Введен в действие приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 18 января 2016 г. N 4-ст
Межгосударственный стандарт ГОСТ 33615-2015
"ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ, ПРОДОВОЛЬСТВЕННОЕ СЫРЬЕ. ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОСТАТОЧНОГО СОДЕРЖАНИЯ МЕТАБОЛИТА ФУРАЗОЛИДОНА"
Food products, food raw materials. Immunoenzymatic method for determination of furazolidone metabolite
Дата введения - 1 января 2017 г.
Введен впервые
Предисловие
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"
Сведения о стандарте
1 Разработан Федеральным государственным бюджетным учреждением "Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов" (ФГБУ "ВГНКИ")
2 Внесен Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (Росстандарт)
3 Принят Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 27 октября 2015 г. N 81-П)
За принятие проголосовали:
Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97
|
Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97
|
Сокращенное наименование национального органа по стандартизации
|
Армения
Казахстан
Киргизия
Россия
|
AM
KZ
KG
RU
|
Минэкономики Республики Армения
Госстандарт Республики Казахстан
Кыргызстандарт
Росстандарт
|
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 18 января 2016 г. N 4-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 33615-2015 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2017 г.
5 Введен впервые
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на мясо, мясо птицы, яйца, яичный порошок, яичный меланж, молоко, рыбу, мед и устанавливает иммуноферментный метод определения остаточного содержания метаболита фуразолидона (3-амино-2-оксазолидинона) в диапазоне измерений от 0, 7 до 62, 5 мкг/кг, для сухого молока - от 7 до 625 мкг/кг.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:
ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования
ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности
ГОСТ 12.1.019-79*(1) Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты
ГОСТ OIML R 76-1-2011 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания
ГОСТ 334-73 Бумага масштабно-координатная. Технические условия
ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 2652-78 Калия бихромат технический. Технические условия
ГОСТ 3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия
ГОСТ 4204-77 Реактивы. Кислота серная. Технические условия
ГОСТ 4328-77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия
ГОСТ ИСО 5725-6-2003*(2) Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 7269-79 Мясо. Методы отбора образцов и органолептические методы определения свежести
ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия
ГОСТ 19792-2001*(3) Мед натуральный. Технические условия
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу
ГОСТ 31339-2006 Рыба, нерыбные объекты и продукция из них. Правила приемки и методы отбора проб
ГОСТ 31467-2012 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Методы отбора проб и подготовка их к испытаниям
Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов по указателю "Национальные стандарты", составленному по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, а котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Термины, определения и сокращения
3.1 В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:
3.1.1 тест-система: Набор (комплект) специально подобранных реагентов (реактивов) и составных частей, предназначенный для определения одного или нескольких конкретных веществ.
3.1.2 вспомогательный раствор: Раствор, приготовляемый заблаговременно и необходимый для приготовления других типов растворов.
3.1.3 рабочий раствор: Раствор одного или нескольких реактивов, приготовляемый непосредственно перед использованием и необходимый для выполнения процедуры анализа.
3.2 В настоящем стандарте применены следующие сокращения:
AOZ - 3-амино-2-оксазолидинон (метаболит фуразолидона);
АГ - антиген;
AT - антитела;
ИФА - иммуноферментный анализ;
ОП - оптическая плотность;
П - относительное поглощение;
ТМБ - 3, 3', 5, 5'-тетраметилбензидин;
ФК - ферментный конъюгат.
4 Сущность метода
4.1 Иммуноферментный метод основан на измерении массовой концентрации AOZ в растворах экстрактов исследуемых проб с помощью прямого твердофазного конкурентного ИФА.
4.2 Прямой твердофазный конкурентный ИФА основан на способности маркерного метаболита AOZ и ФК в условиях конкуренции взаимодействовать со специфичными AT, нанесенными на поверхность лунок планшета.
4.3 Связавшийся с AT AOZ, меченный пероксидазой хрена, выявляют путем измерения интенсивности окрашивания продукта реакции окисления 3, 3', 5, 5'-тетраметилбензидина (раствор N 5, см. приложение А) перекисью водорода.
