимости в Сочи и на других российских курортах выросло число мошенников
Банки обяжут раскрывать полную стоимость ипотеки, включая страховку