— Все документы — ГОСТы — ГОСТ EN 12856-2015 ПРОДУКЦИЯ ПИЩЕВАЯ. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АЦЕСУЛЬФАМА КАЛИЯ, АСПАРТАМА И САХАРИНА МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ


ГОСТ EN 12856-2015 ПРОДУКЦИЯ ПИЩЕВАЯ. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АЦЕСУЛЬФАМА КАЛИЯ, АСПАРТАМА И САХАРИНА МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

ГОСТ EN 12856-2015 ПРОДУКЦИЯ ПИЩЕВАЯ. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АЦЕСУЛЬФАМА КАЛИЯ, АСПАРТАМА И САХАРИНА МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Введен в действие приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 20 мая 2016 г. N 364-ст
Межгосударственный стандарт ГОСТ EN 12856-2015
"ПРОДУКЦИЯ ПИЩЕВАЯ. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АЦЕСУЛЬФАМА КАЛИЯ, АСПАРТАМА И САХАРИНА МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ"

Foodstuffs. Determination of acesulfame-K, aspartame and saccharin by high performance liquid chromatographic method

Дата введения - 1 июля 2017 г.

Введен впервые

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 Подготовлен научно-производственным республиканским унитарным предприятием "Белорусский государственный институт стандартизации и сертификации" (БелГИСС) на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии указанного в пункте 5 стандарта

2 Внесен Государственным комитетом по стандартизации Республики Беларусь

3 Принят Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 27 февраля 2015 г. N 75-П)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97

Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97

Сокращенное наименование национального органа по стандартизации

Армения

AM

Минэкономики Республики Армения

Беларусь

BY

Госстандарт Республики Беларусь

Казахстан

KZ

Госстандарт Республики Казахстан

Киргизия

KG

Кыргызстандарт

Молдова

MD

Молдова-Стандарт

Россия

RU

Росстандарт

Таджикистан

TJ

Таджикстандарт

Узбекистан

UZ

Узстандарт

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 20 мая 2016 г. N 364-ст межгосударственный стандарт ГОСТ EN 12856-2015 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2017 г.

5 Настоящий стандарт идентичен европейскому стандарту EN 12856:1999 "Продукция пищевая. Определение ацесульфама калия, аспартама и сахарина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии" ("Foodstuffs. Determination of acesulfame-K, aspartame and saccharin. High performance liquid chromatographic method", IDT).

Европейский стандарт разработан техническим комитетом CEN/TC 275 "Анализ пищевых продуктов. Горизонтальные методы", Европейского комитета по стандартизации (CEN).

Официальный экземпляр европейского стандарта, на основе которого подготовлен настоящий межгосударственный стандарт, и европейского стандарта, на которые дана ссылка, имеются в Федеральном информационном фонде технических регламентов и стандартов.

Сведения о соответствии ссылочных европейских стандартов ссылочным межгосударственным стандартам приведены в дополнительном приложении ДА

6 Введен впервые

1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод определения ацесульфама калия, аспартама и сахарина в пищевой продукции с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) ([1], [2] и [3]).

Допускается применение настоящего метода при определении в пищевой продукции кофеина, сорбиновой и бензойной кислот, а также других добавок, приведенных в настоящем стандарте.

2 Нормативные ссылки

Для применения настоящего стандарта необходим следующий ссылочный документ. Для недатированных ссылок применяют последнее издание ссылочного документа (включая все его изменения).

EN ISO 3696:1995 Water for analytical laboratory use - Specification and test methods (Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний)

3 Сущность метода

Метод основан на экстрагировании искусственных подсластителей из пробы водой или разбавлении пробы водой, очистке экстракта методом твердофазной экстракции или с помощью реактивов Карреза и последующем количественном определении подсластителей с помощью ВЭЖХ с применением хроматографической колонки с обращенно-фазовым сорбентом и спектрофотометрического детектирования при длине волны 220 нм.

4 Реактивы

Для проведения анализа, если не указано иное, используют только реактивы признанной аналитической чистоты и воду не ниже первой степени чистоты по EN ISO 3696. При приготовлении растворов учитывают массовую долю основного вещества в реактиве.

4.1 Ацетонитрил для ВЭЖХ.

4.2 Метанол для ВЭЖХ.

4.3 Калий фосфорнокислый однозамещенный (KH2PO4).

4.4 Калий фосфорнокислый двухзамещенный (K2HPO4).

4.5 Кислота фосфорная, ρ20 ( H3PO4) = 1, 71 г/см3, w(H3PO4) = 85%*.

4.6 Кислота фосфорная, раствор массовой долей w(H3PO4) = 5%.

Аккуратно переносят пипеткой 6 см3 фосфорной кислоты (4.5) в мерную колбу вместимостью 100 см3, в которую предварительно помещено 80 см3 воды. Объем содержимого в колбе доводят до метки водой.

4.7 Раствор Карреза N 1

Растворяют 15 г гексацианоферрата калия (II) (K4[Fe(CN)6]·3H2O) в некотором количестве воды и разбавляют до объема 100 см3.

4.8 Раствор Карреза N 2

Растворяют 30 г сульфата цинка (ZnSO4·7H2O) в некотором количестве воды и разбавляют до объема 100 см3.

4.9 Фосфатный буферный раствор I, с(KH2PO4) = 0, 02 моль/дм3, рН 4, 3.

Растворяют 2, 72 г однозамещенного фосфорнокислого калия (4.3) в 800 см3 воды в мензурке вместимостью 1000 см3. Значение рН раствора доводят до 4, 3 добавлением раствора фосфорной кислоты (4.6). Переносят раствор в мерную колбу вместимостью 1000 см3, объем содержимого в колбе доводят до метки водой.