Аналитический сигнал (регистрируемое значение ОП), характеризующий степень взаимодействия AT с АГ, обратно пропорционален массовой концентрации AOZ в растворе.
5 Метрологические характеристики
5.1 Установленный в настоящем стандарте метод обеспечивает выполнение измерений массовой концентрации (содержания) AOZ с расширенной неопределенностью результатов аналитических измерений при коэффициенте охвата k = 2, указанной в таблице 1.
Таблица 1 - Метрологические характеристики метода
AOZ (3-амино-2-оксазолидинон)
|
Диапазон измерений содержания, мкг/дм3 (мкг/кг)
|
Значение относительной расширенной неопределенности U, при коэффициенте охвата k = 2, Р = 0, 95, %
|
Показатель повторяемости (относительное среднеквадратичное отклонение повторяемости) σr, %
|
Показатель воспроизводимости (относительное стандартное отклонение воспроизводимости) σR, %
|
Предел повторяемости r, % (при Р = 0, 95, n = 2)
|
В мясе, мясе птицы, яйцах, яичном порошке, яичном меланже, рыбе, молоке, меде
|
От 0, 7 до 2, 0 включ.
|
50
|
16
|
24
|
44
|
Св. 2, 0 до 62, 5 включ.
|
30
|
9
|
14
|
25
|
В сухом молоке
|
От 7 до 20 включ.
|
50
|
16
|
24
|
44
|
Св. 20 до 625 включ.
|
30
|
9
|
14
|
25
|
6 Требования безопасности и условия выполнения измерений
6.1 При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007.
6.2 Помещения, в которых проводится анализ и подготовка проб, должны быть оборудованы приточно-вытяжной вентиляцией, и соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004 и электробезопасности по ГОСТ 12.1.019.
6.3 К выполнению измерений допускаются лица, владеющие техникой ИФА и изучившие инструкции по применению тест-систем и инструкции по эксплуатации используемых приборов.
6.4 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- температура окружающего воздуха ..................от 20°С до 30°С;
- атмосферное давление ............................от 84 до 106 кПа;
- напряжение в питающей электросети ................от 200 до 240 В;
- частота переменного тока ..........................от 49 до 51 Гц;
- относительная влажность воздуха ....................от 40% до 80%.
7 Средства измерений, аппаратура, материалы, посуда и реактивы
7.1 При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, аппаратуру, материалы и посуду:
- весы неавтоматического действия высокого класса точности по ГОСТ OIML R 76-1 с пределом допускаемой абсолютной погрешности ±0, 05 г;
- рН-метр любой марки, позволяющий проводить измерения в диапазоне от 3 до 10 ед. рН с погрешностью ±0, 05 ед. рН;
- фотометр вертикального типа фотометрирования с диапазоном измерений ОП от 0 до 3 в комплекте с интерференционными светофильтрами для длин волн 450 и 620 нм;
- баню водяную с терморегулятором, позволяющим поддерживать температуру от 40°С до 100°С, с отклонением от заданной температуры ±5°С;
- измельчитель-гомогенизатор лабораторный;
- калькулятор любого типа с логарифмической функцией;
- микроцентрифугу любого типа с частотой вращения 7000 об/мин;
- морозильную камеру любого типа, обеспечивающую среднюю температуру в холодильной камере не выше минус 20°С;
- роторный испаритель любого типа или устройство для испарения экстрактов, с термостатируемым нагревательным модулем с системой отдувки растворителей инертным газом;
- термостат любого типа, поддерживающий температуру (37±1)°С;
- холодильник бытовой с цифровым контроллером температуры и рабочим диапазоном температур от 0°С до 8°С;
- центрифугу с бакет-ротором и адаптером для пробирок вместимостью 15 см3, частотой вращения не менее 4000 об/мин;
- шейкер переворачивающий вертикального вращения 360° в одной плоскости с адаптером для пробирок и диапазоном скорости от 20 до 100 об/мин;
