— Все документы — ГОСТы — ГОСТ ISO 10727-2013 ЧАЙ И ЧАЙ РАСТВОРИМЫЙ. ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ КОФЕИНА. МЕТОД ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ


ГОСТ ISO 10727-2013 ЧАЙ И ЧАЙ РАСТВОРИМЫЙ. ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ КОФЕИНА. МЕТОД ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

ГОСТ ISO 10727-2013 ЧАЙ И ЧАЙ РАСТВОРИМЫЙ. ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ КОФЕИНА. МЕТОД ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Введен в действие приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 28 июня 2013 г. N 355-ст

Межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 10727-2013
"ЧАЙ И ЧАЙ РАСТВОРИМЫЙ. ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ КОФЕИНА. МЕТОД ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ"

Tea and instant tea. Determination of caffeine content. Method using high-performance liquid chromatography

Дата введения - 1 января 2014 г.

Введен впервые

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 Подготовлен Некоммерческой организацией "Российская Ассоциация производителей чая и кофе "РОСЧАЙКОФЕ" (Ассоциация "РОСЧАЙКОФЕ") на основе аутентичного перевода на русский язык указанного в пункте 5 международного стандарта, который выполнен ФГУП "СТАНДАРТИНФОРМ"

2 Внесен Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (Росстандарт)

3 Принят Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 25 марта 2013 г. N 55-П)

За принятие голосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97

Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97

Сокращенное наименование национального органа по стандартизации

Армения

AM

Минторгэкономразвития

Беларусь

BY

Госстандарт Республики Беларусь

Казахстан

KZ

Госстандарт Республики Казахстан

Киргизия

KG

Кыргызстандарт

Молдова

MD

Молдова-Стандарт

Россия

RU

Росстандарт

Таджикистан

TJ

Таджикстандарт

Узбекистан

UZ

Узстандарт

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 28 июня 2013 г. N 355-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 10727-2013 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2014 г.

5 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 10727:2002 Tea and instant tea in solid form - Determination of caffeine content - Method using high-performance liquid chromatography (Чай и быстрорастворимый чай в твердой форме. Определение содержания кофеина. Метод жидкостной хроматографии высокого разрешения).

Международный стандарт разработан подкомитетом ISO ТС 34/SC 8 "Чай" технического комитета по стандартизации ISO/TC 34 "Пищевые продукты" Международной организации по стандартизации (ISO).

Перевод с английского языка (en).

Официальный экземпляр международного стандарта, на основе которого подготовлен настоящий межгосударственный стандарт, имеется в Федеральном агентстве по техническому регулированию и метрологии Российской Федерации.

Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного стандарта для приведения в соответствие с ГОСТ 1.5-2001 (раздел 3.6).

Сведения о соответствии межгосударственных стандартов ссылочным международным стандартам приведены в дополнительном приложении ДА.

Степень соответствия - идентичная (IDT)

6 Введен впервые

1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод определения содержания кофеина в чае и растворимом чае методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Метод применим к чаю и растворимому чаю, в т.ч. декофеинизированным.

2 Нормативные ссылки

Следующие ниже стандарты содержат положения, которые посредством ссылок в данном тексте составляют положения данного стандарта. На время публикации данного стандарта указанные издания были действующими. Все стандарты могут пересматриваться, и сторонам - участникам соглашения по настоящему стандарту рекомендуется проанализировать возможность применения последнего издания указанных ниже стандартов. Комитеты - члены ISO и IEC ведут указатели действующих международных стандартов.

ISO 1572:1980 Tea; Preparation of ground sample of known dry matter content (Чай. Приготовлениеизмельченнойпробысизвестнымсодержаниемсухихвеществ)

ISO 3696:1987 Water for analytical laboratory use; Specification and test methods (Водадлялабораторногоанализа. Техническиетребованияиметодыиспытаний)

ISO 7513:1990 Instant tea in solid form; determination of moisture content (loss in mass at 103°C) (Чайбыстрорастворимыйвтвердойформе. Определение содержания влаги (потеря массы при 103°С))

3 Сущность метода

Кофеин из пробы чая экстрагируется водой в присутствии оксида магния. После фильтрации содержание кофеина определяют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с ультрафиолетовым детектированием.

4 Реактивы

Применяют реактивы подтвержденного аналитического качества.

4.1 Вода дистиллированная в соответствии с ISO 3696.

4.2 Метанол класса для ВЭЖХ.

4.3 Подвижная фаза, водный раствор метанола.

Вносят 600 см3 метанола (см. 4.2) в мерную колбу вместимостью 2 дм3. Добавляют дистиллированную воду до метки. Перемешивают и фильтруют раствор через фильтр с размером пор 0,45 мкм (см. 5.3).

