— Все документы — ГОСТы — ГОСТ Р 54414-2011 РЫБА И ПРОДУКЦИЯ ИЗ НЕЕ. ВИДОВАЯ ИДЕНТИФИКАЦИЯ РЫБЫ МЕТОДОМ ЭЛЕКТРОФОРЕЗА С ДОДЕЦИЛСУЛЬФАТОМ НАТРИЯ В ПОЛИАКРИЛАМИДНОМ ГЕЛЕ


ГОСТ Р 54414-2011 РЫБА И ПРОДУКЦИЯ ИЗ НЕЕ. ВИДОВАЯ ИДЕНТИФИКАЦИЯ РЫБЫ МЕТОДОМ ЭЛЕКТРОФОРЕЗА С ДОДЕЦИЛСУЛЬФАТОМ НАТРИЯ В ПОЛИАКРИЛАМИДНОМ ГЕЛЕ

ГОСТ Р 54414-2011 РЫБА И ПРОДУКЦИЯ ИЗ НЕЕ. ВИДОВАЯ ИДЕНТИФИКАЦИЯ РЫБЫ МЕТОДОМ ЭЛЕКТРОФОРЕЗА С ДОДЕЦИЛСУЛЬФАТОМ НАТРИЯ В ПОЛИАКРИЛАМИДНОМ ГЕЛЕ

Утв. и введен в действие приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 22 сентября 2011 г. N 334-ст
Национальный стандарт РФ ГОСТ Р 54414-2011
"РЫБА И ПРОДУКЦИЯ ИЗ НЕЕ. ВИДОВАЯ ИДЕНТИФИКАЦИЯ РЫБЫ МЕТОДОМ ЭЛЕКТРОФОРЕЗА С ДОДЕЦИЛСУЛЬФАТОМ НАТРИЯ В ПОЛИАКРИЛАМИДНОМ ГЕЛЕ"

Fish and products from it. Species identification of fish by electrophoresis with sodium dodecyl sulphate in polyacrylamide gel method

ОКС 67.120.30
Н29
ОКСТУ 9209

Дата введения - 1 января 2013 г.
Введен впервые

Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ "О техническом регулировании", а правила применения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004 "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения"

Сведения о стандарте

1 Разработан Открытым акционерным обществом "Научно-исследовательский и проектно-конструкторский институт по развитию и эксплуатации флота" (ОАО "Гипрорыбфлот")

2 Внесен Техническим комитетом по стандартизации ТК 299 "Консервы и пресервы из рыбы и нерыбных объектов, тара, методы контроля"

3 Утвержден и введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 22 сентября 2011 г. N 334-ст

4 Введен впервые

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на отварную, копченую, соленую продукцию с массовой долей поваренной соли не более 5, 5% и фаршевые изделия из рыбы, а также рыбу-сырец, охлажденную, мороженую, используемую для приготовления этой продукции, и устанавливает метод электрофореза с додецилсульфатом натрия в полиакриламидном геле (далее - SDS-электрофорез) для видовой идентификации рыбы.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р 51652-2000 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия

ГОСТ Р 52840-2007 Рыба и продукция из нее. Видовая идентификация рыбы методом изоэлектрофокусирования в полиакриламидном геле.

ГОСТ Р 53228-2008 Весы неавтоматического действия. Часть первая. Метрологические и технические требования.

ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.005-88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ 12.4.021-75 Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие требования

ГОСТ 83-79 Реактивы. Натрий углекислый. Технические условия

ГОСТ 244-76 Натрия тиосульфат кристаллический. Технические условия

ГОСТ 1277-75 Реактивы. Серебро азотнокислое. Технические условия

ГОСТ 1625-89 Формалин технический. Технические условия

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 6259-75 Реактивы. Глицерин. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 9147-80 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия

ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 19814-74 Кислота уксусная синтетическая и регенерированная. Технические условия

ГОСТ 26678-85 Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 31339-2006 Рыба, нерыбные объекты и продукция из них. Правила приемки и методы отбора проб

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

3.1 SDS-электрофорез: Метод электрофоретического разделения белков в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия.