- шейкер вортексного типа, с вставкой для одной пробирки и диапазоном скорости от 150 до 2500 об/мин;
- шкаф сушильный любого типа, обеспечивающий поддержание температуры не менее (95±5)°С;
- бумагу индикаторную универсальную, рН 0 - 12;
- бумагу масштабно-координатную по ГОСТ 334, марки Н-1;
- бумагу фильтровальную лабораторную по ГОСТ 12026;
- колбы 1-100 (1000)-2 по ГОСТ 1770;
- колбы конические Кн-1-25(50)-24/29 ТС по ГОСТ 25336;
- пипетки многоканальные переменной вместимости 0, 03 - 0, 3 см3, с допустимой относительной погрешностью дозирования по метанолу и ацетонитрилу не более ±1, 0%;
- пипетки одноканальные переменной вместимости 0, 005 - 0, 05; 0, 1 - 1, 0; 0, 5 - 5, 0 см3 с допустимой относительной погрешностью дозирования по карбинолу и ацетонитрилу не более ±1%;
- пробирки стеклянные типа П-1-10-0, 1 ХС по ГОСТ 25336;
- пробирки стеклянные типа "Фальком" вместимостью 50 см3 с завинчивающимися крышками;
- пробирки типа "Эппендорф" вместимостью 1, 5 см3;
- цилиндры 1(2, 3)-10(250, 500)-1 по ГОСТ 1770.
7.2 При выполнении измерений применяют следующие реактивы:
- воду дистиллированную по ГОСТ 6709;
- калия бихромат по ГОСТ 2652;
- кислоту серную по ГОСТ 4204, концентрированную;
- кислоту соляную по ГОСТ 3118, концентрированную, плотностью 1, 19 г/см3, х.ч.;
- метанол с содержанием основного вещества не менее 99%, х.ч.;
- натрия гидроокись по ГОСТ 4328, х.ч.,
- натрия фосфат додекагидрат с содержанием основного вещества не менее 98%;
- н-гексан с содержанием основного вещества не менее 98%, х.ч.;
- тест-систему для прямого твердофазного конкурентного ИФА в комплектации (приложение А), которая предназначена для определения AOZ;
- этилацетат с содержанием основного вещества не менее 98%, х.ч.
8 Подготовка к выполнению измерений
8.1 Подготовка оборудования
8.1.1 При подготовке к проведению измерений лабораторную стеклянную посуду моют смесью водного раствора бихромата калия с концентрированной серной кислотой, многократно промывают водопроводной водой, ополаскивают дистиллированной водой и высушивают в сушильном шкафу.
8.1.2 Подготовку и проверку фотометра и рН-метра проводят в соответствии с руководством по эксплуатации приборов.
8.2 Приготовление растворов
8.2.1 Приготовление раствора фосфата натрия с молярной концентрацией 0, 3 моль/дм3
В мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят 11, 4 г натрия фосфата додекагидрата, растворяют в 500 см3 дистиллированной воды и доводят объем раствора до метки водой.
Срок хранения раствора при температуре от 2°С до 8°С - не более 1 мес.
8.2.2 Приготовление раствора соляной кислоты с молярной концентрацией 1 моль/дм3
В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 8, 5 см3 концентрированной соляной кислоты, доводят объем раствора дистиллированной водой до метки, закрывают пробкой и тщательно перемешивают.
Срок хранения раствора в вытяжном шкафу при комнатной температуре - не более 1 мес.
8.2.3 Приготовление раствора гидроокиси натрия молярной концентрацией 0, 1 моль/дм3
В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 0, 4 г гидроокиси натрия, растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды, перемешивают и доводят до метки дистиллированной водой.
Срок хранения раствора при комнатной температуре - не более 1 мес.
8.2.4 Приготовление рабочих градуировочных растворов AOZ K1-K5
8.2.4.1 Приготовление исходного раствора K0
В пробирку типа "Эппендорф" вносят 0, 9 см3 дистиллированной воды, добавляют 0, 1 см3 реактива N 1 (см. приложение А), перемешивают на шейкере в течение 30 с.