4.10 Фосфатный буферный раствор II, с(KH2PO4) = 0, 0125 моль/дм3, рН 3, 5.

Растворяют 1, 70 г однозамещенного фосфорнокислого калия (4.3) в 800 см3 воды в мензурке вместимостью 1000 см3. Значение рН раствора доводят до 3, 5 добавлением раствора фосфорной кислоты (4.6). Переносят раствор в мерную колбу вместимостью 1000 см3, объем содержимого в колбе доводят до метки водой.

4.11 Подвижная фаза (смешанный раствор ацетонитрила и фосфатного буферного раствора)

Смешивают точно отмеренные объемы выбранного фосфатного буферного раствора и ацетонитрила в соотношении, приведенном в приложении А (А.5). Полученный раствор фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0, 45 мкм и дегазируют любым приемлемым способом, например, в течение 5 мин на ультразвуковой бане. Подвижную фазу готовят в день использования.

4.12 Контрольный раствор (на усмотрение пользователей настоящего стандарта)

Контрольный раствор содержит ацесульфам калия, натриевую соль сахарина, аспартам, 5-бензил-3, 6-диоксо-2-пиперазинуксусную кислоту (дикетопиперазин), аспартилфенилаланин, фенилаланин, кофеин, сорбиновую и бензойную кислоты, теобромин, гидроксиметилфурфурол и ванилин.

В мерную колбу вместимостью 100 см3 переносят взвешенные с точностью до 0, 1 мг 30 мг ацесульфама калия, 20 мг натриевой соли сахарина, 220 мг аспартама, 60 мг кофеина, 100 мг сорбиновой кислоты, 100 мг бензойной кислоты, 100 мг ванилина, 10 мг дикетопиперазина, 10 мг фенилаланина, 10 мг аспартилфенилаланина, 20 мг гидроксиметилфурфурола и 70 мг теобромина. Растворяют, объем содержимого в колбе доводят до метки водой.

Пипеткой переносят 20 см3 полученного раствора в мерную колбу вместимостью 100 см3, объем содержимого в колбе доводят до метки водой.

4.13 Основной стандартный раствор

Взвешивают с точностью до 0, 1 мг 100 мг ацесульфама калия, 100 мг натриевой соли сахарина, 100 мг аспартама и переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3. Растворяют, объем содержимого в колбе доводят до метки водой. Массовая концентрация каждого подсластителя в полученном растворе составляет 1 г/дм3.

4.14 Градуировочные растворы (указанный диапазон массовых концентраций носит рекомендательный характер)

4.14.1 Градуировочный раствор I

Пипеткой переносят 10 см3 основного стандартного раствора (4.13) в мерную колбу вместимостью 100 см3, объем содержимого в колбе доводят до метки водой. Массовая концентрация каждого подсластителя в полученном растворе составляет 100 мг/дм3.

4.14.2 Градуировочный раствор II

Пипеткой переносят 5 см3 основного стандартного раствора (4.13) в мерную колбу вместимостью 100 см3, объем содержимого в колбе доводят до метки водой. Массовая концентрация каждого подсластителя в полученном растворе составляет 50 мг/дм3.

4.14.3 Градуировочный раствор III

Пипеткой переносят 1 см3 основного стандартного раствора (4.13) в мерную колбу вместимостью 100 см3, объем содержимого в колбе доводят до метки водой. Массовая концентрация каждого подсластителя в полученном растворе составляет 10 мг/дм3.

5 Вспомогательное оборудование, посуда и материалы

Используют стандартное лабораторное оборудование, в том числе перечисленное ниже.

5.1 Высокоскоростной блендер или гомогенизатор.

5.2 Колбы мерные вместимостью 1000, 500 и 100 см3.

5.3 Мензурка вместимостью 1000 см3.

5.4 Пипетки вместимостью 100, 25, 20, 10, 5 и 1 см3.

5.5 Пипеточный дозатор вместимостью 1000 мм3.

5.6 Градуированный цилиндр вместимостью 1000 см3.

5.7 Складчатая фильтровальная бумага, обеспечивающая среднюю скорость фильтрации.

5.8 Ультразвуковая баня.

5.9 Центрифуга с центрифужными пробирками, подходящей вместимости, обеспечивающая центробежное ускорение в основании центрифужных пробирок не менее 1400g.

5.10 Устройство для дегазации растворителей (на усмотрение пользователей настоящего стандарта).

5.11 Мембранные фильтры с размером пор не более 0, 45 мкм.

5.12 Держатель мембранных фильтров с подходящим шприцем.

5.13 Колонка для твердофазной экстракции, с картриджем RP С 18 (на усмотрение пользователей настоящего стандарта), содержащая 500 мг сорбента.

5.14 Высокоэффективный жидкостный хроматограф, укомплектованный ультрафиолетовым (УФ) детектором (пригодным для работы при длине волны 220 нм, предпочтителен диодно-матричный детектор), самописцем и/или интегратором, позволяющим измерять высоту и площадь пиков.

5.15 Хроматографическая колонка для ВЭЖХ, заполненная обращенно-фазовым сорбентом, с неподвижной фазой RP С 18 с размером частиц 3 - 10 мкм, длиной 100 - 300 мм, внутренним диаметром 3 - 4 мм, с защитной колонкой, заполненной сорбентом RP С 18 (на усмотрение пользователей настоящего стандарта, но обычно рекомендуется при анализе проб твердой консистенции).

Критерием пригодности разделительных колонок для данного вида анализа является разделение пиков аналита и соседних пиков на уровне базовой линии.