3.2 маркерные белки: Основные белки, характерные (видоспецифичные) для каждого вида анализируемого объекта.

[ГОСТ Р 52840-2007, статья 3.2]

3.3 стандартные белки: Белки с известной молекулярной массой (ММ).

3.4 референс-образец: Образец продукции, используемый в качестве стандарта при оценке результатов идентификации.

4 Сущность метода

Метод основан на видовой специфичности белков мышечной ткани рыб и заключается в переводе белков исследуемого образца в раствор с помощью додецилсульфата натрия и дальнейшем разделении белковых молекул в соответствии с их молекулярной массой в градиентном полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия. Идентификацию проводят путем сравнения картин электрофоретического распределения белковых фракций анализируемого образца с соответствующим референс-образцом.

5 Требования к оборудованию, материалам и реактивам

Для проведения анализа используют следующее оборудование, материалы и реактивы:

- универсальную модульную автоматизированную систему для разделения белков с использованием готовых гелевых сред в программируемом режиме и автоматической обработкой гелей (фиксация, окрашивание, отмывка), с контролем условий разделения (температуры, параметров тока) со следующими программными параметрами: напряжение от 10 до 2000 В, сила тока от 0, 1 до 50, 0 мА, мощность 7, 0 Вт, температура от 0°С до 70°С или иное электрофоретическое оборудование для разделения белков методом SDS-электрофореза (далее - система);

- центрифугу рефрижераторную с частотой вращения не менее 12000 мин-1;

- рН-метр - милливольтметр лабораторный рН - 673 М;

- пробирки центрифужные вместимостью 10 см3;

- аппликатор с капиллярными отверстиями объемом 1 мкл для внесения образцов в гель;

- микродозатор с переменным объемом дозирования: от 0, 5 до 10, 0 мм3 (шаг - 0, 1 мм3, точность ± (1, 5-5, 0)%, воспроизводимость от 1, 0% до 5, 0%);

- наконечники для микродозаторов (микропипеток) с переменным объемом дозирования жидкостей;

- ступку фарфоровую по ГОСТ 9147;

- штамп для образца с лунками вместимостью не менее 1, 5 мкл;

- весы неавтоматического действия II класса точности с допускаемой погрешностью взвешивания не более ±0, 001 г по ГОСТ Р 53228;

- холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда по ГОСТ 26678;

- колбы стеклянные мерные 2-50-2, 2-100-2 и 2-1000-2 по ГОСТ 1770;

- цилиндры стеклянные мерные лабораторные 1-50-2, 1-100-2 по ГОСТ 1770;

- пипетки стеклянные 1-1-2-5, 1-1-2-10 по ГОСТ 29227;

- полоски буферные из агарозы;

- гели градиентные полиакриламидные с додецилсульфатом натрия, 10%-15%;

- пленку парафиновую;

- бумагу фильтровальную лабораторную по ГОСТ 12026;

- кислоту уксусную по ГОСТ 19814, х.ч, ;

- спирт этиловый ректификованный по ГОСТ Р 51652, х.ч.;

- глицерин по ГОСТ 6259, ч.д.а.;

- 2-меркаптоэтанол, ч.д.а;

- додецилсульфат натрия, х.ч.;

- краситель бромфеноловый синий, ч.д.а;

- краситель кумасси R 250, ч.д.а;

- трис (гидроксиметил) аминометан гидрохлорид, х.ч.;

- трис (гидроксиметил) аминометан, х.ч.;

- воду дистиллированную по ГОСТ 6709;

- альдегид глутаровый с содержанием основного компонента не менее 25%;

- серебро азотнокислое по ГОСТ 1277;

- натрий углекислый 12, 5%-ный;

- натрия тиосульфат кристаллический по ГОСТ 244;

- формальдегид 37%-ный по ГОСТ 1625;

- набор стандартных белков для градуировки с известными молекулярными массами в диапазоне от 14400 до 97000 а.е.м.