8.2.4.2 Приготовление рабочих градуировочных растворов AOZ K1-K5
Рабочие градуировочные растворы K1-K5 готовят в стеклянных пробирках типа "Фальком" согласно таблице 2.
Таблица 2 - Приготовление рабочих градуировочных растворов K1-K5
Название и массовая концентрация приготовляемого раствора AOZ
|
Вносимый объем, см3
|
дистиллированной воды
|
неходкого раствора K0
|
рабочего раствора K5
|
рабочего раствора K4
|
рабочего раствора K3
|
K5 (62, 5 мкг/дм3)
|
0, 9
|
0, 1
|
-
|
-
|
-
|
K4 (12, 5 мкг/дм3)
|
0, 8
|
-
|
0, 2
|
-
|
-
|
K3 (2, 5 мкг/дм3)
|
0, 8
|
-
|
-
|
0, 2
|
-
|
K2 (0, 5 мкг/дм3)
|
0, 8
|
-
|
-
|
-
|
0, 2
|
K1 (0 мкг/дм3)
|
1, 0
|
-
|
-
|
-
|
-
|
Пробирки закрывают крышками и перемешивают на шейкере в течение 20 с.
Используют свежеприготовленные растворы.
8.2.5 Приготовление рабочего раствора буфера для промывки
В колбу вместимостью 50 см3 вносят 28 см3 дистиллированной воды, добавляют 1, 47 см3 реактива N 3 (см. приложение А), перемешивают.
Срок хранения раствора при температуре от 2°С до 8°С - не более 1 мес.
8.2.6 Приготовление рабочего раствора реакционного буфера
В стеклянную пробирку вносят 10 см3 реактива N 4 (см. приложение А) и 0, 0065 см3 реактива N 7 (см. приложение А), перемешивают на шейкере в течение 30 с.
Срок хранения раствора при температуре от 2°С до 8°С - не более 1 сут.
8.2.7 Приготовление 20% раствора метанола в рабочем растворе реакционного буфера
В колбу вместимостью 25 см3 вносят 8 см3 рабочего раствора реакционного буфера (см. 8.2.6), добавляют 2 см3 метанола, перемешивают.
Срок хранения раствора при температуре от 2°С до 8°С - не более 1 сут.
8.2.8 Приготовление рабочего раствора ферментного конъюгата
В стеклянную пробирку вносят 2, 25 см3 реактива N 4 (см. приложение А) и 0, 25 см3 реактива N 2 (см. приложение А), перемешивают на шейкере в течение 10 с.
Используют свежеприготовленный раствор.
8.3 Отбор проб
8.3.1 Отбор проб мяса - по ГОСТ 7269.
8.3.2 Отбор проб мяса птицы - по ГОСТ 31467.
8.3.3 Отбор проб молока - по ГОСТ 26809.
8.3.4 Отбор проб яиц, яичного меланжа и яичного порошка - по нормативным документам, действующим на территории государства, принявшего стандарт.
8.3.5 Отбор проб рыбы - по ГОСТ 31339.
8.3.6 Отбор проб меда - по ГОСТ 19792.
8.3.7 Срок хранения отобранных проб при температуре от 2°С до 8°С - 2 сут. При отсутствии возможности исследования проб в течение двух суток они должны быть заморожены при температуре минус 20°С со сроком хранения не более 2 мес.
8.4 Подготовка проб
8.4.1 Мышечную ткань предварительно очищают от жира, грубой соединительной ткани и измельчают на гомогенизаторе.
8.4.2 Яйца отделяют от скорлупы и перемешивают на гомогенизаторе. Меланж, яичный порошок тщательно перемешивают.
8.4.3 При подготовке питьевого молока проводят его обезжиривание с помощью центрифугирования в течение 15 мин при 4000 об/мин. Верхний слой удаляют.
При подготовке сухого молока 1 г пробы перемешивают с 10 см3 дистиллированной воды до полного растворения. Далее проводят обезжиривание, как описано выше.
8.4.4 1, 00 г гомогенизированной пробы или 1 см3 обезжиренного молока помещают в стеклянные пробирки типа "Фалькон". Затем обрабатывают испытуемые пробы и градуировочные растворы, приготовленные по 8.2.4.2, как указано на рисунке 1.