Регулируя концентрацию метанола, можно изменять время удерживания кофеина с целью оптимизации хроматографического разделения. Той же цели можно достигнуть путем увеличения температуры колонки, но не выше 60°С.

4.4 Этанол, 25% (об.) водный раствор.

4.5 Магния оксид (так называемый "тяжелый оксид магния").

Примечание - Использование легкого оксида магния может привести к ошибкам в определении кофеина.

4.6 Кофеин, исходный раствор массовой концентрации 500 мкг/см3.

Взвешивают 0,125 г кофеина с точностью ±0,001 г в мерную колбу вместимостью 250 см3. Добавляют достаточное количество водного раствора этанола (см. 4.4) - примерно до половины объема колбы. Перемешивают до полного растворения кофеина и добавляют водный раствор этанола до метки.

Раствор можно использовать в течение месяца при хранении в холодильнике.

4.7 Кофеин, стандартные растворы.

Стандартные растворы кофеина А, В, С и D готовят в день использования.

4.7.1 Кофеин, стандартный раствор А массовой концентрации 15 мкг/см3.

Используют исходный раствор (см. 4.6), имеющий комнатную температуру. С помощью пипетки помещают 3,0 см3 этого раствора в мерную колбу объемом 100 см3. Добавляют дистиллированную воду до метки и перемешивают.

4.7.2 Кофеин, стандартный раствор В массовой концентрации 10 мкг/см3.

Следуют процедуре, приведенной в 4.7.1, но отбирают пипеткой 2,0 см3 исходного раствора кофеина (см. 4.6).

4.7.3 Кофеин, стандартный раствор С массовой концентрации 5 мкг/см3.

Следуют процедуре, приведенной в 4.7.1, но отбирают пипеткой 1,0 см3 исходного раствора кофеина (см. 4.6).

4.7.4 Кофеин, стандартный раствор D массовой концентрации 2 мкг/см3.

С помощью пипетки переносят 20 см3 стандартного раствора кофеина В (см. 4.7.2) в мерную колбу объемом 100 см3. Добавляют дистиллированную воду до метки и перемешивают.

5 Оборудование

Используется обычное лабораторное оборудование, в частности:

5.1 Высокоэффективный жидкостной хроматограф, оборудованный УФ детектором, позволяющим проводить измерения в диапазоне длин волн от 254 до 280 нм, и системой сбора данных или самописцем.

Примечание - Предпочтительным является измерение на длине волны, близкой к 280 нм, т.к. максимум поглощения кофеина наблюдается на длине волны 272 нм.

Если наблюдается заметное суточное изменение температуры, должны быть предприняты меры для поддержания постоянной температуры колонки, например с помощью термостата колонки или водяного охлаждения.

5.2 Хроматографическая колонка для ВЭЖХ с обращенными фазами типа С18 (предпочтительно со сферическими частицами и эффективностью не менее 5000 теоретических тарелок)*. Число теоретических тарелок N может быть рассчитано исходя из формы пика, полученного при вводе одного из стандартных растворов кофеина (см. 4.7), по формуле

image002.gif,

(1)

где t - время удерживания пика;

W0,5 - ширина пика на половине высоты.

Примечание - В данном стандарте условия проведения хроматографического разделения и состав подвижной фазы (см. 4.3) определены для колонки Partisphere С18 размером 110 х 4,6 мм, установленной в систему для ВЭЖХ Whatman. Если используются другие типы колонок, могут потребоваться другие подвижные фазы и условия проведения хроматографического разделения.

5.3 Фильтр с размером пор 0,45 мкм.

5.4 Электрический колбонагреватель, подходящий для колб с круглым дном вместимостью 1 дм3.

5.5 Колба круглодонная вместимостью 1 дм3, со шлифом.

5.6 Противоударные гранулы.

5.7 Обратный холодильник с водяным контуром, со шлифом, предназначенный для присоединения к круглодонной колбе вместимостью 1 дм3.

5.8 Аналитические весы с пределом допускаемой абсолютной погрешности не более ±0,001 г.

6 Отбор пробы

Необходимо, чтобы полученная проба была репрезентативной и не была повреждена при хранении и транспортировании.

Процедура отбора пробы настоящим стандартом не регламентируется. Рекомендуемые методы отбора проб по [1] для чая, по [2] - для растворимого чая.

7 Подготовка пробы

Измельчают пробу чая в соответствии с ISO 1572.

В измельчении пробы растворимого чая необходимости нет.

8 Методика проведения анализа

8.1 Общие положения

Необходимо убедиться в том, что удовлетворено требование к повторяемости. Проводят два испытания в соответствии с 8.2 - 8.6 при соблюдении условия повторяемости.