Допускается использование других средств измерений и вспомогательного оборудования по метрологическим, техническим характеристикам и качеству не ниже указанных в настоящем стандарте.

Допускается использование других реактивов, в том числе импортных, по качеству и чистоте не ниже вышеуказанных.

6 Отбор проб

Отбор проб проводят по ГОСТ 31339.

7 Приготовление растворов

7.1 Экстрагирующий раствор

В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 2 г додецилсульфата натрия и доводят объем до метки дистиллированной водой.

7.2 Буферный раствор

В мерную колбу вместимостью 50 см3 вносят 5 см3 водного раствора трис-буфера по 7.2.1, добавляют 4 см3 глицерина, 8 см3 10%-ного водного раствора додецилсульфата натрия, 2 см3 2-меркаптоэтанола и 2 см3 0, 1%-ного водного раствора бромфенолового синего.

7.2.1 Приготовление водного раствора трис-буфера: в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 3 см3 раствора трис (гидроксиметил) аминометана молярной концентрацией 0, 5 моль/дм3 и доводят объем до метки водным раствором трис (гидроксиметил) аминометан гидрохлорида молярной концентрацией 0, 5 моль/дм3. Значение рН водного раствора трис-буфера должно составлять 6, 8±0, 01.

7.2.1.1 Приготовление водного раствора трис (гидроксиметил) аминометан гидрохлорида молярной концентрацией 0, 5 моль/дм3: в мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят 78, 5 г трис (гидроксиметил) аминометан гидрохлорида и доводят объем до метки дистиллированной водой.

7.2.1.2 Приготовление водного раствора трис (гидроксиметил) аминометана молярной концентрацией 0, 5 моль/дм3: в мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят 60, 5 трис (гидроксиметил) аминометана и доводят объем до метки дистиллированной водой.

7.2.2 Приготовление 10%-ного водного раствора додецилсульфата натрия: в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 10 г додецилсульфата натрия и доводят объем до метки дистиллированной водой.

7.2.3 Приготовление 0, 1%-ного водного раствора бромфенолового синего: в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 0, 1 г бромфенолового синего и доводят объем до метки дистиллированной водой.

7.3 Растворы для обработки гелей при окрашивании раствором кумасси

7.3.1 Приготовление промывного раствора: в мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят 300 см3 96%-ного этилового спирта, добавляют 600 см3 дистиллированной воды и 100 см3 уксусной кислоты.

7.3.2 Окрашивающий раствор состоит из основного и рабочего.

7.3.2.1 Приготовление основного раствора: в мерную колбу вместимостью 300 см3 помещают 0, 4 г кумасси, добавляют 80 см3 дистиллированной воды и перемешивают в течение 5-10 мин. Добавляют 120 см3 96%-ного этилового спирта и перемешивают еще 2 мин.

7.3.2.2 Приготовление рабочего раствора: в мерной колбе вместимостью не менее 100 см3 смешивают 50 см3 основного раствора с 50 см3 раствора 20%-ной уксусной кислоты.

7.3.2.3 Приготовление раствора 20%-ной уксусной кислоты: 20 см3 уксусной кислоты растворяют в дистиллированной воде в мерной колбе вместимостью 100 см3 и доводят до метки.

7.3.3 Приготовление консервирующего раствора: в мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят 40 см3 глицерина, 40 см3 уксусной кислоты и доводят объем до метки дистиллированной водой.

7.4 Растворы для обработки гелей при окрашивании серебром

7.4.1 Приготовление промывного раствора: в мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят 100 см3 96%-ного этилового спирта, добавляют 850 см3 дистиллированной воды и 50 см3 уксусной кислоты.

7.4.2 Приготовление окрашивающего раствора: в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят (0, 15±0, 001) г азотнокислого серебра и доводят объем дистиллированной водой до метки.