"Рисунок 1 - Обработка испытуемых проб и градуировочных растворов"
9 Проведение иммуноферментного анализа
9.1 Общие положения
9.1.1 При проведении испытаний следует использовать реагенты и компоненты, входящие в один и тот же набор (тест-систему). Разбавление или замена реагентов из набора (тест-системы) другой серии не допускается.
9.1.2 Наборы (тест-системы) следует хранить при температуре от 2°С до 8°С в пределах срока хранения.
9.1.3 Окрашивание раствора субстрата N 5 (см. приложение А) является признаком его порчи и делает невозможным его применение для анализа.
9.2 Подготовка тест-системы к проведению анализа
9.2.1 Перед использованием тест-систему вынимают из холодильника и выдерживают при комнатной температуре не менее 30 мин, после чего аккуратно встряхивают каждый флакон. Реактив N 3 (см. приложение А) необходимо прогреть в термостате при температуре 37°С до полного растворения кристаллов солей и тщательно перемешать.
9.2.2 После использования реагенты тест-системы сразу убирают в холодильник.
9.2.3 На всех стадиях необходимо избегать воздействия прямого солнечного света.
9.2.4 Для каждого реактива и раствора используют отдельные съемные наконечники пипеток переменной вместимости. Внесение растворов в лунки проводят осторожно, не касаясь наконечниками их дна и стенок.
9.2.5 Каждый исследуемый раствор экстрактов испытуемых проб (см. 8.4) и градуировочных растворов (см. 8.2.4.2) анализируют в двух повторностях.
Примечание - Далее приведены расходы реактивов на два стрипа*(4), что достаточно для анализа трех исследуемых проб. Для другого числа проб количество используемых стрипов и смешиваемых объемов реагентов изменяют в соответствии с количеством исследуемых проб.
9.3 Проведение анализа
9.3.1 Из планшета извлекают необходимое число стрипов. Неиспользованные стрипы хранят в закрытом фольгированном полиэтиленовом пакете с зип-локом*(5) при температуре от 2°С до 8°С в течение всего срока годности тест-системы.
9.3.2 В лунки планшета вносят по 0, 05 см3 экстрактов рабочих градуировочных растворов K1-K5 (см. 8.2.4.2) и растворов испытуемых проб.
Каждый раствор вносят в двойной повторности (лунки-дубли).
Внесение растворов проводят согласно приложению Б.
Далее в каждую лунку вносят по 0, 05 см3 рабочего раствора ферментного конъюгата (см. 8.2.8). Стрипы заклеивают пленкой или закрывают крышкой, инкубируют в термостате при температуре от 2°С до 8°С в течение 1 ч, после чего содержимое лунок сливают.
9.3.3 В лунки планшета вносят по 0, 2 см3 раствора буфера для промывки (см. 8.2.5), оставляют на 1 - 2 мин и сливают. Процедуру промывки повторяют еще три раза. Остатки жидкости интенсивно стряхивают на чистую фильтровальную бумагу.
9.3.4 В лунки планшета вносят по 0, 1 см3 раствора N 5 (см. приложение А) и инкубируют в термостате при температуре 37°С в течение 10 мин. Добавляют по 0, 1 см3 раствора N 6 (см. приложение А), аккуратно перемешивают легким постукиванием по ребру планшета. Помешают планшет в вертикальный фотометр и измеряют значения ОП при длине волны 450 нм.
10 Обработка результатов измерения
10.1 По показателям ОП в лунках-дублях находят среднеарифметические значения. Разность значений ОП для них в процентах от среднего не должна превышать 10.
Связывание AT (или относительное поглощение П, %, рассчитывают по формуле
,
(1)
где ОПп - среднее значение ОП, измеренной в лунках с экстрактами градуировочных растворов K2-K5 (см. 8.2.4) и с растворами экстрактов испытуемых проб;
ОПк - среднее значение ОП, измеренной в лунках с нулевым стандартом (экстрактом градуировочного раствора K1 (см. 8.2.4);
По значениям процентов связывания, вычисленным для градуировочных растворов с соответствующими известными значениями массовой концентрации AOZ, мкг/дм3, строят градуировочный график в полулогарифмической системе координат.