8.2 Определение массовой доли сухого вещества в пробе

Рассчитывают массовую долю сухого вещества исходя из массовой доли влаги, определенной по потере массы частью пробы при 103°С в соответствии с ISO 1572 для чая, ISO 7513 - для растворимого чая.

8.3 Пробы для анализа

8.3.1 Чай

В круглодонную колбу (см. 5.5) отвешивают 1,0 г анализируемой пробы (см. раздел 7) с точностью ±0,001 г.

8.3.2 Растворимый чай

В круглодонную колбу (см. 5.5) отвешивают 0,5 г пробы (см. раздел 7) с точностью ±0,001 г.

8.4 Экстрагирование кофеина

8.4.1 В круглодонную колбу, содержащую подготовленную пробу чая, добавляют (4,5±0,5) г оксида магния (см. 4.5), помещают несколько противоударных гранул (см. 5.6) и добавляют 300 см3 дистиллированной воды. Взвешивают колбу с содержимым с точностью до 0,1 г.

8.4.2 Перемешивают содержимое. Присоединяют к колбе обратный холодильник (см. 5.7), помещают колбу на электрический колбонагреватель (см. 5.4) и быстро доводят содержимое до кипения. Уменьшают мощность колбонагревателя и кипятят содержимое в течение 20 мин при периодическом перемешивании.

8.4.3 Снимают колбу с колбонагревателя и охлаждают содержимое до комнатной температуры. Вытирают внешнюю поверхность колбы от влаги и взвешивают колбу с содержимым с точностью до 0,1 г. Масса колбы с содержимым должна равняться значению, полученному в 8.4.1. Если значения различаются, добавляют соответствующее количество дистиллированной воды так, чтобы масса достигла значения, полученного в 8.4.1, и перемешивают содержимое.

8.4.4 Дают раствору отстояться, отбирают примерно 10 см3 экстракта и фильтруют через фильтр (см. 5.3).

8.5 Разбавление (для чая и растворимого чая с нормальным содержанием кофеина)

С помощью пипетки помещают 1,0 см3 фильтрата, полученного по 8.4.4, в мерную колбу вместимостью 10 см3. Добавляют дистиллированную воду до метки и перемешивают.

Для декофеинизированных чаев разбавление не проводят.

8.6 Проведение анализа

8.6.1 Подготовка хроматографа

Готовят хроматограф в соответствии с рекомендациями изготовителя и устанавливают следующие параметры хроматографического разделения:

- скорость потока подвижной фазы (см. 4.3): от 0,5 до 1,5 см3/мин в зависимости от используемой колонки (см. 5.2);

- температура колонки (см. 5.2): оптимальное значение 40,0°С (с учетом 4.3).

8.6.2 Хроматографический анализ

Убедившись в стабильности скорости потока подвижной фазы (см. 4.3) и температуры колонки, вводят в колонку по 0,02 см3 стандартных растворов кофеина А, В, С и D (см. 4.7.1 - 4.7.4), а затем такой же объем анализируемого раствора, полученного в соответствии с 8.4.4 для декофеинизированного чая, в соответствии с 8.5 - для листового и растворимого чая с нормальным содержанием кофеина. Периодически повторяют введение стандартных растворов (обычно после 6 анализируемых растворов). Записывают данные для всех пиков, соответствующих стандартным и анализируемым растворам.

9 Обработка результатов

Идентифицируют пики, соответствующие стандартным и анализируемым растворам, и измеряют их высоту или площадь (площади предпочтительнее). Для стандартных растворов кофеина строят линейную калибровочную зависимость стандартной концентрации кофеина (мкг/см3) от площади или высоты пиков. Автоматически (с помощью системы сбора данных) или вручную (по выбранным точкам на линии калибровочной зависимости) вычисляют коэффициент отклика RF

image004.gifили image006.gif,

(2)

где Cstd - концентрация стандартного раствора кофеина, в мкг/см3;

Astd - площадь пика, полученного для стандартного раствора кофеина;

hstd - высота пика, полученного для стандартного раствора кофеина.

Содержание кофеина w, массовая доля (в процентах), приведенная к содержанию сухого вещества в пробе, вычисляют по формуле

image008.gif

(3)

или

image010.gif,

(4)

где Asamp - площадь пика, полученного для анализируемого раствора;

RF - коэффициент отклика для кофеина;

d - коэффициент разбавления (10 для чая и чая растворимого);

m - масса пробы, в граммах;

wDM - содержание сухого вещества в пробе (массовая доля в процентах), определяемое в соответствии с 8.2;

hsamp - высота пика, полученного для анализируемого раствора.