Примеры подходящих колонок и подходящие условия хроматографического анализа представлены в приложении А.

Если при использовании диодно-матричного детектора или при измерении на второй длине волны обнаруживают наложение пиков, то следует подобрать другие условия хроматографического анализа.

6 Методика проведения испытания

6.1 Приготовление раствора пробы для анализа

6.1.1 Прозрачная жидкая продукция (например, лимонады, кола, напитки)

Разбавляют 20 см3 пробы в мерной колбе вместимостью 100 см3 водой. Перед хроматографическим анализом фильтруют полученный раствор через мембранный фильтр с размером пор 0, 45 мкм.

6.1.2 Мутная жидкая продукция (например, соки, ароматизированные молочные напитки)

В мерной колбе вместимостью 100 см3 разбавляют 20 см3 гомогенизированной лабораторной пробы 50 см3 воды, добавляют 2 см3 раствора Карреза N 1 (4.7), перемешивают и добавляют 2 см3 раствора Карреза N 2 (4.8). Колбу энергично встряхивают и выдерживают раствор при комнатной температуре в течение 10 мин. Объем содержимого в колбе доводят до метки водой. Полученный раствор фильтруют сначала через складчатую фильтровальную бумагу, отбрасывая первые 10 см3 фильтрата. Перед хроматографическим анализом фильтрат пропускают через мембранный фильтр с размером пор 0, 45 мкм.

Если масса нерастворимого обезжиренного вещества в пробе для анализа (в данном случае, объемом 20 см3) превышает 3 г, следует ввести поправку на объем осадка. Для этого смесь пробы с растворами для осветления рекомендуется центрифугировать в течение 10 мин при центробежном ускорении не менее 1400g. Затем центрифугат количественно фильтруют в мерную колбу вместимостью 100 см3. Осадок дважды промывают водой и снова центрифугируют, собирая каждый раз центрифугаты в мерную колбу вместимостью 100 см3, после чего объем содержимого в колбе доводят до метки водой. Данную процедуру допускается также использовать, если количество нерастворимого вещества в пробе для анализа составляет менее 3 г.

6.1.3 Джемы, варенье, мармелады и аналогичная им продукция (исключая фруктовые кефиры)

Пробу для анализа массой около 20 г, взвешенную с точностью до 1 мг, помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3. Добавляют около 60 см3 воды и помещают колбу в ультразвуковую баню при температуре 40°С на 20 мин. Температура бани не должна превышать 40°С, чтобы не допустить возможное разложение аспартама.

Раствор охлаждают до комнатной температуры, после чего в колбу добавляют 2 см3 раствора Карреза N 1 (4.7), содержимое колбы перемешивают, после чего в колбу добавляют 2 см3 раствора Карреза N 2 (4.8). Колбу энергично встряхивают, после чего раствор выдерживают при комнатной температуре в течение 10 мин. Объем содержимого в колбе доводят до метки водой. Полученный раствор фильтруют через складчатую фильтровальную бумагу, фильтрат пропускают через мембранный фильтр с размером пор 0, 45 мкм.

Если масса нерастворимого обезжиренного вещества в пробе для анализа превышает 3 г, следует ввести поправку на объем осадка. Для этого смесь пробы с растворами для осветления рекомендуется центрифугировать в течение 10 мин при центробежном ускорении не менее 1400g. Затем центрифугат количественно фильтруют в мерную колбу вместимостью 100 см3. Осадок дважды промывают водой и снова центрифугируют, собирая каждый раз центрифугаты в мерную колбу вместимостью 100 см3, после чего объем содержимого в колбе доводят до метки водой. Данную процедуру допускается также использовать, если количество нерастворимого вещества в пробе для анализа составляет менее 3 г.

6.1.4 Продукция твердой и полутвердой консистенции (например, десерты из творожного сыра, йогурты, деликатесные салаты, кроме заварного крема)

Пробу для анализа массой от 10 г до 20 г, взвешенную с точностью до 1 мг, помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3. Добавляют около 50 см3 воды и помещают колбу в ультразвуковую баню при температуре 40°С на 20 мин. Температура бани не должна превышать 40°С, во избежание разложения аспартама.

Полученный раствор охлаждают до комнатной температуры. Добавляют 2 см3 раствора Карреза N 1 (4.7), перемешивают, после чего добавляют 2 см3 раствора Карреза N 2 (4.8). Колбу с раствором пробы энергично встряхивают и выдерживают при комнатной температуре в течение 10 мин. Объем содержимого в колбе доводят до метки водой, после чего раствор фильтруют через складчатую фильтровальную бумагу, отбрасывая первые 10 см3 фильтрата.

В случае проб сложного состава рекомендуется проводить дополнительную очистку с использованием колонки для твердофазной экстракции (5.13) с целью защиты разделительной колонки, поскольку очистка растворами Карреза не позволяет отделить красители, ароматизаторы и жир. В данном случае 2 см3 очищенного фильтрата пропускают через колонку для твердофазной экстракции, предварительно активированную путем последовательного пропускания через нее 3 см3 метанола (4.2) и 20 см3 воды. Далее для элюирования анализируемых компонентов через колонку пропускают около 20 см3 подвижной фазы (4.11). Перед хроматографическим анализом элюат фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0, 45 мкм.

Если масса нерастворимого обезжиренного вещества в пробе для анализа превышает 3 г, следует ввести поправку на объем осадка. Для этого смесь пробы с растворами для осветления рекомендуется центрифугировать в течение 10 мин при центробежном ускорении не менее 1400g. Затем центрифугат количественно фильтруют в мерную колбу вместимостью 100 см3. Осадок дважды промывают водой и снова центрифугируют, собирая каждый раз центрифугаты в мерную колбу вместимостью 100 см3, после чего объем содержимого в колбе доводят до метки водой. Данную процедуру допускается также использовать, если количество нерастворимого вещества в пробе для анализа составляет менее 3 г.