10.2 Для построения градуировочного графика используют масштабно-координатную бумагу. На ось абсцисс наносят значения логарифмов концентраций AOZ в градуировочных растворах K2-K5 (см. 8.2.4.2). По оси ординат откладывают значения процентов связывания, рассчитанные для массовых концентраций по формуле (1). Градуировочный график строят с использованием линейной зависимости.
10.3 С помощью градуировочного графика по значению процента связывания, полученного для растворов экстрактов испытуемых проб, находят логарифмы массовой концентрации в них AOZ. С помощью калькулятора вычисляют его обратное значение (антилогарифм), соответствующее массовой концентрации AOZ в растворе экстракта.
10.4 Массовую концентрацию (содержание) AOZ в испытуемой пробе С, мкг/дм3 (мкг/кг), рассчитывают по формуле
C=c·K,
(2)
где с - массовая концентрация AOZ в рабочем растворе экстракта испытуемой пробы, определяемая по градуировочному графику, мкг/дм3;
К - коэффициент пересчета мкг/дм3 в мкг/кг в экстракте испытуемой пробы, учитывающий ее разведение; для сухого молока равен 10, для остальных проб - единице.
Образец записи результатов измерений приведен в приложении В.
За окончательный результат принимают среднеарифметическое двух измерений, выполненных в условиях повторяемости, если выполняется условие приемлемости
|C1-C2|≤0, 01·Cср·rотн,
(3)
где C1 и C2 - результаты определений массовой концентрации (содержания) AOZ, полученные в условиях повторяемости, мкг/дм3 (мкг/кг);
Cср - среднеарифметическое результатов двух определений массовой концентрации AOZ в испытуемой пробе, мкг/дм3 (мкг/кг);
rотн - предел повторяемости (%), приведенный в таблице 1.
Результаты измерений массовой концентрации (содержания) AOZ, мкг/дм3 (мкг/кг), округляют до первого знака после запятой.
10.5 Допускается использование программного обеспечения, позволяющего определять массовую концентрацию (содержание) AOZ в испытуемой пробе по средним значениям ОП, измеренным в лунках с экстрактами градуировочных растворов и испытуемых проб.
С помощью компьютерной системы обработки данных строят градуировочную зависимость оптической плотности раствора от массовой концентрации AOZ и аппроксимируют линейной функцией.
Градуировочная зависимость считается приемлемой, если рассчитанное программным обеспечением значение коэффициента корреляции r2≥0, 98.
За результат измерений принимают среднее арифметическое значение результатов двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости
,
(4)
где C1, C2 - результаты параллельных определений массовой концентрации AOZ, мкг/дм3;
r - значение предела повторяемости для разных диапазонов измерения (см. таблицу 1).
Результат определения массовой концентрации (содержания) AOZ в анализируемой пробе представляют в виде
C±0, 01·U,
(5)
где С - массовая концентрация (содержание) AOZ в испытуемой пробе, мкг/дм3 (мкг/кг);
U - значение относительной расширенной неопределенности при коэффициенте охвата k = 2, % (см. таблицу 1).
11 Контроль точности результатов измерения
Проверку приемлемости результатов измерений, полученных в условиях повторяемости (сходимости) и воспроизводимости, проводят с учетом требований ГОСТ ИСО 5725-6 (раздел 5).
_______________________________
*(1) В Российской Федерации действует ГОСТ Р 12.1.019-2009 "Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".
*(2) В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике".
*(3) В Российской Федерации действует ГОСТ Р 54644-2011 "Мед натуральный. Технические условия".
*(4) Стрип - полоска из восьми лунок.
*(5) Зип-лок - замок, обеспечивающий герметизацию пакета.