10 Прецизионность

10.1 Межлабораторные испытания

Подробности межлабораторных испытаний для определения прецизионности метода приведены в Приложении А. Значения, полученные в результате этих межлабораторных испытаний, могут быть неприменимы к диапазонам концентраций и образцам, отличным от указанных.

10.2 Повторяемость

Абсолютное значение разности результатов двух независимых испытаний, проведенных с использованием одного и того же метода на одном и том же образце в одной и той же лаборатории на одном и том же оборудовании одним и тем же оператором в течение небольшого промежутка времени, не должно превышать значения предела повторяемости r, приведенного в таблице А.1, более чем в 5% испытаний.

10.3 Воспроизводимость

Абсолютное значение разности результатов двух независимых испытаний, проведенных с использованием одного и того же метода на одном и том же образце в различных лабораториях на различном оборудовании разными операторами, не должно превышать значения предела воспроизводимости R, приведенного в таблице А.1, более чем в 5% испытаний.

11 Протокол испытаний

Протокол испытаний должен содержать:

- информацию, необходимую для идентификации пробы;

- информацию о методе отбора пробы;

- информацию о методе испытания со ссылкой на настоящий стандарт;

- детали испытания, не установленные в данном стандарте, или считающиеся необязательными, а также подробности всех обстоятельств, которые могут повлиять на результат;

- результаты испытаний;

- полученный окончательный результат, если проводилась проверка повторяемости.

_____________________________

*Spherisorb 5 ODS, Spherisorb 10 ODS, Nucleosil 5 C18, Nucleosil 7 C18, Nucleosil 10 C18, Zorbax BP C18, Hypersil ODS, CP-Sper C18, Bondapak C18, Supelcosil L C18 и Partisphere C18 являются примерами продукции, имеющейся в продаже. Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не является одобрением данной продукции со стороны ISO.

Приложение А
(справочное)

Результаты межлабораторных испытаний

В межлабораторных испытаниях, проведенных в 1999 г. под эгидой Международной организации стандартизации, были получены результаты (оцененные в соответствии с [3]), которые приведены в таблице А.1.

Таблица А.1 - Значения пределов повторяемости и воспроизводимости

Показатели

Проба (1)

1

2

3

4

5

6

7

8

Количество лабораторий

11

Количество принятых результатов

8

8

8

8

8

7

8

8

Среднее содержание кофеина, массовая доля, %

4,120

3,932

0,256

0,091

0,118

0,260

7,729

5,116

Стандартное отклонение повторяемости, Sr

0,1029

0,1182

0,0096

0,0054

0,0071

0,0104

0,2964

0,1132

Коэффициент вариации повторяемости, %

2,50

3,01

3,75

5,93

6,02

4,00

3,84

2,21

Предел повторяемости, r (= 2,8 Sr)

0,288

0,331

0,027

0,015

0,020

0,029

0,830

0,317

Стандартное отклонение воспроизводимости, SR

0,1650

0,1564

0,0121

0,0079

0,0071

0,0140

0,3557

0,2361

Коэффициент вариации воспроизводимости, %

4,01

3,98

4,74

8,68

6,02

5,37

4,60

4,61

Предел воспроизводимости, R (= 2,8 SR)

0,462

0,438

0,034

0,022

0,020

0,039

0,996

0,661

(1) Проба 1: Листовой зеленый чай

Проба 2: Листовой черный чай

Проба 3: Декофеинизированный листовой черный чай

Проба 4: Декофеинизированный листовой черный чай

Проба 5: Декофеинизированный листовой черный чай

Проба 6: Декофеинизированный растворимый черный чай

Проба 7: Растворимый черный чай

Проба 8: Растворимый черный чай

Приложение ДА
(справочное)

Сведения о соответствии межгосударственных стандартов ссылочным международным стандартам

Таблица ДА.1

Обозначение ссылочного международного стандарта

Степень соответствия

Обозначение и наименование соответствующего межгосударственного стандарта

ISO 1572:1980 Tea; Preparation of ground sample of know dry matter content

-

*

ISO 3696:1987 Water for analytical laboratory use; Specifica-tion and test methods

-

*

ISO 7513:1990 Instant tea in solid form; determination of moisture content (loss in mass at 103°C)

-

*

* Соответствующий национальный стандарт отсутствует. До его утверждения рекомендуется использовать перевод на русский язык данного международного стандарта. Перевод данного международного стандарта находится в Федеральном информационном фонде технических регламентов и стандартов.

Библиография

[1]

ISO 1839:1980

Чай. Отбор проб

[2]

ISO 7516:1984

Чай быстрорастворимый в твердой форме. Отбор проб

[3]

ISO 5725-2:1994

Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений


Возврат к списку

(Нет голосов)

Комментарии (0)


Чтобы оставить комментарий вам необходимо авторизоваться
Самые популярные документы
Новости
Все новости