6.1.5 Заварной крем

Пробу для анализа массой около 10 г, взвешенную с точностью до 1 мг, помещают в мерную колбу вместимостью 500 см3. В колбу добавляют около 400 см3 воды и далее действуют по описанной выше процедуре, то есть для очистки раствора пробы в колбу добавляют 6 см3 раствора Карреза N 1 (4.7), содержимое колбы перемешивают, после чего добавляют 6 см3 раствора Карреза N 2 (4.8).

Если масса нерастворимого обезжиренного вещества в пробе для анализа превышает 3 г, следует ввести поправку на объем осадка. Для этого смесь пробы с растворами для осветления рекомендуется центрифугировать в течение 10 мин при центробежном ускорении не менее 1400g. Затем центрифугат количественно фильтруют в мерную колбу вместимостью 100 см3. Осадок дважды промывают водой и снова центрифугируют, собирая каждый раз центрифугаты в мерную колбу вместимостью 100 см3, после чего объем содержимого в колбе доводят до метки водой. Данную процедуру допускается также использовать, если количество нерастворимого вещества в пробе для анализа составляет менее 3 г.

6.2 Идентификация

Интенсивные (искусственные) подсластители в растворе пробы идентифицируют путем сравнения времени удерживания пика аналита на хроматограмме раствора пробы со временем удерживания пика аналита на хроматограмме градуировочного раствора или на хроматограмме, полученной путем одновременной инжекций градуировочного раствора и идентификацию можно также проводить путем сравнения хроматограмм раствора пробы с добавлением и без добавления стандартного раствора аналита методом сопоставления спектров поглощения пиков аналита на этих хроматограммах в характерном для данного вещества диапазоне длин волн.

Проводят хроматографический анализ раствора пробы для анализа и градуировочных растворов при равных объемах инжекций. Интервал между последовательными. Для исключения возможности ошибочного принятия пиков веществ, элюирующихся с предыдущих инжекций, за пики компонентов последующих проб, следует соблюдать достаточно большие интервалы между последовательными инжекциями растворов проб для анализа.

Для предотвращения появления на хроматограмме пиков, затрудняющих идентификацию пика аналита, рекомендуется промывать аналитическую колонку. Для промывания рекомендуется подвижная фаза следующего состава: 50 объемных частей подвижной фазы (4.11) и 50 объемных частей ацетонитрила.

В приложении А в качестве рекомендаций приведены варианты условий хроматографического анализа, обеспечивающих качество хроматографического разделения, необходимое для надежной идентификации анализируемых компонентов.

Примеры хроматограмм приведены для ознакомления в приложении В.

6.3 Количественное определение

При количественном определении по методу внешнего стандарта измеряют площадь или высоту пиков анализируемых веществ на хроматограмме раствора пробы и соотносят их с концентрацией анализируемых веществ в градуировочном растворе с наиболее близкими значениями площади или высоты пиков этих веществ, или используют градуировочный график.

Для построения градуировочного графика проводят хроматографический анализ достаточного числа градуировочных растворов с подходящими концентрациями анализируемых веществ. По результатам этих анализов строят график зависимости высоты или площади пика аналита от его массовой концентрации в градуировочных растворах, выраженной в миллиграммах на кубический дециметр. Проверяют линейность градуировочного графика.

В качестве альтернативы градуировку можно выполнить с использованием регрессионного анализа. Проверяют соответствие линии регрессии требованию линейности.

Условия хроматографического анализа, подходящие для количественного определения, описаны в приложении А.

7 Обработка результатов

7.1 Метод внешних стандартов

Рассчитывают массовую долю w, мг/кг, или массовую концентрацию ρ, мг/дм3, определяемого интенсивного (искусственного) подсластителя по формуле

image001.jpg,

(1)

где A1 - площадь пика определяемого интенсивного (искусственного) подсластителя, полученная при анализе раствора пробы;

V1 - объем раствора пробы, см3 (при соблюдении условий, оговоренных в настоящей методике он равен 100 или 500 см3);

m1 - масса определяемого интенсивного (искусственного) подсластителя в градуировочном растворе (V2), мг;

F - кратность разбавления для использованного метода очистки (при колоночной очистке F = 10; при очистке растворами Карреза F = 1);

A2 - площадь пика интенсивного (искусственного) подсластителя, полученная при анализе градуировочного раствора;

V2 - объем стандартного раствора, см3 (при соблюдении условий, оговоренных в настоящей методике он равен 100 см3);

m0 - масса (объем) пробы для анализа, г (см3).

7.2 Градуировочный график

Рассчитывают массовую долю w, мг/кг, или массовую концентрацию ρ, мг/дм3, определяемого интенсивного (искусственного) подсластителя по формуле

image002.jpg,

(2)

где С - массовая концентрация определяемого интенсивного (искусственного) подсластителя в растворе пробы для анализа, определенная по градуировочному графику, мг/дм3;

F, V1, m0 - см. пояснения к формуле (1).

7.3 Выражение результатов

Результат определения содержания сахарина (в виде натриевой соли или в виде свободного имида), ацесульфама калия и аспартама представляют целым числом без десятичных знаков.

Примечание - Коэффициент пересчета натриевой соли сахарина в сахарин в виде свободного имида равен 0, 7593.