7.4.3 Приготовление раствора, усиливающего окраску: в мерной колбе вместимостью 100 см3 смешивают 30 см3 25%-ного глутарового альдегида и 60 см3 дистиллированной воды.

7.4.4 Приготовление раствора, развивающего окраску: в мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят 200 см3 12, 5%-ного раствора углекислого натрия, 800 см3 дистиллированной воды и 0, 4 см3 37%-ного формальдегида.

7.4.5 Приготовление раствора, останавливающего окраску: в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят (1, 60±0, 01) г тиосульфата натрия и (3, 70±0, 01) г трис (гидроксиметил) аминометан гидрохлорида и доводят объем дистиллированной водой до метки.

7.4.6 Приготовление консервирующего раствора: в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 10 см3 глицерина и доводят объем до метки дистиллированной водой.

7.5 Растворы могут храниться в течение месяца при комнатной температуре. Рабочий раствор готовят в день использования.

8 Референс-образцы

В качестве референс-образца для видовой идентификации рыбы, в том числе в составе рыбной продукции, в соответствии с областью применения настоящего стандарта могут быть использованы: соответствующий образец рыбы-сырца (для однокомпонентных продуктов) или образец, приготовленный по технологии аналогичной технологии изготовления анализируемого образца (для одно- и многокомпонентных продуктов).

9 Проведение анализа

9.1 Подготовка образцов к анализу

Пробы анализируемого образца и референс-образца готовят в идентичных условиях.

9.1.1 Мышечную ткань анализируемого образца массой не менее 1 г измельчают в ступке.

9.1.2 Пробу анализируемую образца по 9.1.1 отбирают массой (0, 50±0, 01) г в центрифужные пробирки вместимостью 10 см3 и заливают 2 см3 2%-ного водного раствора додецилсульфата натрия по 7.1, смесь периодически перемешивают в течение 30 мин.

9.1.3 Смесь, полученную по 9.1.2, центрифугируют при частоте вращения 12000 мин-1 при температуре 20°С в течение 15 мин.

9.1.4 Надосадочную жидкость, полученную по 9.1.3, фильтруют через бумажный фильтр и отбирают в стеклянные пробирки вместимостью 10 см3 по 0, 25 см3 фильтрата.

9.1.5 К раствору, полученному по 9.1.4, добавляют 1, 5 см3 буферного раствора, приготовленного по 7.2, и нагревают на кипящей водяной бане в течение 5 мин. Полученный раствор охлаждают до комнатной температуры, при необходимости фильтруют и используют для проведения электрофореза.

9.2 Приготовление раствора стандартных белков

9.2.1 Набор стандартных белков для градуировки с известной молекулярной массой растворяют в 1, 5 см3 буферного раствора, приготовленного по 7.2, и нагревают на кипящей водяной бане в течение 5 мин. Полученный раствор охлаждают до комнатной температуры и используют для проведения электрофореза.

9.2.1.1 Для видовой идентификации рыбы методом SDS-электрофореза используется набор стандартных белков для градуировки с молекулярной массой от 14400 до 97000 а.е.м. промышленного производства в виде сухой замороженной смеси.

9.2.1.2 Для автоматизированной разделительной системы используется набор белков с общей массой 100 мкг:

- фосфорилаза Б с молекулярной массой 97000 а.е.м.;

- альбумин с молекулярной массой 66000 а.е.м.;

- овальбумин с молекулярной массой 45000 а.е.м.;

- карбоангидраза с молекулярной массой 30000 а.е.м.;

- ингибитор трипсина с молекулярной массой 20100 а.е.м.;

- альфа-лактальбумин с молекулярной массой 14400 а.е.м.

9.3 Проведение SDS-электрофореза

9.3.1 Полиакриламидный гель помещают в систему в соответствии с инструкцией по эксплуатации.

9.3.2 Вставляют буферные полоски в отделения держателя буферных полосок: одну - в отделение катода и одну - в отделение анода.

9.3.3 Электроды устанавливают в верхнем положении.