Приложение А
(рекомендуемое)
Комплектация тест-системы* "Фуразолидон - ИФА"
В комплектацию тест-системы входят:
Планшет 96-луночный полистироловый стрипованный для иммунологических исследований, с иммобилизованными антителами;
Пакет полиэтиленовый фольгированный с зип-локом;
Пленка полиэтиленовая самоклеящаяся для заклеивания планшетов.
Растворы:
N 1 - AOZ - раствор с известным содержанием AOZ (6, 25 мкг/см3);
N 2 - ФК - конъюгат AOZ с пероксидазой хрена;
N 3 - раствор фосфатного буфера для промывки (20-кратный концентрат), рН (7, 0 - 7, 4);
N 4 - реакционный буферный раствор с добавлением бычьего сывороточного альбумина, рН (7, 0 - 7, 4), стерильный;
N 5 - раствор субстрата на основе 3, 3', 5, 5' - ТМБ с добавлением перекиси водорода;
N 6 - стол-реагент - раствор серной кислоты молярной концентрации 0, 5 моль/дм-3;
N 7 - раствор натрия ацетата молярной концентрации 3, 0 моль/дм3;
N 8 - раствор 2-нитробензальдегида в ДМСО с молярной концентрацией 0, 01 моль/дм3.
_______________________________
* Данный комплект реагентов является рекомендуемым и приведен для удобства пользователей настоящего стандарта.
Приложение Б
(рекомендуемое)
Схема заполнения лунок планшета
Внесение реагентов следует проводить согласно следующей схеме:
|
1
|
2
|
3
|
4
|
5
|
6
|
7
|
8
|
9
|
10
|
11
|
12
|
А
|
K1
|
K1
|
N 4
|
N 4
|
N 12
|
N 12
|
N 20
|
N 20
|
N 28
|
N 28
|
N 36
|
N 36
|
В
|
K2
|
K2
|
N 5
|
N 5
|
N 13
|
N 13
|
N 21
|
N 21
|
N 29
|
N 29
|
N 37
|
N 37
|
С
|
K3
|
K3
|
N 6
|
N 6
|
N 14
|
N 14
|
N 22
|
N 22
|
N 30
|
N 30
|
N 38
|
N 38
|
D
|
K4
|
K4
|
N 7
|
N 7
|
N 15
|
N 15
|
N 23
|
N 23
|
N 31
|
N 31
|
N 39
|
N 39
|
Е
|
K5
|
K5
|
N 8
|
N 8
|
N 16
|
N 16
|
N 24
|
N 24
|
N 32
|
N 32
|
N 40
|
N 40
|
F
|
N 1
|
N 1
|
N 9
|
N 9
|
N 17
|
N 17
|
N 25
|
N 25
|
N 33
|
N 33
|
N 41
|
N 41
|
G
|
N 2
|
N 2
|
N 10
|
N 10
|
N 18
|
N 18
|
N 26
|
N 26
|
N 34
|
N 34
|
N 42
|
N 42
|
Н
|
N 3
|
N 3
|
N 11
|
N 11
|
N 19
|
N 19
|
N 27
|
N 27
|
N 35
|
N 35
|
N 43
|
N 43
|
Приложение В
(рекомендуемое)
Таблица для записи результатов измерения
Таблица В.1
Маркировка варианта
|
Значение ОП
| , % |
| lg | C
|
Массовая концентрация (содержание) AOZ
|
по лункам
|
среднее
|
в экстракте с, мкг/дм3
|
в исследуемой пробе С, мкг/см3 (мкг/кг)
|
K1
| | | | |
0
| |
K1
| |
K2
| | | |
0, 3
|
0, 5
| |
K2
| |
K3
| | | |
0, 4
|
2, 5
| |
K3
| |
K4
| | | |
1, 1
|
12, 5
| |
K4
| |
K5
| | | |
1, 8
|
62, 5
| |
K5
| |
N 1
| | | | | | |
N 1
| |
N ...
| | | | | | |
N ...
| |
N 42
| | | | | | |
N 42
| |
N 43
| | | | | | |
N 43
| | | | | | |
Комментарии (0)
Чтобы оставить комментарий вам необходимо авторизоваться