8 Прецизионность

8.1 Общие положения

Подробная информация о межлабораторных испытаниях по определению прецизионности настоящей методики приведена в приложении С. Значения характеристик прецизионности, полученные в результате межлабораторных испытаний, могут быть не применимы к содержаниям аналита и типам матриц, отличным от указанных в приложении С.

8.2 Повторяемость

Абсолютное расхождение между результатами двух независимых единичных испытаний, полученными одним методом на идентичном объекте испытаний в одной лаборатории одним оператором с использованием одного оборудования в течение короткого промежутка времени, должно превышать предел повторяемости r не более чем в 5% случаев.

Значения предела повторяемости для ацесульфама калия:

марципан

image003.gif= 256, 6 мг/кг

r = 52, 0 мг/кг

фруктовый йогурт

image003.gif= 230, 8 мг/кг

r = 21, 8 мг/кг

напиток на основе апельсинового сока

image003.gif= 172 мг/дм3

r = 5, 8 мг/дм3

джем

image003.gif= 60 мг/кг

r = 8 мг/кг

напиток на основе апельсинового сока

image003.gif= 370 мг/дм3

r = 30 мг/дм3

кола

image003.gif= 351 мг/дм3

r = 20 мг/дм3

крем

image003.gif= 316 мг/кг

r = 15 мг/кг

йогурт

image003.gif= 264 мг/кг

r = 35 мг/кг

апельсиновый сок

image003.gif= 24, 3 мг/кг

r = 6 мг/кг

Значения предела повторяемости для аспартама:

марципан

image003.gif= 845, 2 мг/кг

r = 41, 2 мг/кг

фруктовый йогурт

image003.gif= 468 мг/кг

r = 29, 9 мг/кг

напиток на основе апельсинового сока

image003.gif= 308 мг/дм3

r = 14, 2 мг/дм3

кола

image003.gif= 270, 7 мг/дм3

r = 10, 7 мг/дм3

кола

image003.gif= 185 мг/дм3

r = 11 мг/дм3

напиток с ароматом апельсина

image003.gif= 301 мг/дм3

r = 25 мг/дм3

джем

image003.gif= 26 мг/кг

r = 13 мг/кг

сухая смесь для открытого пирога

image003.gif= 3100 мг/кг

r = 600 мг/кг

Значения предела повторяемости для натриевой соли сахарина:

марципан

image003.gif= 228 мг/кг

r = 28, 2 мг/кг

фруктовый йогурт

image003.gif= 116 мг/кг

r = 7, 7 мг/кг

напиток на основе апельсинового сока

image003.gif= 50, 8 мг/дм3

r = 3, 4 мг/дм3

кола

image003.gif= 75 мг/дм3

r = 4 мг/дм3

джем

image003.gif= 60 мг/кг

r = 5 мг/кг

напиток на основе апельсинового сока

image003.gif= 82 мг/дм3

r = 6 мг/дм3

кола

image003.gif= 64, 9 мг/дм3

r = 5 мг/дм3

крем

image003.gif= 68, 4 мг/кг

r = 15 мг/кг

йогурт

image003.gif= 71, 4 мг/кг

r = 25 мг/кг

апельсиновый сок

image003.gif= 16, 1 мг/кг

r = 6 мг/кг

8.3 Воспроизводимость

Абсолютное расхождение между результатами двух единичных испытаний, полученными на идентичном объекте испытаний двумя лабораториями, не должно превышать предел воспроизводимости R более чем в 5% случаев.

Значения предела воспроизводимости для ацесульфама калия:

марципан

image003.gif= 256, 6 мг/кг

R = 79, 6 мг/кг

фруктовый йогурт

image003.gif= 230, 8 мг/кг

R = 64, 7 мг/кг

напиток на основе апельсинового сока

image003.gif= 172 мг/дм3

R = 14, 3 мг/дм3

джем

image003.gif= 60 мг/кг

R = 30 мг/кг

напиток на основе апельсинового сока

image003.gif= 370 мг/дм3

R = 66 мг/дм3

кола

image003.gif= 351 мг/дм3

R = 55 мг/дм3

крем

image003.gif= 316 мг/кг

R = 138 мг/кг

йогурт

image003.gif= 264 мг/кг

R = 133 мг/кг

апельсиновый сок

image003.gif= 24, 3 мг/кг

R = 34 мг/кг

Значения предела воспроизводимости для аспартама:

марципан

image003.gif= 845, 2 мг/кг

R = 165, 7 мг/кг

фруктовый йогурт

image003.gif= 468 мг/кг

R = 108, 6 мг/кг

напиток на основе апельсинового сока

image003.gif= 308 мг/дм3

R = 104, 2 мг/дм3

кола

image003.gif= 270, 7 мг/дм3

R = 41, 5 мг/дм3

крем

image003.gif= 185 мг/дм3

R = 38 мг/дм3

напиток с ароматом апельсина

image003.gif= 301 мг/дм3

R = 88 мг/дм3

джем

image003.gif= 26 мг/кг

R = 20 мг/кг

сухая смесь для открытого пирога

image003.gif= 3100 мг/кг

R = 2300 мг/кг

Значения предела воспроизводимости для натриевой соли сахарина:

марципан

image003.gif= 228 мг/кг

R = 37, 9 мг/кг

фруктовый йогурт

image003.gif= 116 мг/кг

R = 45, 5 мг/кг

напиток на основе апельсинового сока

image003.gif= 50, 8 мг/дм3

R = 23, 0 мг/дм3

кола

image003.gif= 75 мг/дм3

R = 34 мг/дм3

джем

image003.gif= 60 мг/кг

R = 47 мг/кг

напиток на основе апельсинового сока

image003.gif= 82 мг/дм3

R = 19 мг/дм3

кола

image003.gif= 64, 9 мг/дм3

R = 30 мг/дм3

крем

image003.gif= 68, 4 мг/кг

R = 32 мг/кг

йогурт

image003.gif= 71, 4 мг/кг

R = 44 мг/кг

апельсиновый сок

image003.gif= 16, 1 мг/кг

R = 19 мг/кг

9 Протокол испытаний

Протокол испытаний должен содержать следующие сведения:

- всю информацию, необходимую для полной идентификации пробы;

- ссылку на настоящий стандарт или применяемый метод;

- дату и время отбора пробы (если они известны);

- дату поступления пробы в лабораторию;

- дату проведения испытания;

- результаты испытания с указанием единиц измерения;

- любые особенности, наблюдавшиеся при проведении испытания;

- любые операции, не оговоренные в настоящей методике или рассматриваемые как необязательные, которые могли бы повлиять на результат испытания.

_____________________________

* w - массовая доля.

Приложение А
(обязательное)

Примеры условий
хроматографического анализа, обеспечивающих приемлемое качество хроматографического разделения

А.1 Хроматографические колонки

Тип:

обращенно-фазовый (RP).

Неподвижные фазы и длина колонки:

сферические частицы размером 3 мкм для колонок длиной 100 мм, до 10 мкм для колонок длиной 300 мм (в соответствии с установленным критерием пригодности).

Внутренний диаметр:

4, 0 мм.

Защитная колонка:

рекомендуется (на усмотрение пользователей настоящего стандарта).

Примеры:

Lichrospher® 100 RP 18*,

Superspher® 60 RP Select B*,

Nucleosil 100-5 C18 AB*, μ Bondapak C18*,

Partisil ODS 3*.

A.2 Скорость потока - 0, 8 - 1 см3/мин

А.3 Объем инжектируемой пробы - 10 - 20 мм3

А.4 Детектирование

Фотометрическое (УФ) при длине волны

217 нм для аспартама;

227 нм для ацесульфама калия;

265 нм для сахарина;

220 нм для всех интенсивных (искусственных) подсластителей, если детектор не позволяет переключить длину волны в ходе одного анализа.

А.5 Подвижная фаза

Приемлемые результаты в большинстве случаев обеспечиваются использованием подвижных фаз следующего состава:

- смесь фосфатного буферного раствора I (4.9) с ацетонитрилом (4.1) в объемном соотношении 90:10;

- смесь фосфатного буферного раствора II (4.10) с ацетонитрилом (4.1) в объемном соотношении 80:20;

- смесь фосфатного буферного раствора II (4.10) с ацетонитрилом (4.1) в объемном соотношении 85:15;

- смесь фосфатного буферного раствора II (4.10) с ацетонитрилом (4.1) в объемном соотношении 90:10;

- смесь фосфатного буферного раствора II (4.10) с ацетонитрилом (4.1) в объемном соотношении 95:5;

- смесь фосфатного буферного раствора II (4.10) с ацетонитрилом (4.1) в объемном соотношении 98:2;

- смесь фосфатного буферного раствора I (4.9) с фосфорной кислотой (4.6), рН = 2, 8 ед. рН.

_____________________________

* Lichrospher® 100 RP 18, Superspher® 60 RP Select В, Nucleosil® 100-5 C18 AB, μBondapak С 18 и Partisil ODS 3 являются примерами подходящих продуктов, имеющихся в продаже. Информация приводится для удобства пользователей настоящего стандарта и не является рекламой указанных продуктов со стороны CEN.

Приложение В
(справочное)

Типичные хроматограммы

image004.jpg

Рисунок В.1 - Разделение контрольного раствора методом ВЭЖХ

image005.jpg

Рисунок В.2 - Разделение контрольного раствора методом ВЭЖХ

Приложение С
(справочное)

Данные по прецизионности

Приведенные данные получены в результате межлабораторных испытаний, выполненных в соответствии с [4], которые были проведены Институтом имени Макса фон Петтенкофера Федерального управления по здравоохранению Германии (1) (г. Берлин), департамент по химическому составу пищевых продуктов. Объектами данных испытаний были марципан, фруктовый йогурт, кола и напиток на основе апельсинового сока (см. [1]). Дополнительные межлабораторные испытания проводились Французским институтом по напиткам, пивоварению и солодовенному делу (IFBM) (2). Объектами испытаний были кола, напиток с ароматизатором, имитирующим апельсин, джем и сухая смесь для открытого пирога (см. [3]). Еще одни межлабораторные испытания были проведены Министерством по сельскому хозяйству, рыболовству и пищевым продуктам (MAFF) (3) в научно-исследовательском парке в г. Норвич (Великобритания). Объектами этих испытаний были напиток на основе апельсинового сока, кола, крем, йогурт и апельсиновый сок (см. [2]).

Таблица С.1

Ацесульфам калия

Марципан (1)

Фруктовый йогурт (1)

Напиток на основе апельсинового сока (1)

Джем (2)

Год межлабораторного испытания

1992

1992

1992

1993

Количество лабораторий

8

8

13

9

Количество проб

1

1

1

1

Количество лабораторий, оставшихся после исключения выбросов

7

7

10

9

Количество выбросов (лабораторий)