9.3.4 Формируют лунки в парафиновой пленке с помощью штампа: штамп с лунками, обращенными вверх, кладут на стол, накрывают парафиновой пленкой защитным слоем вверх (по направлению линий отверстий), в парафиновой пленке, двигаясь вдоль линии лунок, делают углубления при помощи стеклянной палочки, а затем снимают защитный слой.

9.3.5 Растворы, т.е. раствор анализируемого образца и аналогично приготовленный раствор референс-образца, полученные по 9.1.5, а также раствор стандартных белков для градуировки с известной молекулярной массой, приготовленный по 9.2, вносят микродозатором в каждую лунку 1, 5 мкл.

9.3.6 Аппликатор опускают на поверхность растворов (стандартных белков для градуировки, анализируемого образца и референс-образцов), помещенных в лунки по 9.3.5, сформированные в парафиновой пленке с помощью штампа по 9.3.4, нарушая поверхность капель для заполнения капилляров.

9.3.7 Аппликатор, наполненный образцами по 9.3.6, помещают в систему со стороны катода и проводят электрофорез в автоматическом режиме в соответствии с инструкцией к системе.

Условия разделения: напряжение 220 В, ток 10 мА, мощность 2, 5 Вт, температура 15°С. Когда разделение закончено, гель вынимают и переносят в камеру окрашивания. Окончанием разделения служит звуковой сигнал, подаваемый системой.

9.4 Проведение окрашивания

Полиакриламидные гели окрашивают в автоматическом режиме с применением кумасси в соответствии с таблицей 1 или азотнокислого серебра в соответствии с таблицей 2.

Таблица 1 - Программа окрашивания полиакриламидных гелей с помощью раствора кумасси

Номер этапа

Наименование раствора

Время, мин

Температура, °С

1

Окрашивающий

8

50

2

Промывной

5

3

Промывной

8

4

Промывной

10

5

Консервирующий

5

Таблица 2 - Программа окрашивания полиакриламидных гелей с помощью раствора азотнокислого серебра

Номер этапа

Наименование

Время, мин

Температура, °С

1

Промывной раствор

2, 0

50

2

Промывной раствор

4, 0

3

Усиливающий окраску раствор

6, 0

4

Промывной раствор

3, 0

5

Промывной раствор

5, 0

6

Дистиллированная вода

2, 0

7

Дистиллированная вода

2, 0

8

Окрашивающий раствор

13

40

9

Дистиллированная вода

0, 5

30

10

Дистиллированная вода

0, 5

11

Развивающий окраску раствор

0, 5

12

Развивающий окраску раствор

4, 0

13

Останавливающий окраску раствор

2, 0

50

14

Консервирующий раствор

5, 0

Процесс окрашивания занимает от 30 до 50 мин. Затем полиакриламидные гели вынимают из системы и высушивают при температуре от 20°С до 25°С в течение 4 ч.

10 Обработка результатов анализа

10.1 Полученную картину электрофоретического распределения белковых фракций анализируемой пробы сравнивают с картиной распределения белковых фракций референс-образца.

10.2 Строят графическую зависимость значений молекулярных масс стандартных белков от расстояния каждой белковой фракции до катода.

10.3 Измеряют расстояние от катода до локализации белков анализируемого образца и референс-образца и с помощью калибровочного графика, построенного по 10.2, находят соответствующие значения молекулярных масс белков. Графическое построение и определение молекулярных масс может осуществляться или с помощью компьютерной программы после переноса изображения распределения белковых фракций с полиакриламидного геля на монитор компьютера с использованием систем видеодокументирования, или ручным способом путем измерений расстояний с помощью линейки от катода до каждой белковой фракции.

10.4 Совпадение картин распределения белковых фракций и совпадение значений молекулярных масс маркерных белков анализируемого образца и референс-образцов свидетельствует об их идентичности и подтверждает правильность заявленного наименования анализируемого образца. Примеры результатов анализа и их компьютерной обработки для разных видов анализируемых объектов приведены в приложениях А и Б.