1

1

3

0

Количество принятых результатов

38

38

53

9

Среднее значениеimage003.gif

256, 6 мг/кг

230, 8 мг/кг

172, 0 мг/дм3

60 мг/кг

Стандартное отклонение повторяемости sr

18, 7 мг/кг

7, 7 мг/кг

2, 1 мг/дм3

2, 9 мг/кг

Относительное стандартное отклонение повторяемости RSDr, %

7, 3

3, 4

1, 2

4, 8

Предел повторяемости r

52, 0 мг/кг

21, 8 мг/кг

5, 8 мг/дм3

8 мг/кг

Стандартное отклонение воспроизводимости sR

28, 1 мг/кг

22, 9 мг/кг

5, 0 мг/дм3

10, 7 мг/кг

Относительное стандартное отклонение воспроизводимости RSDR, %

11, 1

10, 0

3, 0

17, 8

Предел воспроизводимости R

79, 6 мг/кг

64, 7 мг/кг

14, 3

30 мг/кг

Значение индекса Горвица

1, 6

1, 5

0, 5

2, 2

Таблица С.2

Ацесульфам калия

Напиток на основе

апельсинового

сока (3)

Кола (3)

Крем (3)

Йогурт (3)

Апельсиновый сок (3)

Год межлабораторного испытания

Количество лабораторий

Количество проб

1995

12

2

1995

12

2

1995

11

2

1995

11

2

1995

11

2

Количество лабораторий, оставшихся после исключения выбросов

11

11

8

10

7

Количество выбросов (лабораторий)

1

1

3

1

4

Количество принятых результатов

22

22

16

20

14

Среднее значениеimage003.gif

370 мг/дм3

351 мг/дм3

316 мг/дм3

264 мг/дм3

24, 3 мг/кг

Стандартное отклонение повторяемости sr

10, 9 мг/дм3

7, 3 мг/дм3

5, 4 мг/дм3

12, 4 мг/дм3

1, 9 мг/кг

Относительное стандартное отклонение повторяемости RSDr, %

3

2

2

5

8

Предел повторяемости r

30 мг/дм3

20 мг/дм3

15 мг/дм3

35 мг/дм3

6 мг/кг

Стандартное отклонение воспроизводимости sR

23, 5 мг/дм3

19, 7 мг/дм3

49, 3 мг/дм3

47, 6 мг/дм3

12, 2 мг/дм3

Относительное стандартное отклонение воспроизводимости RSDR, %

6

6

16

18

50

Предел воспроизводимости R

66 мг/дм3

55 мг/дм3

138 мг/дм3

133 мг/дм3

34 мг/кг

Значение индекса Горвица

1, 0

0, 8

2, 3

2, 6

5, 1

Таблица С.3

Аспартам

Марципан (1)

Фруктовый йогурт (1)

Напиток на основе апельсинового сока (1)

Кола(1)

Год межлабораторного испытания

1992

1992

1992

1991

Количество лабораторий

8

8

13

8

Количество проб

1

1

1

1

Количество лабораторий, оставшихся после исключения выбросов

7

8

13

8

Количество выбросов (лабораторий)

1

0

0

0

Количество принятых результатов

35

43

68

43

Среднее значениеimage003.gif

845, 2 мг/кг

468, 0 мг/кг

308, 0 мг/дм3

270, 7 мг/дм3

Стандартное отклонение повторяемости sr

14, 6 мг/кг

10, 6 мг/кг

5, 0 мг/дм3

3, 8 мг/дм3

Относительное стандартное отклонение повторяемости RSDr, %

1, 7

2, 3

1, 6

1, 4

Предел повторяемости r

41, 2 мг/кг

29, 9 мг/кг

14, 2 мг/дм3

10, 7 мг/дм3

Стандартное отклонение воспроизводимости sR

58, 6 мг/кг

38, 4 мг/кг

36, 8 мг/дм3

14, 7 мг/дм3

Относительное стандартное отклонение воспроизводимости RSDR, %

7, 0

8, 3

12, 1

5, 5

Предел воспроизводимости R

165, 7 мг/кг

108, 6 мг/кг

104, 2 мг/дм3

41, 5 мг/дм3

Значение индекса Горвица

1, 2

1, 4

1, 5

0, 8

Таблица С.4

Аспартам

Кола (2)

Напиток с ароматом апельсина (2)

Джем (2)

Сухая смесь для открытого пирога (2)

Год межлабораторного испытания

1993

1993

1993

1993

Количество лабораторий

9

9

5

9

Количество проб

1

1

1

1

Количество лабораторий, оставшихся после исключения выбросов

9

9

4

8

Количество выбросов (лабораторий)

0

0

1

1

Количество принятых результатов

9

9

4

8

Среднее значениеimage003.gif

185 мг/дм3

301 мг/дм3

26 мг/кг

3100 мг/кг

Стандартное отклонение повторяемости sr

3, 9 мг/дм3

8, 9 мг/дм3

4, 6 мг/кг

214 мг/кг

Относительное стандартное отклонение повторяемости RSDr, %

2, 1

3, 0

17, 7

6, 9

Предел повторяемости r

11 мг/дм3

25 мг/дм3

13 мг/кг

600 мг/кг

Стандартное отклонение воспроизводимости sR

13, 6 мг/дм3

31, 4 мг/дм3

7, 1 мг/кг

821 мг/кг

Относительное стандартное отклонение воспроизводимости RSDR, %

7, 3

10, 4

27, 5

26, 5

Предел воспроизводимости R

38 мг/дм3

88 мг/дм3

20 мг/кг

2300 мг/кг

Значение индекса Горвица

1, 0

1, 4

2, 8

5, 5

Таблица С.5

Натриевая соль сахарина

Марципан (1)

Фруктовый йогурт (1)

Напиток на основе апельсинового сока (1)

Кола (2)

Джем (2)

Год межлабораторного испытания

1992

1992

1992

1993

1993

Количество лабораторий

8

8

13

9

9

Количество проб

1

1

1

1

1

Количество лабораторий, оставшихся после исключения выбросов

6

8

12

8

8

Количество выбросов (лабораторий)

2

0

1

1

1

Количество принятых результатов

30

46

63

8

8

Среднее значениеimage003.gif

228, 0 мг/кг

116, 0 мг/кг

50, 8 мг/дм3

75 мг/дм3

60 мг/кг

Стандартное отклонение повторяемости sr

10, 0 мг/кг

2, 7 мг/кг

1, 2 мг/дм3

1, 4 мг/дм3

1, 8 мг/кг

Относительное стандартное отклонение повторяемости RSDr, %

4, 4

2, 4

2, 4

1, 9

3, 0

Предел повторяемости r

28, 2 мг/кг

7, 7 мг/кг

3, 4 мг/дм3

4 мг/дм3

5 мг/кг

Стандартное отклонение воспроизводимости sR

13, 5 мг/кг

16, 1 мг/кг

8, 1 мг/дм3

12, 1 мг/дм3

16, 8 мг/кг

Относительное стандартное отклонение воспроизводимости RSDR, %

5, 9

14, 0

16, 2

16, 2

28, 0

Предел воспроизводимости R

37, 9 мг/кг

45, 5 мг/кг

23, 0 мг/дм3

34 мг/дм3

47 мг/кг

Значение индекса Горвица

4, 1

1, 8

2, 0

1, 7

2, о8

Таблица С.6

Натриевая соль сахарина

Напиток на основе апельсинового сока (3)

Кола (3)

Крем (3)

Йогурт (3)

Апельсиновый сок (3)

Год межлабораторного испытания

1995

1995

1995

1995

1995

Количество лабораторий

12

12

11

11

11

Количество проб

2

2

2

2

2

Количество лабораторий, оставшихся после исключения выбросов

10

11

10

10

8

Количество выбросов (лабораторий)

2

1

1

1

3

Количество принятых результатов

20

22

20

20

16

Среднее значениеimage003.gif

82 мг/дм3

64, 9 мг/дм3

68, 4 мг/кг

71, 4 мг/кг

16, 1 мг/кг

Стандартное отклонение повторяемости sr

2, 0 мг/дм3

2, 0 мг/дм3

5, 5 мг/кг

8, 9 мг/кг

2, 3 мг/кг

Относительное стандартное отклонение повторяемости RSDr, %

2

3

8

12

14

Предел повторяемости r

6 мг/дм3

5 мг/дм3

15 мг/кг

25 мг/кг

6 мг/кг

Стандартное отклонение воспроизводимости sR

6, 7 мг/дм3

10, 6 мг/дм3

11, 3 мг/кг

15, 8 мг/кг

6, 9 мг/кг

Относительное стандартное отклонение воспроизводимости RSDR, %

8

16

17

22

43

Предел воспроизводимости R

19 мг/дм3

30 мг/дм3

32 мг/кг

44 мг/кг

19 мг/кг

Значение индекса Горвица

1, 0

1, 9

1, 9

2, 6

4, 1

Библиография

[1]

Untersuchung von Lebensmitteln: Bestimmung von Acesulfam-K, Aspartam und Saccharin-Natrium in Lebensmitteln L 00.00-28, Mai 1994 (Food Analysis: Determination of acesulfame-K, aspartame and sodium saccharin content in foodstuffs L 00.00-28, 1994-05) in: Amtliche Sammlung von Untersuchungsverfahren nach §35 LMBG: Verfahren zur Probenahme und Untersuchung von Lebensmitteln, Tabakerzeugnissen, kosmetischen Mitteln und Bedarfsgegenständen/Bundesgesundheitsamt (In: Collection of official methods under article 35 of the German Federal Foods Act; Methods of sampling and analysis of foods, tobacco products, cosmetics and commodity goods/Federal Health Office) Loseblattausgabe, Stand Mai. 1994 Bd. 1 (Loose leaf edition, as of 1994-05 Vol. I.) Berlin, Köln: Beuth Verlag GmbH (Анализ пищевых продуктов. Определение содержания ацесульфама калия, аспартама и натриевой соли сахарина в пищевых продуктах)

[2]

Willetts, P., Hawkins, S., Brereton, P., and Wood, R.: Determination of intense sweeteners in foodstuffs. Collaborative trial, J Assoc Publ Analysts, 1996, 32, 53 - 97 (Определение интенсивных (искусственных) подсластителей в пищевых продуктах)

[3]

Determination of Aspartam, Acesulfam-K and Saccharin in Foodstuff, Collaborative study, May 1993, IFBM, France (Определение аспартама, ацесульфама калия и сахарина в пищевых продуктах)

[4]

ISO 5725:1986

Precision of test methods - Determination of repeatability and reproducibility for a standard test method by inter-laboratory tests (Точность (правильность и прецизионность) методов испытаний. Определение повторяемости и воспроизводимости результатов стандартного метода с помощью лабораторных испытаний)

Приложение ДА
(справочное)

Сведения о соответствии ссылочных европейских стандартов ссылочным межгосударственным стандартам

Таблица ДА.1

Обозначение ссылочного европейского стандарта

Степень соответствия

Обозначение и наименование соответствующего межгосударственного стандарта

EN ISO 3696:1995

-

*

* Соответствующий межгосударственный стандарт отсутствует. До его принятия рекомендуется использовать перевод на русский язык европейского стандарта EN ISO 3696. Официальный перевод данного европейского стандарта находится в Федеральном информационном фонде технических регламентов и стандартов Российской Федерации.


Возврат к списку

(Нет голосов)

Комментарии (0)


Чтобы оставить комментарий вам необходимо авторизоваться
Самые популярные документы
Новости
Все новости