10.5 Для подтверждения результатов идентификации проводят параллельное разделение белков как из одной пробы, так и из идентичных проб, полученных из двух-трех образцов анализируемого объекта.

10.6 Результаты анализа оформляют в виде протокола. Образец протокола приведен в приложении В.

11 Условия проведения измерений

При выполнении измерений в лаборатории должны быть соблюдены следующие условия:

- температура окружающего воздуха (22±5)°С;

- атмосферное давление от 84, 0 до 106, 7 кПа;

- влажность воздуха не более 80% при 25°С;

- напряжение в сети (220±10) В;

- частота переменного тока в сети питания (50±1) Гц.

12 Требования безопасности

12.1 При выполнении работ с химическими реактивами необходимо соблюдать требования техники безопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.007.

12.2 Помещение, в котором проводятся работы, должно быть оборудовано общей приточно-вытяжной вентиляцией по ГОСТ 12.4.021. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать норм, установленных ГОСТ 12.1.005.

12.3 При работе с электроустановками электробезопасность должна соответствовать требованиям ГОСТ 12.1.019. Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности ГОСТ 12.1.004 и быть оснащено средствами пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.

Приложение А
(рекомендуемое)

Результаты проведения анализа и компьютерной обработки полученных данных при определении вида рыбы в образце рыбных палочек

А.1 Пример картины распределения белковых фракций на электрофореграмме приведен на рисунке А.1 (разделение и окрашивание белков на геле было проведено на системе PhastSystem, перенос изображения на компьютер и обработка данных были проведены с помощью системы видеодокументирования ImageMaster VDS и компьютерной программы ImageMaster 1D).

image001.jpg

Рисунок А.1

А.2 График, полученный в результате компьютерной обработки электрофореграммы набора стандартных белков для градиентного геля 10%-15%, приведен на рисунке А.2.

image002.jpg

Рисунок А.2

А.3 Пример компьютерной обработки электрофореграмм при анализе значений молекулярных масс белков анализируемого образца и референс-образцов приведен в таблице А.1.

Таблица А.1 - Молекулярная масса ММ маркерных белков анализируемого образца и референс-образцов

В а.е.м.

Молекулярная масса анализируемого образца

Молекулярная масса референс-образцов рыбных палочек

1-я проба

2-я проба

Среднее значение ММ

из налима

из камбалы

из путассу

247, 5

247, 3

247, 4±0, 01

643, 3

239, 0

249, 8

141, 1

141, 1

141, 1

149, 4

138, 1

141, 1

82, 6

82, 8

82, 7±0, 01

87, 1

90, 4

86, 4

50, 0

49, 5

49, 7±0, 03

48, 7

55, 1

49, 7

39, 9

39, 9

39, 9

40, 9

47, 0

39, 9

33, 5

33, 9

33, 7±0, 02

34, 0

34, 2

33, 7

27, 9

27, 6

27, 7±0, 02

28, 2

28, 9

27, 9

22, 5

22, 9

22, 7±0, 02

23, 25

25, 1

22, 1

19, 4

19, 4

19, 4

-

23, 1

19, 3

17, 0

17, 2

17, 1±0, 01

16, 0

14, 5

17, 2

А.4 Обобщение результатов анализа для определения вида рыбы в анализируемом образце рыбных палочек - по рисункам А.1, А.2 и таблице А.1.

А.4.1 В результате SDS-электрофореза выделенных белков мышечной ткани референс-образцов из разных видов рыб получены отличающиеся друг от друга картины распределения белковых фракций.

А.4.2 У анализируемого образца распределение маркерных белков и значения молекулярных масс совпадают с локализацией основных белков референс-образца из путассу и их значениями ММ. Таким образом, можно сделать вывод, что анализируемый образец рыбных палочек приготовлен из путассу.

Приложение Б
(рекомендуемое)

Результаты проведения анализа и компьютерной обработки полученных данных при определении вида рыбы в анализируемом образце

Б.1 Пример картины распределения белковых фракций на электрофореграмме приведен на рисунке Б.1 (разделение и окрашивание белков на геле было проведено на системе PhastSystem, перенос изображения на компьютер и обработка были проведены с помощью системы видеодокументирования ImageMaster VDS и компьютерной программы ImageMaster).

image003.jpg

Рисунок Б.1

Б.2 График, полученный в результате компьютерной обработки электрофореграммы набора стандартных белков для градиентного геля 10%-15%, приведен на рисунке Б.2.

image004.jpg

Рисунок Б.2

Б.3 Пример компьютерной обработки электрофореграмм при анализе значений молекулярных масс белков анализируемого образца и референс-образцов приведен в таблице Б.1.

Таблица Б.1 - Молекулярная масса ММ маркерных белков анализируемого образца и референс-образцов

В а.е.м.

Анализируемый образец

Референс-образцы

1-я проба

2-я проба

Среднее значение ММ

из семги

из горбуши

отварной

сырца

отварной

сырца

-

-

-

-

-

50, 53

51, 60

41, 39

41, 29

41, 34

41, 54

41, 83

44, 08

44, 39

38, 08

38, 00

38, 04

37, 29

38, 03

36, 14

36, 68

34, 67

34, 70

34, 69

33, 96

34, 67

-

-

22, 07

22, 20

22, 14

22, 07

22, 29

24, 93

25, 19

-

-

-

-

-

13, 43

13, 69

Б.4 Обобщение результатов анализа для определения вида анализируемого образца - по рисункам Б.1, Б.2 и таблице Б.1.

Б.4.1 В результате SDS-электрофореза выделенных белков мышечной ткани референс-образцов из двух видов рыб видно, что у горбуши (так же, как и у семги) локализация маркерных белков и значение их молекулярных масс для рыбы-сырца и отварного образца совпадают.

Б.4.2 У анализируемого образца распределение маркерных белков и значения их молекулярных масс полностью совпадают с локализацией основных белков и значениями их молекулярных масс референс-образцов из горбуши-сырца и в отварном виде. Таким образом, можно сделать вывод, что анализируемый образец отварной рыбы приготовлен из горбуши.

В качестве референс-образца могут быть использованы как рыба-сырец, так и отварная рыба.

Приложение В
(рекомендуемое)

                        Форма протокола испытаний 

          Наименование организации (испытательной лаборатории) 

                           Протокол испытаний 

                    N _____ от "__" _________ 20__ г. 

                    Даты: поступления на испытание: "__" ________ 20__ г.

                                   конца испытаний: "__" ________ 20__ г. 

     Продукция __________________________________________________________

     Производитель сырья или продукции __________________________________

     Предъявитель сырья или продукции ___________________________________

     Отбор образцов проведен ____________________________________________

     Акт отбора образцов и техническое задание на испытания N ___ от "__"

___________ 20__ г.

     Испытания проведены на основании требований ________________________

     Номер образца ______________________________________________________

     Характеристика  анализируемого  образца  (вид  и состояние упаковки,

этикетки, штриховка) ____________________________________________________

     Маркировка _________________________________________________________

     Годен до ________________________ Штриховой код ____________________

     Результаты анализа: установлено, что _______________________________

                                            наименование анализируемого

                                                 образца продукции

_______________________ идентичен/неидентичен ___________________________

                                                  наименование вида 

Исполнители:

________________________________________   ______________________________

           инициалы, фамилия                          подпись

________________________________________   ______________________________

           инициалы, фамилия                          подпись 

Руководитель испытательной лаборатории

________________________________________   ______________________________

           инициалы, фамилия                          подпись

МП 

     Заключение распространяется на образец, представленный на испытания.


Возврат к списку

(Нет голосов)

Комментарии (0)


Чтобы оставить комментарий вам необходимо авторизоваться
Самые популярные документы
Новости
Все новости